本文關(guān)鍵詞：BMPs-ERK5信號通路調(diào)控人牙周膜干細(xì)胞成骨分化的研究

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【摘要】：目的比較骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)2、7、9對人牙周膜干細(xì)胞human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs㖞成骨分化的誘導(dǎo)作用,探討B(tài)MPs-ERK5信號通路在成骨分化中的作用。方法首先采用組織塊酶消化法分離培養(yǎng)原代h PDLSCs并鑒定,利用腺病毒載體介導(dǎo)的GFP、BMP2、BMP7和BMP9(Ad-GFP、Ad-BMP2、Ad-BMP7、Ad-BMP9)分別感染h PDLSCs,通過早期成骨分化指標(biāo)堿性磷酸酶活性定性和定量檢測、茜素紅染色檢測晚期成骨分化指標(biāo)鈣鹽結(jié)節(jié)沉積情況、qRT-PCR檢測細(xì)胞成骨分化相關(guān)基因骨鈣蛋白和骨橋蛋白mRNA表達(dá),比較發(fā)現(xiàn)BMP9對細(xì)胞成骨分化的作用最強(qiáng);采用Ad-BMP9感染h PDLSCs 24 h后,檢測BMP9作用PDLSCs后對ERK5磷酸化水平的影響和ERK5信號通路特異性抑制劑BIX02189預(yù)處理后BMP9-ERK5通路對h PDLSCs成骨分化的影響。結(jié)果 1分離培養(yǎng)的h PDLSCs為成纖維細(xì)胞樣,呈漩渦狀生長,抗波形蛋白表達(dá)陽性,抗角蛋白表達(dá)陰性,具有間充質(zhì)屬性和克隆形成能力。2BMP2、BMP7和BMP9均有促進(jìn)細(xì)胞成骨分化作用,其中3組的堿性磷酸酶定量結(jié)果和成骨分化相關(guān)基因相對表達(dá)量與GFP組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且BMP9效力最強(qiáng)。3Western blot檢測顯示BMP9增強(qiáng)p-ERK5的表達(dá)。而抑制劑BIX02189呈劑量依賴性地抑制p-ERK5的表達(dá)。BIX02189預(yù)處理細(xì)胞后、感染Ad-BMP9的結(jié)果顯示,BMP9對細(xì)胞的促成骨作用較未處理組明顯降低,其中BMP9組的堿性磷酸酶定量分析結(jié)果與成骨分化相關(guān)基因相對表達(dá)量與BIX02189處理組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 BMP9具有較強(qiáng)的促h PDLSCs成骨分化作用,ERK5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在BMP9誘導(dǎo)h PDLSCs成骨分化過程中發(fā)揮了正向調(diào)節(jié)作用。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院預(yù)防口腔科;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院重慶市高校市級口腔生物醫(yī)學(xué)工程重點實驗室;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔疾病與生物醫(yī)學(xué)重慶市重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 牙周膜干細(xì)胞 成骨分化 細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶
【基金】：重慶市自然科學(xué)基金一般項目(CSTC2012jj A10156) 重慶市渝北區(qū)科研項目[2014(社)16號] 重慶高校創(chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)計劃(2013)~~
【分類號】：R781
【正文快照】： 級口腔生物醫(yī)學(xué)工程重點實驗室2,口腔疾病與生物醫(yī)學(xué)重慶市重點實驗室3)and the Project of Innovation Team Construction Plan of Chongqing Higher Education(2013).Corresponding author:Zhang Yan,E-mail:lexiner82@126.com隨著對牙周炎發(fā)病機(jī)制的深入研究和牙周組織工程

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