發(fā)布時(shí)間：2017-11-24 23:00

  本文關(guān)鍵詞：檸檬醛對(duì)雞胚唇部組織BAMBI時(shí)空表達(dá)的影響

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【摘要】：目的通過(guò)將攜帶有檸檬醛的載體微珠植入到正常發(fā)育的20期雞胚右側(cè)的鼻窩外胚層組織上,局部誘發(fā)雞胚唇裂畸形,檢測(cè)檸檬醛對(duì)雞胚唇部組織BAMBI時(shí)空表達(dá)的影響,探討并闡明BAMBI對(duì)雞胚唇部組織發(fā)育及唇畸形缺損形成過(guò)程中的作用,為進(jìn)一步探索人類(lèi)唇部發(fā)育和唇裂的發(fā)生機(jī)制奠定基礎(chǔ),為人類(lèi)唇裂的早期發(fā)現(xiàn)及早期治療提供理論依據(jù)。方法1、建立穩(wěn)定的雞胚唇裂模型通過(guò)本課題組的前期摸索,檸檬醛誘發(fā)畸形的最佳濃度為0.6g/ml,已經(jīng)成功建立了穩(wěn)定的雞胚唇裂動(dòng)物模型。本研究同樣運(yùn)用0.6g/m1的檸檬醛濃度,將攜帶有最佳濃度檸檬醛的載體微珠植入到正常發(fā)育的20期雞胚右側(cè)的鼻窩外胚層組織上,復(fù)制穩(wěn)定的雞胚唇裂動(dòng)物模型。2、地高辛標(biāo)記雞胚BAMBI基因RNA探針的制備將孵化至24期的新鮮雞胚取出,提總RNA,用RT-PCR的方法得到BAMBI的cDNA,將回收的cDNA插入到PGEM-T質(zhì)粒載體中,得到攜帶有BAMBI的PGEM-T重組質(zhì)粒,用限制性?xún)?nèi)切酶將重組質(zhì)粒線(xiàn)性化,利用質(zhì)粒上的SP6和T7啟動(dòng)子,在SP6RNA聚合酶和T7聚合酶的作用下,分別體外轉(zhuǎn)錄合成地高辛標(biāo)記的BAMBI基因的RNA反義探針和正義探針。3、整胚原位雜交檢測(cè)檸檬醛對(duì)雞胚唇部組織BAMBI時(shí)空表達(dá)的影響將180只正常發(fā)育的20期雞胚隨機(jī)分成正�？瞻捉M、DMSO陰性對(duì)照組、反義探針實(shí)驗(yàn)組和正義探針實(shí)驗(yàn)組4組,每組40只。正�？瞻捉M：同期正常發(fā)育未經(jīng)任何處理的雞胚；DMSO陰性對(duì)照組：植入攜帶有DMSO的微珠；反義探針實(shí)驗(yàn)組：植入攜帶有最佳濃度檸檬醛的微珠；正義探針實(shí)驗(yàn)組：植入攜帶有最佳濃度檸檬醛的微珠。上述各組經(jīng)處理后,繼續(xù)孵化至21、22、23、24、25、26、27、28期,每期采集5個(gè)標(biāo)本,用整胚原位雜交的方法檢測(cè)BAMBI在面部組織的時(shí)空表達(dá)變化。其中,正�？瞻捉M、DMSO陰性對(duì)照組、反義探針實(shí)驗(yàn)組用BAMBI反義探針檢測(cè),正義探針實(shí)驗(yàn)組用BAMBI正義探針檢測(cè)。結(jié)果1、穩(wěn)定的雞胚唇裂模型建立結(jié)果：根據(jù)本課題組的前期摸索,利用0.6g/m1的檸檬醛濃度,成功復(fù)制了穩(wěn)定的雞胚唇裂動(dòng)物模型。2、雞胚BAMBI基因RNA探針的制備結(jié)果：成功構(gòu)建了BAMBI/PGEM-T重組質(zhì)粒,并通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄得到了正義和反義的RNA探針。此RNA探針長(zhǎng)858bp,正義探針與BAMBI的mRNA堿基序列相同,反義探針與BAMBI的mRNA堿基序列互補(bǔ),并帶有地高辛標(biāo)記。3、整胚原位雜交結(jié)果：正�？瞻捉M、DMSO陰性對(duì)照組和反義探針實(shí)驗(yàn)組成功檢測(cè)到BAMBI的時(shí)空表達(dá)變化,正義探針組未能檢測(cè)到BAMBI的表達(dá)。其中,BAMBI在雞胚的額鼻突、側(cè)鼻突、上頜突和下頜突均有表達(dá)。反義探針組較空白組、DMSO組BAMBI同期表達(dá)水平低,反義探針組處理側(cè)較未處理側(cè)BAMBI表達(dá)水平低。結(jié)論本研究表明,利用檸檬醛可誘發(fā)雞胚唇部發(fā)育畸形,檸檬醛可抑制BAMBI的表達(dá),影響雞胚唇部的發(fā)育,提示BAMBI在雞胚唇部正常發(fā)育及唇畸形發(fā)生過(guò)程中具有重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R782.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 張春霞;劉峰;;斑馬魚(yú)高分辨率整胚原位雜交實(shí)驗(yàn)方法與流程[J];遺傳;2013年04期

2 沈璐;叢蔚;王如;肖晶;;維甲酸誘導(dǎo)腭裂相關(guān)wnt和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子配體表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2011年01期

3 苗參;劉潔;崔澤實(shí);;BAMBI參與TGF-β信號(hào)調(diào)控的研究進(jìn)展[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2006年06期

4 孫晉虎,石冰,王大章;地塞米松對(duì)A系小鼠胚腭突間充質(zhì)細(xì)胞增殖代謝的影響[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年03期

5 黃磊,石冰,孫晉虎,王;地塞米松對(duì)體外培養(yǎng)A系小鼠腭突腭中嵴上皮融合的影響[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年02期

6 石冰,孫晉虎,王大章,左暉;地塞米松和維生素B_(12)對(duì)A系小鼠胚胎腭突細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因表達(dá)的影響[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

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本文編號(hào)：1223868