本文關(guān)鍵詞：癌相關(guān)成纖維細(xì)胞促進(jìn)唾液腺腺樣囊性癌侵襲及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的:唾液腺腺樣囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma,ACC)侵襲性強(qiáng),易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究的目的為探究體外條件下ACC來源的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer associated fibroblasts,CAF)的生物學(xué)特性,及其對ACC細(xì)胞侵襲的影響。方法:本研究通過HE染色方法,對兩例ACC組織進(jìn)行病理診斷;免疫組織化學(xué)染色的方法檢測ACC組織間質(zhì)中α-平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)的表達(dá)情況。對這兩個新鮮ACC組織中提取的原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和純化,并通過細(xì)胞免疫熒光染色的方法檢測原代細(xì)胞中廣譜細(xì)胞角蛋白(pan-cytokeratin,CK)、波形蛋白(vimentin,VIM)、α-SMA、成纖維細(xì)胞活化蛋白(fibroblast activated protein,FAP)、成纖維特異性蛋白1(fibroblast specific protein 1,FSP-1)的表達(dá)情況。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)考察CAF細(xì)胞的遷移能力。Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃臀⒘骺匦酒Ｐ涂疾霤AF的侵襲能力。收集CAF的條件培養(yǎng)液(conditional medium,CM),通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)考察CAF對ACC細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。通過微流控芯片模型,研究ACC細(xì)胞與CAF侵襲時的相互作用關(guān)系。通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶和干擾CXCL12/CXCR4信號通路來考查CAF對ACC侵襲的抑制作用。結(jié)果:觀察HE染色切片,兩例病例組織均為ACC,免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明α-SMA在ACC組織的間質(zhì)中表達(dá)陽性。細(xì)胞免疫熒光染色方法鑒定從ACC組織中提取的原代CAF,結(jié)果顯示這些細(xì)胞CK表達(dá)陰性,VIM表達(dá)陽性,幾乎所有的細(xì)胞都表達(dá)FAP和FSP-1,大部分細(xì)胞表達(dá)α-SMA,提示我們提取這些原代細(xì)胞表達(dá)典型的CAF生物學(xué)標(biāo)記物。傳統(tǒng)的細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)以及Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)均顯示CAF與正常牙齦成纖維細(xì)胞相比,其遷移能力和在垂直方向上的侵襲能力更強(qiáng);微流控芯片的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CAF在水平方向上也具有較強(qiáng)的侵襲能力。并且,與空白對照組相比較,CAF可以促進(jìn)ACC細(xì)胞系SACC-LM和SACC-83細(xì)胞的遷移、侵襲。將SACC-LM和SACC-83細(xì)胞與CAF在微流控芯片平臺上共培養(yǎng),我們發(fā)現(xiàn)CAF總是位于侵襲通道的前沿,SACC-LM和SACC-83細(xì)胞沿著CAF在基質(zhì)膠中建立的侵襲通道向前移動。而SACC-LM和SACC-83細(xì)胞與正常牙齦成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時,SACC-LM和SACC-83細(xì)胞位于侵襲的前沿。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),SACC-LM和SACC-83細(xì)胞與CAF共培養(yǎng)時,ACC細(xì)胞侵襲到基質(zhì)膠中的面積更大,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CAF促進(jìn)ACC侵襲的抑制實(shí)驗(yàn)顯示,GM6001完全抑制ACC和CAF細(xì)胞侵襲入基質(zhì)膠內(nèi);AMD3100可以抑制SACC-LM和SACC-83細(xì)胞的侵襲,特別是SACC-LM和SACC-83沒有沿著CAF建立的通道向前侵襲。結(jié)論:1.ACC來源的CAF不僅表達(dá)CAF典型的生物學(xué)標(biāo)志物,而且能夠促進(jìn)ACC細(xì)胞的遷移、侵襲。2.CAF促進(jìn)ACC侵襲的機(jī)制可能為,CAF首先在ECM中建立侵襲通道,然后CAF通過分泌CXCL12誘導(dǎo)ACC細(xì)胞尾隨其后。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8

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6 張誠s，

本文編號：1170025