本文關(guān)鍵詞：炎癥環(huán)境中雷帕霉素對(duì)骨重塑的影響

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【摘要】：研究背景: 慢性牙周炎作為口腔臨床領(lǐng)域中的一種常見(jiàn)疾病，可引起患者牙槽骨吸收，牙槽骨高度降低，輕者可影響患者的咀嚼功能，重者可影響患者自體牙的保存及種植術(shù)后種植體的成活率，嚴(yán)重危害患者身心健康。因而，如何防治慢性牙周炎，促進(jìn)牙槽骨再生成為口腔醫(yī)學(xué)工作者的研究熱點(diǎn)�？紤]到免疫因素在慢性牙周炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵作用，近年來(lái)有學(xué)者提出免疫抑制劑雷帕霉素治療慢性牙周炎，以期獲得抑制炎癥、促進(jìn)骨再生的效果。國(guó)內(nèi)外已開(kāi)展大量關(guān)于雷帕霉素對(duì)骨重塑影響的研究，但仍未取得明確結(jié)論，而炎癥環(huán)境中雷帕霉素對(duì)骨重塑的影響未見(jiàn)大量報(bào)道，因此雷帕霉素在口腔臨床工作中的應(yīng)用仍存在眾多問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)兩部分探究雷帕霉素單獨(dú)作用對(duì)牙槽骨重建的影響，并通過(guò)體外模擬慢性牙周炎炎癥環(huán)境模型，明確雷帕霉素單獨(dú)作用及其在炎癥環(huán)境中對(duì)骨重塑的影響。 目的： 本實(shí)驗(yàn)分別通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)篩選適宜應(yīng)用的雷帕霉素濃度，考察正常環(huán)境中及慢性牙周炎模擬炎癥環(huán)境中雷帕霉素對(duì)破骨分化及成骨分化的影響，推測(cè)其可能機(jī)理，并通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)明確雷帕霉素對(duì)大鼠拔牙窩骨重塑的影響，為雷帕霉素的口腔臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)，以期研制新型慢性牙周炎的臨床療法。 實(shí)驗(yàn)方法： 本研究設(shè)計(jì)為以下三個(gè)部分： 1.破骨分化作用研究:分別在正常培養(yǎng)條件和LPS誘導(dǎo)炎癥條件下培養(yǎng)Raw264.7細(xì)胞，加入不同濃度雷帕霉素后1天、3天、5天通過(guò)RT-PCR探究不同濃度雷帕霉素對(duì)正常環(huán)境中Raw264.7細(xì)胞破骨分化的影響和炎癥環(huán)境下雷帕霉素對(duì)骨免疫的影響，并通過(guò)加入PI3K/Akt通路特異性拮抗劑Ly294002探究雷帕霉素影響破骨分化可能的分子機(jī)制； 2.成骨分化作用研究:分別在正常培養(yǎng)條件和LPS誘導(dǎo)炎癥條件下培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞，加入雷帕霉素3天、7天、14天、21天時(shí)通過(guò)堿性磷酸酶、茜素紅染色、RT-PCR等檢測(cè)手段探究雷帕霉素分別在正常環(huán)境中和LPS誘導(dǎo)炎癥環(huán)境中對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨分化的影響。 3.體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):建立Wistar大鼠下頜切牙拔除模型，分別向拔牙窩內(nèi)注入PBS、20μg雷帕霉素、100μg雷帕霉素，于術(shù)后2周、4周、8周下頜骨分別測(cè)量剩余牙槽嵴高度及組織學(xué)切片探究不同濃度雷帕霉素對(duì)大鼠拔牙后牙槽骨吸收及拔牙窩骨再生的影響； 結(jié)果： 1.破骨分化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明雷帕霉素單獨(dú)作用可明顯增強(qiáng)破骨分化相關(guān)基因的表達(dá)，且LPS存在時(shí)此作用明顯增強(qiáng)。加入PI3K/Akt通路特異性拮抗劑Ly294002后，破骨分化相關(guān)基因表達(dá)水平明顯下調(diào)，說(shuō)明雷帕霉素可能是通過(guò)mTOR/Akt這一通路發(fā)揮作用； 2.成骨分化實(shí)驗(yàn)表明雷帕霉素單獨(dú)作用不能增強(qiáng)BMSCs細(xì)胞堿性磷酸酶、成骨相關(guān)基因的表達(dá)及鈣結(jié)節(jié)的形成，而在LPS誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境中，雷帕霉素可明顯減弱炎癥因子對(duì)BMSCs細(xì)胞成骨分化相關(guān)基因表達(dá)、堿性磷酸酶活性及鈣結(jié)節(jié)的形成的抑制作用。 3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示2μg/μl雷帕霉素在2周、4周、8周時(shí)對(duì)牙槽嵴吸收無(wú)明顯影響，而10μg/μl雷帕霉素作用8周后可減少牙槽嵴吸收；組織學(xué)切片表明兩種濃度雷帕霉素均可抑制拔牙窩內(nèi)骨再生，并體現(xiàn)出濃度依賴性作用。 結(jié)論： 1.雷帕霉素可促進(jìn)破骨分化，且在炎癥環(huán)境中這一作用明顯增強(qiáng)，可能與mTOR/Akt通路相關(guān)。 2.雷帕霉素單獨(dú)作用不能促進(jìn)成骨分化，但可減弱炎癥因子對(duì)成骨分化的抑制作用。 3.低濃度（2μg/μl）雷帕霉素不能影響拔牙后牙槽嵴吸收速度，而高濃度（10μg/μl）雷帕霉素可減緩拔牙術(shù)后剩余牙槽嵴吸收速度。兩種濃度（2μg/μl和10μg/μl）雷帕霉素均可抑制拔牙窩內(nèi)骨再生，，并體現(xiàn)出濃度依賴性作用。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R781.42

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