本文關(guān)鍵詞：下頜前移矯治器對(duì)OSAHS兔頦舌肌NF-κB和TNF-α、IL-6的影響

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【摘要】：目的:本研究擬通過(guò)建立新西蘭大白兔OSAHS模型及其下頜前移矯治器(mandibular advancement device,MAD)的治療,研究OSAHS以及MAD治療對(duì)頦舌肌組織(genioglossus,GG)中NF-κB P65及炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的影響。探討OSAHS對(duì)GG損害的可能炎性機(jī)制,為OSAHS導(dǎo)致GG損害的發(fā)病機(jī)理研究以及MAD治療OSAHS對(duì)GG影響的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。方法:1動(dòng)物分組:純種雄性新西蘭大白兔18只,6月齡,體重3.0kg~3.5kg。隨機(jī)分為3組,每組6只,分別是1)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征組(Group OSAHS)2)下頜前移矯治器組(Group MAD)和3)正常對(duì)照組(control group)。2動(dòng)物模型的建立:造模前將三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于仰臥位,進(jìn)行上氣道螺旋CT掃描(美國(guó)Lightspeed GE16層型螺旋CT機(jī))和多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)(美國(guó)邦德Monet型多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)系統(tǒng)),以排除先天性O(shè)SAHS或解剖性上氣道狹窄。1%戊巴比妥鈉對(duì)OSAHS組和MAD組動(dòng)物行全身麻醉后,在距軟硬腭交界1.5cm處的軟腭黏膜下肌層注射聚丙烯酰胺水凝膠混合物2ml。注射完成后,應(yīng)用以上同樣方法拍攝上氣道螺旋CT并進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè),以確定OSAHS動(dòng)物模型建立成功。OSAHS動(dòng)物模型建立成功后,MAD組的OSAHS兔適應(yīng)3天后佩戴下頜前移矯治器(MAD)。MAD由自凝牙托粉和牙托水制作而成,用玻璃離子粘結(jié)劑粘固于上前牙。當(dāng)MAD戴入兔口內(nèi)后,其前斜面與上頜平面成60°角,導(dǎo)下頜前移3mm~4mm,咬合打開(kāi)2mm~3mm。建模完成后,應(yīng)用以上同樣方法拍攝上氣道螺旋CT并進(jìn)行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè),以評(píng)估MAD的療效。3仰臥位睡眠建模完成后第4天,檢查實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射傷口,無(wú)破潰、無(wú)感染,進(jìn)食、進(jìn)水無(wú)異常。接下來(lái)的8周,每日上午按5ml/kg~6ml/kg的劑量對(duì)三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)口腔灌注10%水合氯醛,使其仰臥位睡眠2小時(shí)~4小時(shí)。其余時(shí)間正常進(jìn)食進(jìn)水自由活動(dòng)。4標(biāo)本的采集及處理8周后,術(shù)前24小時(shí)禁食禁水,經(jīng)耳緣靜脈以2ml/kg的劑量注射1%戊巴比妥鈉,對(duì)動(dòng)物行全身麻醉。將兔置于仰臥位并固定四肢,打開(kāi)口腔后將舌抬起,逐層分離舌下筋膜、肌肉暴露頦舌肌,將頦舌肌的兩端固定后小心離斷,用預(yù)冷的生理鹽水沖洗表面血液,將每只兔的頦舌肌組織剪成大小、體積相似的兩塊,液氮速凍,-80℃凍存。5頦舌肌(GG)細(xì)胞核中NF-κB P65蛋白的表達(dá)量測(cè)定按照核蛋白提取試劑盒說(shuō)明書(shū)抽提三組動(dòng)物GG中的核蛋白,然后用BCA法測(cè)定核蛋白的蛋白濃度,確定蛋白上樣量。蛋白質(zhì)免疫印跡分析法(Western Blot)測(cè)定NF-κB P65蛋白相對(duì)于細(xì)胞核內(nèi)參蛋白—組蛋白3(Histone 3,H3)的表達(dá)量。6頦舌肌(GG)中炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的濃度測(cè)定按照兔腫瘤壞死因子α(TNF-α)和兔白細(xì)胞介素6(IL-6)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)測(cè)定三組動(dòng)物GG中的TNF-α和IL-6在波長(zhǎng)為450nm下的吸光度值,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的濃度。7相關(guān)性分析將三組動(dòng)物GG中NF-κB P65蛋白相對(duì)表達(dá)量與TNF-α和IL-6的濃度以及AHI、Sa O2進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果:1動(dòng)物的一般情況:建模3天后,各組動(dòng)物均能正常飲水、進(jìn)食、自由活動(dòng)。三組動(dòng)物在建模前、建模2周以及建模8周后的體重?zé)o明顯差異。它們?cè)谘雠P位睡眠時(shí),OSAHS組鼾聲明顯且不均勻,睡眠過(guò)程中易驚醒;MAD組部分呼吸音較重或輕微打鼾,基本平穩(wěn);正常對(duì)照組呼吸均勻,狀態(tài)平穩(wěn)。2上氣道螺旋CT結(jié)果:OSAHS組與MAD組、對(duì)照組比較,軟腭1/4點(diǎn)1/2點(diǎn)和3/4點(diǎn)處上氣道矢狀向間隙及上氣道橫截面積均明顯減小,差異有顯著性(P0.05);而MAD組較對(duì)照組上述指標(biāo)雖然減小,但差異無(wú)顯著性(P0.05)。3多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)記錄:OSAHS組動(dòng)物與MAD組、對(duì)照組相比,呼吸暫停低通氣指數(shù)升高、血氧飽和度下降、睡眠效率減低,差異有顯著性(P0.05);MAD組較對(duì)照組以上指標(biāo)的變化無(wú)顯著性差異(P0.05)。4頦舌肌(GG)細(xì)胞核中NF-κB P65蛋白相對(duì)表達(dá)量:OSAHS組、MAD組和正常對(duì)照組的NF-κB P65蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.44±0.08、0.30±0.09、0.24±0.07。OSAHS組較MAD組、對(duì)照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);MAD組與對(duì)照組相比升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5頦舌肌(GG)中TNF-α和IL-6的濃度:OSAHS組、MAD組和正常對(duì)照組的TNF-α濃度分別為96.80±18.00pg/ml、71.16±20.18pg/ml、64.80±19.51pg/ml。OSAHS組較MAD組、對(duì)照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);MAD組與對(duì)照組相比升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。OSAHS組、MAD組和正常對(duì)照組的IL-6濃度分別為93.30±16.97pg/ml、69.25±14.28pg/ml、63.49±13.15pg/ml。OSAHS組較MAD組、對(duì)照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);MAD組與對(duì)照組相比升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6 GG細(xì)胞核中NF-κB P65與TNF-α和IL-6相關(guān)性分析:NF-κB P65與TNF-α和IL-6濃度呈明顯正相關(guān),r值分別0.886、0.862,P值均為0.000。7 GG中NF-κB P65與AHI和Sa O2相關(guān)性分析:NF-κB P65與AHI成正相關(guān),r值為0.722,P值為0.000;NF-κB P65與SaO_2成負(fù)相關(guān),r值為-0.685,P值為0.000。結(jié)論:1 OSAHS會(huì)引起頦舌肌中NF-κB活化增加,TNF-α、IL-6濃度升高,這些炎癥指標(biāo)水平的上升可能是頦舌肌疲勞性增加的機(jī)制之一。2下頜前移矯治器(MAD)治療OSAHS可減少頦舌肌中NF-κB的活化,降低TNF-α、IL-6濃度,對(duì)頦舌肌起保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R782.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1262971