本文關(guān)鍵詞：DDM異位成骨過(guò)程中BMP-2表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：通過(guò)異位成骨實(shí)驗(yàn)和免疫組化方法,分析骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)在脫礦牙本質(zhì)基質(zhì)(decalcif icated dentin matrix, DDM)成骨中的作用。方法：將體重為2.0～2.5kg的新西蘭大白兔24只隨機(jī)分為8組,每組3只。采用標(biāo)準(zhǔn)兔飼料喂養(yǎng),飲水量不限。每兔在背部豎脊肌兩側(cè)備4個(gè)肌袋,左右各二。在一側(cè)的2個(gè)肌袋內(nèi)植入成品DDM(為成品DDM組)；分別在另一側(cè)的兩個(gè)肌袋內(nèi)植入自制DDM(為自制DDM組)和少許縫線(xiàn)(為對(duì)照組)。術(shù)后1、2、3、4、6、8、12、16周時(shí)取材,利用免疫組化及DAB染色鑒定含BMP-2的細(xì)胞。組織切片中胞質(zhì)染為淡棕色至棕褐色為含BMP-2的陽(yáng)性細(xì)胞。染色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)的染色特性計(jì)分：無(wú)著色為0分,淡棕色為1分,棕色為2分,棕褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比為400倍視野下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,其中陽(yáng)性細(xì)胞所占的比例,取5個(gè)視野的平均值。染色結(jié)果半定量分析：以染色強(qiáng)度乘以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分比來(lái)做為含BMP-2的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：1、大體觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均無(wú)死亡,全部進(jìn)入觀察。術(shù)后2小時(shí)創(chuàng)口未見(jiàn)滲出,縫線(xiàn)固定有效。術(shù)后1天,大兔活動(dòng)自如,飲食正常,正常排便；未見(jiàn)DDM排異體外。術(shù)后2周,兔脊背縫線(xiàn)處創(chuàng)口血痂繼續(xù)脫落,創(chuàng)口逐漸愈合。術(shù)后16周,兔創(chuàng)口被新生毛發(fā)生長(zhǎng)完全覆蓋,兔行動(dòng)、飲食完全正常。2、免疫組化染色成品組1周時(shí)出現(xiàn)含BMP-2的細(xì)胞,染色為淺棕色,染色面積較小。2周時(shí),棕染色面積和強(qiáng)度略有增加。3、4周時(shí)染色為棕色或者深棕色,染色面積在第4周時(shí)達(dá)到最大值。6、8周染色為棕色或者淺棕色,但是染色面積有所下降。12周,染色為淺棕色或棕色,染色面積繼續(xù)下降。16周時(shí)染色為淺棕,面積最低。棕染區(qū)域第1周時(shí)出現(xiàn)在DDM周?chē)?隨著時(shí)間推移,棕染區(qū)漸漸遠(yuǎn)離DDM。自制組1周時(shí)出現(xiàn)含BMP-2的細(xì)胞,染色為淺棕色。棕染部分出現(xiàn)在DDM周?chē)?周時(shí),棕染區(qū)面積增大,顏色較淺。棕染部分逐漸遠(yuǎn)離DDM中心。3、4周時(shí),棕染區(qū)面積達(dá)到最大,顏色深棕色。棕染部分出現(xiàn)在遠(yuǎn)離DDM處。6、8、12、16周染色強(qiáng)度和面積漸漸減少。對(duì)照組1周時(shí)未見(jiàn)明顯棕染部分,僅見(jiàn)蘇木素染色的肌細(xì)胞核出現(xiàn),隨著時(shí)間推移2、3、4周時(shí),未見(jiàn)明顯變化。6、8、12、16周切片中僅出現(xiàn)藍(lán)染的肌細(xì)胞核。3、SPSS統(tǒng)計(jì)軟件結(jié)果成品組和自制組從第1周起均出現(xiàn)了BMP-2的陽(yáng)性表達(dá)。每周表達(dá)強(qiáng)度不同,從第1周開(kāi)始逐漸增加至第4周,第6、8、12、16周慢慢下降。各時(shí)間點(diǎn)之間,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)照組各周均未出現(xiàn)明顯的陽(yáng)性表達(dá),各時(shí)間點(diǎn)之間,沒(méi)有明顯差異。三組每周含BMP-2的細(xì)胞百分比與染色強(qiáng)度的乘積如下(X±S)：成品組：0.0289±0.0088、0.0427±0.0050、0.0709±0.0102、0.1136±0.0146、0.0380±0.0063、0.0125±0.0012、0.0035±0.0016、0.0029±0.0007；自制組0.0231±0.0142、0.0237±0.0020、0.0518±0.0042、0.0599±0.0086、0.0272±0.0051、0.0053±0.0006、0.0027±0.0005、0.0055±0.0033；對(duì)照組0.0009±0.0014、0.0002±0.0002、0.0004±0.0003、0.0006±0.0004、0.0003±0.0002、0.0006±0.0003、0.0003±0.0002、0.0001±0.0002。成品組陽(yáng)性率表達(dá)高于自制組,高于對(duì)照組。三組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.成品DDM和自制DDM異位植入兔豎脊肌后,均未出現(xiàn)免疫排斥、組織炎癥等現(xiàn)象,表明DDM具有較好的生物相容性。2.成品DDM和自制DDM組,在不同時(shí)間點(diǎn)均能檢測(cè)出BMP一2,且遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組,表明DDM在植入機(jī)體后,能夠提高局部的BMP-2含量。3.成品DDM組BMP-2的陽(yáng)性表達(dá)高于自制DDM組,說(shuō)明DDM的制備工藝對(duì)BMP-2的活性及釋放有著重要的影響。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R783

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張鳴號(hào);彭亮;曹軍;;顯微圖像分析法與人工計(jì)數(shù)法在免疫組化結(jié)果判讀中的應(yīng)用[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

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本文編號(hào)：1201046