本文關(guān)鍵詞：變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因groES-groEL突變的檢測(cè)

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【摘要】：目的： 齲病是一種發(fā)生在牙體硬組織中的慢性進(jìn)行性疾病，在以細(xì)菌為主，多種因素共同作用下發(fā)生。變形鏈球菌是公認(rèn)的主要致齲菌，它能利用口腔內(nèi)碳水化合物產(chǎn)酸導(dǎo)致脫礦化，進(jìn)而破壞有機(jī)質(zhì)，形成齲洞。近些年氟化物的防齲功能已得到廣泛認(rèn)知，并應(yīng)用于臨床。氟化物防齲主要是因?yàn)榉c羥基磷灰石結(jié)合，從而降低牙釉質(zhì)脫礦、促進(jìn)再礦化，并能抑制口腔中致齲菌的生長和產(chǎn)酸過程。但口腔局部高濃度氟化物的存在可導(dǎo)致耐氟菌株的出現(xiàn)，國內(nèi)外學(xué)者已有研究證明變形鏈球菌耐氟菌株較其親代擁有更強(qiáng)的致齲性和對(duì)氟化物的抗性。熱休克反應(yīng)是細(xì)胞應(yīng)對(duì)脅迫環(huán)境時(shí)，所產(chǎn)生的一系列生理生化反應(yīng)，它受各種壓力因子的誘導(dǎo)，包括溫度、酸、H2O2等。研究表明，變形鏈球菌groES-groEL基因在酸應(yīng)激反應(yīng)中受到激發(fā)，表達(dá)出GroEL分子伴侶，輔助新合成的及變性的蛋白折疊、組裝、轉(zhuǎn)運(yùn)及降解，從而增強(qiáng)其酸適應(yīng)性。本課題組前期實(shí)驗(yàn)已檢測(cè)出變形鏈球菌耐氟菌株的耐酸相關(guān)基因dltC，Dgk，，comD，ccpA發(fā)生了個(gè)別位點(diǎn)的突變，但groES-groEL基因的突變情況尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對(duì)變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因groES-groEL進(jìn)行突變位點(diǎn)的檢測(cè)，從基因水平上完善了變形鏈球菌耐氟菌株耐酸機(jī)制，更為氟化物的合理應(yīng)用、研發(fā)更有效的防齲及治齲方法提供了理論基礎(chǔ)。 方法： 1.變形鏈球菌耐氟菌株（UA159-FR）的培養(yǎng)與鑒定 2.UA159-FR全基因組提取 3.目的基因groES-groEL擴(kuò)增并純化 4.重組質(zhì)粒的構(gòu)建：目的基因PCR產(chǎn)物與PMD-18T載體連接，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中。 5.質(zhì)粒的提取及鑒定 6.送檢測(cè)序 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)用菌為UA159-FR鑒定成功 2.成功構(gòu)建重組質(zhì)粒 3.完成測(cè)序，使用BLAST將測(cè)序結(jié)果與Genbank上公布的變形鏈球菌UA159的groES-groEL基因序列進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)變形鏈球菌耐氟菌株groEL基因與親代基因序列完全相同，groES基因有一處發(fā)生突變，位于1834963（T→C）。 結(jié)論： 成功構(gòu)建了變形鏈球菌耐氟菌株耐酸相關(guān)基因groES-groEL重組質(zhì)粒，并進(jìn)行鑒定及基因測(cè)序，為變形鏈球菌耐氟菌株耐酸性的認(rèn)識(shí)及今后齲病的防治提供了理論基礎(chǔ)和新思路。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781.1;R440

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號(hào)：1264821