發(fā)布時(shí)間：2017-11-24 01:00

  本文關(guān)鍵詞：7-脫氫膽固醇還原酶基因沉默對(duì)體外培養(yǎng)小鼠腭突融合的影響

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【摘要】：目的通過(guò)RNA干擾抑制7-脫氫膽固醇還原酶(Dhcr7)基因在培養(yǎng)腭突中的表達(dá),研究Dhcr7基因?qū)﹄裢蝗诤系挠绊�。方法根�?jù)C57BL/6J小鼠Dhcr7基因特異性的siRNA序列構(gòu)建pAdTrack-CMV-siDhcr7,陽(yáng)性克隆的pAdTrack-CMV-siDhcr7質(zhì)粒進(jìn)行體外重組,篩選出抗卡那霉素的重組腺病毒p Ad Easy-1-siDhcr7質(zhì)粒,酶切后制備腺病毒載體DNA轉(zhuǎn)染胚胎腭突。取妊娠13.5 d的小鼠胚胎腭突共30對(duì)隨機(jī)分為3組,每組10對(duì)。正常對(duì)照組、空白腺病毒對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組均用不含膽固醇培養(yǎng)基培養(yǎng)腭突,其中空白腺病毒對(duì)照組加入空白腺病毒,實(shí)驗(yàn)組加入Dhcr7siRNA腺病毒。培養(yǎng)48 h后固定腭突并提取Dhcr7 mRNA和蛋白,采用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察腭突融合情況,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western blot分析Dhcr7 mRNA和蛋白的含量。結(jié)果 SEM檢測(cè)顯示,正常對(duì)照組和空白腺病毒對(duì)照組在培養(yǎng)48 h時(shí)兩側(cè)腭突融合,形成連續(xù)的上腭;而實(shí)驗(yàn)組幾乎沒(méi)有生長(zhǎng),兩側(cè)腭突之間有很寬的裂隙。RT-PCR和Western blot檢測(cè)顯示,實(shí)驗(yàn)組Dhcr7 mRNA和蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組和空白腺病毒對(duì)照組相比均明顯減少,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 Dhcr7基因在腭突中的表達(dá)下調(diào)后,腭突融合失敗,說(shuō)明Dhcr7基因在腭突正常發(fā)育融合中起一定的作用。
【作者單位】： 青島大學(xué)附屬醫(yī)院口腔頜面外科;山東省教育廳口腔臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81070817) 山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(ZR2010HM054)
【分類(lèi)號(hào)】：R782.22
【正文快照】： 7-脫氫膽固醇還原酶(7-dehydrocholesterol re-ductase,Dhcr7)基因突變將導(dǎo)致Dhcr7活性下降,膽固醇水平降低,其前體7脫氫膽甾醇等在體內(nèi)聚集,發(fā)生包括腭裂在內(nèi)的多發(fā)生長(zhǎng)和發(fā)育畸形[1]。抑制Dhcr7的活性,可以阻礙膽固醇的代謝,阻斷信號(hào)通路而引起一系列缺陷綜合征[2-3]。本課

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1220420