本文關(guān)鍵詞：胰島素樣生長(zhǎng)因子1通過(guò)mTOR通路促進(jìn)牙髓干細(xì)胞增殖及成骨分化

  更多相關(guān)文章： 牙髓干細(xì)胞 胰島素樣生長(zhǎng)因子1 成骨分化 增殖 mTOR

【摘要】：目的研究胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)對(duì)牙髓干細(xì)胞(DPSCs)增殖及成骨分化能力的影響。方法分離、培養(yǎng)DPSCs后進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。甲苯胺藍(lán)、油紅O染色檢測(cè)DPSCs成軟骨分化及成脂肪分化。加入0-200 ng/mL IGF-1,運(yùn)用CCK-8法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)DPSCs增殖的影響及其最佳濃度。在成骨分化培養(yǎng)基中加入100 ng/ml IGF-1分別刺激3、7、14、21天,并在第21天時(shí)加入PI3K和(或)mTO R通路抑制劑LY294002和(或)雷帕霉素,ALP及茜素紅染色法檢測(cè)陽(yáng)性染色細(xì)胞比率,運(yùn)用Western blot法檢測(cè)成骨標(biāo)記蛋白R(shí)UNX2、OSX、OCN及通路相關(guān)蛋白mTOR、p-mTO R、PI3K、p-PI3K、AK T、p-AKT和p-S6K表達(dá)情況。免疫熒光法檢測(cè)COLⅠ表達(dá)情況。結(jié)果DPSCs呈類(lèi)成纖維細(xì)胞樣梭形外觀,具有向成軟骨分化、成脂肪分化的能力。給予0-200 ng/ml IGF-1刺激,在100 ng/ml濃度時(shí),細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)、倍增時(shí)間縮短、G1/G0期細(xì)胞比例減少。在刺激3、7、14和21天后ALP及茜素紅染色陽(yáng)性細(xì)胞比率顯著增高,其中在3、7和14天時(shí),成骨標(biāo)記蛋白R(shí)UNX2和OSX表達(dá)上調(diào);7和14天時(shí)成骨標(biāo)記蛋白OCN表達(dá)上調(diào)。在此過(guò)程中,p-mTOR及p-S6K表達(dá)增加,mTOR信號(hào)通路被激活,抑制mTOR信號(hào)通路可以逆轉(zhuǎn)IGF-1誘導(dǎo)的DPSCs成骨分化能力增加。結(jié)論我們的研究表明DPSCs經(jīng)IGF-1刺激后可激活mTOR通路,增強(qiáng)DPSCs增殖能力及成骨分化能力,為DPSCs臨床治療骨質(zhì)疏松提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R781
，

本文編號(hào)：1221875