發(fā)布時(shí)間：2017-12-19 01:18

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素刺激下不同靜壓力下人牙周膜成纖維細(xì)胞對(duì)IL-17等促炎因子表達(dá)的影響初探

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【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕緦?shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞(Human periodontal ligament fibroblasts, HPDLF)并以牙齦卟啉單胞菌內(nèi)毒素(Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharide, Pg.LPS)刺激建立好的HPDLF體外靜壓力模型,檢測(cè)IL-17等炎性細(xì)胞因子在HPDLF中的表達(dá)情況,探討靜壓力及Pg.LPS雙重作用下IL-17A、IL-6及IL-1β在人牙周膜成纖維細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)變化,研究正畸力及炎癥對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞的聯(lián)合作用,為牙周炎環(huán)境下的正畸牙移動(dòng)及相關(guān)性牙根吸收的具體機(jī)制提供新思路。實(shí)驗(yàn)方法：1.采用組織塊培養(yǎng)法對(duì)來源于健康前磨牙根中1/3的牙周膜進(jìn)行分離與培養(yǎng)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry,ICC) SP法對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行來源鑒定,并采用噻唑蘭比色法(MTT)繪制HPDLF生長(zhǎng)曲線,建立HPDLF細(xì)胞系；2.MTT法檢測(cè)濃度1～10μg/ml對(duì)HPDLF增殖活性的影響；3.體外用濃度為4μg/ml的內(nèi)毒素刺激HPDLF,并施以0～5 g/cm2靜壓力模擬正畸加力。采用熒光定量PCR檢測(cè)內(nèi)毒素刺激下HPDLF在0-5g/cm2靜壓力加載24 h后IL-17AmRNA、IL-6mRNA的表達(dá)情況。4.采用ELISA檢測(cè)內(nèi)毒素刺激下HPDLF在0～5g/cm2靜壓力加載24 h后IL-17A、IL-6和IL-1β蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.所培養(yǎng)的細(xì)胞為長(zhǎng)梭形,呈放射狀或漩渦狀生長(zhǎng),生長(zhǎng)性狀穩(wěn)定,經(jīng)細(xì)胞來源鑒定為中胚層來源細(xì)胞,結(jié)合取材部位可鑒定為HPDLF。 HPDLF的生長(zhǎng)曲線呈“S”形,從接種的第2天開始,細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,細(xì)胞增殖速度在第6天變緩進(jìn)入平臺(tái)期。2.1～4μg/mlPg.LPS對(duì)HPDLF的增殖有明顯促進(jìn)作用,其中,4μg/ml濃度組中HPDLF細(xì)胞活力最強(qiáng),5～7μg/ml濃度組中HPDLF細(xì)胞活力逐漸下降,8～10μg/ml濃度組細(xì)胞活力明顯受到抑制。3.經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè),單純靜壓力組及Pg.LPS+靜壓力組中,IL-17A、IL-6的mRNA相對(duì)表達(dá)量均呈力值相關(guān)性,隨著靜壓力值的遞增而表達(dá)增強(qiáng),表達(dá)量分別在4g/cm2組和3g/cm2組達(dá)最大值,隨后隨力值的增大而表達(dá)量減�。辉谕攘χ迪�,EL-17A、IL-6mRNA在單純靜壓力組中的表達(dá)高于Pg.LPS+靜壓力組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.經(jīng)ELISA檢測(cè),單純靜壓力組及Pg.LPS+靜壓力組中,IL-1β、 IL-17A、IL-6的蛋白表達(dá)量均呈力值相關(guān)性,隨著靜壓力值的遞增而表達(dá)增強(qiáng),其表達(dá)量分別在4 g/cm2組和3 g/cm2組達(dá)最大值,隨后隨力值的增大而表達(dá)量減�。辉谕攘χ迪�,IL-1β、IL-17A、IL-6蛋白在單純靜壓力組中的表達(dá)高于Pg.LPS+靜壓力組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1.采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)HPDLF原代細(xì)胞,成功地建立了人牙周膜成纖維細(xì)胞系,第4～6代細(xì)胞,增殖旺盛,生物學(xué)性狀穩(wěn)定。2.過高濃度的內(nèi)毒素會(huì)抑制HPDLF增殖,而適宜濃度的內(nèi)毒素能促進(jìn)HPDLF增殖,其中4μg/ml為最適濃度。3.內(nèi)毒素能刺激HPDLF對(duì)IL-17A、DL-6及IL-1β等炎性細(xì)胞因子的表達(dá),且表達(dá)量呈力值相關(guān)性,在3 g/cm2靜壓力刺激下表達(dá)量最大；但與靜壓力聯(lián)合作用時(shí)對(duì)IL-17A、IL-6及IL-1β等炎性細(xì)胞因子表達(dá)促進(jìn)作用減小。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783.5

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1 廖文琴;陳永安;;靜壓力大小對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原表達(dá)影響的研究[J];廣東牙病防治;2011年11期

2 馬軍利,王美青,張e，

本文編號(hào)：1306349