本文關(guān)鍵詞：唑來膦酸對頜骨影響的組織學(xué)觀察

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【摘要】：目的:雙膦酸鹽類藥物在治療骨質(zhì)疏松和惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移方面取得顯著成果,但隨著該類藥物的廣泛應(yīng)用,雙膦酸鹽性頜骨壞死(Bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaws,BRONJ)作為不良反應(yīng)之一,在國際上引起了廣泛的注意,但其機(jī)制尚不明確。本研究觀察SD大鼠在應(yīng)用唑來膦酸后下頜骨的組織學(xué)改變,探究雙膦酸鹽性頜骨壞死發(fā)生前頜骨組織形態(tài)學(xué)的變化,為進(jìn)一步研究雙膦酸鹽性頜骨壞死提供基本數(shù)據(jù)和研究基礎(chǔ),為臨床預(yù)防和治療提供理論指導(dǎo)。方法:選擇健康3月齡的雌性SD大鼠36只,體重220±20g,自由攝食水,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組,每組12只。A組(單純應(yīng)用唑來膦酸組):唑來膦酸經(jīng)腹腔注射,濃度0.1mg/ml,劑量0.2mg/kg,每兩天一次,持續(xù)8周。生理鹽水按照每100g體重0.5m L灌胃,每日一次,持續(xù)8周。B組(唑來膦酸聯(lián)合鈣劑組):唑來膦酸經(jīng)腹腔注射,濃度0.1mg/ml,劑量0.2mg/kg,每兩天一次,持續(xù)8周。將濃度0.84%鈣爾奇(碳酸鈣+維生素D)混懸液按照每100g體重0.5m L灌胃,每日一次,持續(xù)8周。C組(對照組):按照SD大鼠體重2ml/kg腹腔注射無菌生理鹽水,每兩天一次,持續(xù)8周。生理鹽水按照每100g體重0.5m L灌胃,每日一次,持續(xù)8周。8周后,三組動物均停藥,每組12只大鼠再隨機(jī)分為拔牙組(3只)和非拔牙組(9只),所有動物均存活,在處死前無異常表現(xiàn)及不良反應(yīng)。拔牙組:在10%水合氯醛全麻下拔除SD大鼠左側(cè)下頜第一臼齒,而后繼續(xù)飼養(yǎng)4周處死取下頜骨。非拔牙組:在用藥開始后的第8周、10周、12周時分別將每組SD大鼠隨機(jī)處死3只,取大鼠下頜骨。所有標(biāo)本置于10%甲醛溶液中固定48小時,經(jīng)流水漂洗24小時,PBS緩沖液(0.01mol/L,PH=7.4)漂洗3min后,置于10%乙二胺四乙酸二鈉溶液中脫鈣,每兩天更換一次脫鈣液,期間每天充分震蕩。脫鈣1個半月后,流水漂洗24小時,10%甲醛溶液固定30mim,乙醇逐級脫水,浸蠟,常規(guī)石蠟包埋,沿矢狀位制作厚度為4μm的組織切片,HE染色進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察,并使用計(jì)算機(jī)醫(yī)學(xué)數(shù)碼病理圖像分析系統(tǒng)Med6.0進(jìn)行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)檢測。使用免疫組化方法,對下頜骨血管的內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)進(jìn)行檢測,并用專業(yè)圖像分析軟件Image-pro plus6.0測量VEGF平均光密度值(Integrated optical density,IOD)。使用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的形式表示,每項(xiàng)指標(biāo)的各組數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn),服從正態(tài)分布和方差齊性(Homogeneity of variance),各組數(shù)據(jù)采用析因設(shè)計(jì)方差分析,兩兩比較采用SNK(Student-Newman-Keuls)檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 大體觀察A、B、C組中非拔牙組的SD大鼠在8周、10周、12周時,下頜磨牙區(qū)牙齦無紅腫及出血,無滲出物及瘺道,下頜骨無死骨暴露。A、B、C組中拔牙組SD大鼠在拔牙后4周時,拔牙創(chuàng)愈合情況出現(xiàn)差異,A組大鼠拔牙創(chuàng)愈合差,周圍牙齦破潰,紅腫;B組拔牙創(chuàng)愈合較差,牙齦色紅,A、B組均未見死骨暴露;C組SD大鼠拔牙創(chuàng)愈合良好,軟組織無紅腫,無出血。2 組織學(xué)觀察開始用藥后8周:A組根尖周圍可見炎性浸潤,骨小梁排列紊亂,炎性細(xì)胞密集,主要為中性粒細(xì)胞,多核巨細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,漿細(xì)胞等,其間分布的毛細(xì)血管,部分骨小梁破壞吸收,未見死骨形成,其范圍主要局限在根尖周圍,牙周膜和其它部位未見明顯炎性浸潤;非根尖區(qū)骨小梁粗大,連接成網(wǎng)狀,骨髓間隙小,骨密質(zhì)較厚。B組:根尖區(qū)域亦可見炎性浸潤,但較A組范圍小,骨小梁周圍分布大量淋巴細(xì)胞,漿細(xì)胞,中性粒細(xì)胞等,部分骨小梁破壞吸收;非根尖區(qū)域骨小梁排列緊密且規(guī)律,連接成網(wǎng)狀。C組:根尖區(qū)骨小梁排列規(guī)律,骨小梁較細(xì),骨髓間隙大,骨小梁連接成網(wǎng)狀,根尖下方無明顯的炎性浸潤,骨小梁無破壞吸收,沒有形成明顯炎性浸潤區(qū),牙周膜周圍無炎性細(xì)胞分布。開始用藥后10周:A和B組根尖周圍仍可見大范圍的炎性浸潤,范圍較8周時增大。炎性浸潤區(qū)中性粒細(xì)胞,漿細(xì)胞和淋巴細(xì)胞更加密集,浸潤區(qū)骨小梁排列紊亂,骨小梁破壞吸收明顯,未見死骨形成,散在分布著毛細(xì)血管。但B組炎性浸潤范圍較A組局限。非根尖區(qū)內(nèi)骨小梁粗大,骨髓間隙小,骨小梁排列規(guī)律,無破壞吸收,牙周膜周圍無炎性細(xì)胞分布。C組:根尖區(qū)骨小梁排列規(guī)律,根尖下方可見散在炎性細(xì)胞分布,骨小梁無破壞吸收,周圍區(qū)域和牙周膜未見炎性細(xì)胞浸潤。開始用藥后12周:A、B組中根尖區(qū)可見大范圍炎性細(xì)胞浸潤,骨小梁破壞溶解程度高于10周,骨小梁排列紊亂,未見死骨形成,炎性浸潤范圍A組大于B組。非根尖區(qū)骨小梁排列緊密,骨小梁粗大,連接成網(wǎng)狀或片狀,骨髓間隙小,牙周膜周圍無炎性細(xì)胞分布。C組中骨小梁排列規(guī)則,連接成片,根尖周圍區(qū)無明顯炎性浸潤區(qū),骨小梁粗大,無破壞吸收,牙周膜周圍無炎性細(xì)胞分布。開始用藥后12周拔牙組:拔牙后A、B組根尖區(qū)炎性浸潤范圍較12周非拔牙組變大,拔牙創(chuàng)內(nèi)未見新生的骨小梁,根尖區(qū)炎性細(xì)胞更加密集,范圍更廣,骨小梁破壞吸收更明顯,但未見死骨形成。C組拔牙窩可見不成熟的骨小梁,排列疏松,骨小梁纖細(xì),連接成網(wǎng)狀。根尖區(qū)可見少許炎性細(xì)胞分布,骨小梁排列規(guī)律,無破壞吸收,與12周未拔牙的C組根尖區(qū)比較無明顯差異。3 骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)檢測3.1 下頜骨的骨密質(zhì)開始用藥后8周、10周、12周大鼠下頜骨骨密質(zhì)厚度比較,組別和時間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無交互作用。下頜骨骨密質(zhì)各組間比較結(jié)果:C組A組B組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。用藥后8周、10周、12周三個時間點(diǎn)骨密質(zhì)厚度比較無顯著性差異(P0.05)。3.2 下頜骨根尖區(qū)的骨松質(zhì)開始用藥后8周、10周、12周下頜骨根尖區(qū)骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長、骨小梁寬度和炎性浸潤程度比較,組別和時間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無交互作用。不同組別間下頜骨根尖區(qū)骨松質(zhì)的骨小梁面積和骨小梁周長結(jié)果比較:A組B組C組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,各組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);各組間骨小梁寬度比較結(jié)果:A組B組C組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,A組和B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),A組和C組之間、B組和C組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);各組間炎癥浸潤程度比較結(jié)果:A組B組C組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,A組和B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),A組和C組之間、B組和C組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。用藥后8周、10周、12周三個時間點(diǎn)下頜骨根尖區(qū)骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長、骨小梁寬度和炎性浸潤比較無顯著性差異(P0.05)。開始用藥12周后,拔牙組與非拔牙組下頜骨根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長、骨小梁寬度和炎性浸潤比較,組別和是否拔牙的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無交互作用。不同組別間下頜骨根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長、骨小梁寬度比較結(jié)果:A組B組C組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,A組和B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),A組和C組之間、B組和C組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。各組間炎性浸潤比較結(jié)果:C組B組A組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,A組和B組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),A組和C組之間、B組和C組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。在拔牙組和非拔牙組間下頜骨根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長、骨小梁寬度比較結(jié)果:非拔牙組高于拔牙組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),炎性浸潤的比較無顯著性差異(P0.05)。3.3 下頜骨非根尖區(qū)的骨松質(zhì)開始用藥后8周、10周、12周下頜骨非根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長、骨小梁寬度比較,組別和時間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無交互作用。各組間下頜骨非根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長的比較結(jié)果:C組A組B組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,各組間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),骨小梁寬度的比較三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。在8周、10周、12周三個時間點(diǎn)下頜骨非根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長、骨小梁寬度的比較結(jié)果,骨小梁面積:S8S10S12,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,10周與12周之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),8周與10周、8周與12周之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。骨小梁周長:C8C10C12,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,8周與10周之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),8周與12周、10周與12周之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。骨小梁寬度:W8W10W12,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,8周與10周、10周與12周之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),8周與12周之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4 下頜骨血管VEGF的平均光密度值開始用藥后8周、10周、12周三組大鼠下頜骨血管VEGF平均光密度值的比較,對組別和時間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有交互作用。各組間下頜骨血管VEGF的平均光密度值比較:A組B組C組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,各組間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);在8周、10周、12周三個時間點(diǎn)下頜骨血管VEGF的平均光密度值比較:IOD(8周)IOD(10周)IOD(12周),統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,各時間點(diǎn)間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。開始用藥后12周時,拔牙組與非拔牙組下頜骨血管VEGF的平均光密度值比較結(jié)果:對組別和是否拔牙的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有交互作用。拔牙組與非拔牙組間下頜骨血管中VEGF的平均光密度值比較:拔牙組VEGF的平均光密度值高于非拔牙組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,兩組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。各組間下頜骨血管中VEGF的平均光密度值比較:A組B組C組,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,各組間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1 全身應(yīng)用唑來膦酸對大鼠下頜骨的組織形態(tài)是有影響的,下頜骨的骨密質(zhì)厚度增加,非根尖區(qū)骨松質(zhì)的骨密度增加,而根尖區(qū)骨松質(zhì)的骨小梁排列紊亂,骨小梁周圍出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤。2 全身應(yīng)用唑來膦酸后,大鼠下頜骨血管形成受到抑制,血液供應(yīng)減少。3 大鼠全身應(yīng)用唑來膦酸后,在下頜骨發(fā)生壞死之前頜骨的組織形態(tài)已經(jīng)發(fā)生了變化,這可能是拔牙或頜骨手術(shù)后造成頜骨壞死發(fā)生的病理基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R782

【參考文獻(xiàn)】

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1 馮馭馳;趙燕;;雙膦酸鹽類藥物相關(guān)頜骨壞死發(fā)病機(jī)制及治療研究進(jìn)展[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2014年08期

2 張福成;趙靜;蔣曄;李艷榮;;雙膦酸鹽抗腫瘤作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2008年18期

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