本文關(guān)鍵詞：Th亞群細(xì)胞及其特征性細(xì)胞因子與慢性牙周炎相關(guān)性的研究

  更多相關(guān)文章： Th1細(xì)胞 Th2細(xì)胞 Th17細(xì)胞 白細(xì)胞介素-17 干擾素-γ 慢性牙周炎

【摘要】：研究背景 牙周炎(Chronic periodontitis, CP)是最常見的口腔慢性感染性疾病,主要臨床表現(xiàn)是牙齦炎癥和牙槽骨病理性吸收。牙周病病因復(fù)雜,涉及感染、免疫、年齡、種族、遺傳背景、心理及環(huán)境因素等,但發(fā)病機(jī)制尚不明確。 牙周致病菌及其所引起的細(xì)胞免疫,尤其是CD4+輔助性T細(xì)胞(T helper,Th細(xì)胞)能夠通過多種途徑介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、宿主免疫應(yīng)答及抗感染反應(yīng)。在、Th細(xì)胞分化機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn),初始Th0細(xì)胞接受局部微環(huán)境激活信號(hào)后,選擇性的向不同方向極化,各自分泌不同種類細(xì)胞因子,被分別命名為Th1、Th2、Thl7和Treg細(xì)胞,相互影響、相互制約、形成網(wǎng)絡(luò)維持動(dòng)態(tài)平衡。Th1、Th2之間的平衡狀態(tài)被認(rèn)為是維持全身免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要因素。新近發(fā)現(xiàn)的輔助性T細(xì)胞17型(T helper17, Th17)以分泌促炎因子IL-17為特征,需要STAT依賴的特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤核受體(retinoid-related orphan nuclear receptor γt, RORγt)參與,啟動(dòng)其增殖和分化過程,具有獨(dú)立的調(diào)節(jié)機(jī)制,在多種自身免疫性疾病的致病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。Th17細(xì)胞的功能特性激發(fā)了研究者對(duì)其與牙周疾病發(fā)生發(fā)展的聯(lián)系的探討,是對(duì)經(jīng)典Th1/Th2細(xì)胞免疫模型的補(bǔ)充。此外,Th17細(xì)胞存在至少兩種表型,單一表達(dá)分泌IL-17的經(jīng)典活化Th17細(xì)胞(IL-17+Thl7細(xì)胞),以及同時(shí)分泌IFN-γ和IL-17的選擇性活化Th17細(xì)胞(IL-17+IFN-γ+Th17細(xì)胞,即Th1/Th17細(xì)胞)。兩種表型的Th17細(xì)胞,在因子表達(dá)、效應(yīng)功能和致病性方面存在差異。 我們的實(shí)驗(yàn)思路,主要從臨床研究和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面展開,首先采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并比較慢性牙周炎和牙周健康者外周血中Th1、Th2和Th17細(xì)胞及選擇性活化Th1/Th17的分布水平。兩組人群血漿和齦溝液標(biāo)本中,Th亞群細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF和IFN-γ的濃度水平的差異。其次,免疫組化分析Thl和Th17細(xì)胞在牙周炎病損局部的表達(dá)情況。同時(shí),對(duì)牙齦組織中Thl和Th17特征性細(xì)胞因子IFN-γ、IL-17和特異性轉(zhuǎn)錄子T-bet和RORyt的mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)。最后,體外利用破骨前體細(xì)胞系RAW264.7作為研究模型,將Thl7兩種表型細(xì)胞兩種特征性分泌細(xì)胞因子IL-17和IFN-γ聯(lián)合作用,探討其在破骨前體細(xì)胞成為破骨細(xì)胞過程中,對(duì)增殖、分化、凋亡的影響并分析可能的機(jī)制。該研究有機(jī)聯(lián)系了免疫因素與牙周炎的發(fā)病機(jī)制,為臨床尋找牙周炎治療的新思路提供科學(xué)的理論依據(jù)。 因此,本研究分三個(gè)部分。 第一部分：慢性牙周炎患者Th1、Th2和Th17細(xì)胞及其細(xì)胞因子表達(dá)差異的研究 目的：探討慢性牙周炎患者Th1、Th2和Th17細(xì)胞及特征性細(xì)胞因子的分布特點(diǎn)。方法：通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)慢性牙周炎和牙周健康者外周血Th1、Th2和Th17細(xì)胞的分布差異。流式液相多重蛋白定量技術(shù)進(jìn)一步分析兩組部分人群中血漿和齦溝液標(biāo)本中,Yh細(xì)胞亞群相關(guān)細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF和IFN-y水平的表達(dá)差異,并統(tǒng)計(jì)分析因子間相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果：輕、中度慢性牙周炎組中,Thl:13.2±6.91%、Th2:2.2±1.96%、Th17：0.95±0.84%；重度慢性牙周炎組,Thl:16.6±1.07%、Th2:2.06±1.17%、Th17:1.39±0.9%；健康組Thl:8.22±4.50%、Th2:1.19±1.15%、Th17:0.62±0.49%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)顯示,輕、中、重度慢性牙周炎組Thl和Th17在外周血中的比例均高于健康組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為10.98、6.49,P0.05)。對(duì)Th2細(xì)胞,輕、中度慢性牙周炎組和健康對(duì)照的差異有意義,而重度牙周炎組,細(xì)胞比例升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞因子的水平顯示在慢性牙周炎組血漿中IL-17的濃度高于牙周健康的對(duì)照組(9.02±14.21pg/ml vs4.43±6.14pg/ml, P0.05)。其他細(xì)胞因子濃度在牙周炎組有升高的趨勢(shì),但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。齦溝液中細(xì)胞因子在兩組間的差異,未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：慢性牙周炎患者血漿中IL-17較牙周健康者升高,提示IL-17可能是牙周炎發(fā)生重要的促炎癥細(xì)胞因子。慢性牙周炎患者體內(nèi)存在Thl細(xì)胞和Th17細(xì)胞數(shù)量的升高,相關(guān)分析顯示存在正相關(guān)關(guān)系,推測(cè)兩種T細(xì)胞亞群可能共同發(fā)揮致病作用。 第二章Thl和Th17細(xì)胞在牙周炎病損組織中的分布及IL-17+IFN-γ+Th17細(xì)胞與慢性牙周炎的關(guān)系 目的：探討慢性牙周炎病損局部的Thl和Th17與正常相比,是否存在差異。檢測(cè)慢性牙周炎患者外周血中Th17亞型細(xì)胞IL-17+IFN-γ+Th17的分布特點(diǎn)。 方法：收集因牙周炎拔除的患牙牙齦組織作為病例組,選擇頜面外科門診拔除的阻生牙或冠延長患者的正常牙齦組織作為對(duì)照,通過免疫組化及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)IL-17、IFN-γ、T-bet、RORyt的表達(dá)水平。在第一部分流式檢測(cè)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步分析慢性牙周炎患者外周血中IL-17+IFN-γ+Th17細(xì)胞的百分比水平和組間檢出率的分布特點(diǎn)。 結(jié)果：牙周組織中IL-17和IFN-γ細(xì)胞的H-scorce評(píng)分,顯示慢性牙周炎組高于牙周健康組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。定量PCR結(jié)果顯示,牙周炎組IL-17、IFN-γ和T-bet mRNA表達(dá)高于正常組(P0.05),而RORyt水平未顯示差異。IL-17+IFN-γ+Thl7細(xì)胞在輕、中度組和重度組慢性牙周炎CD4+T細(xì)胞中所占比例較正常組有升高趨勢(shì),組間的細(xì)胞檢出率分別為48.84,56.6和33.33%,然而組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：Thl及Th17參與了慢性牙周炎局部的炎癥反應(yīng)。IL-17+IFN-γ+Th17亞型細(xì)胞與牙周炎關(guān)系還有待進(jìn)一步明確。 第三章IL-17和IFN-γ對(duì)破骨前體細(xì)胞系RAW264.7增殖、分化和凋亡的影響 目的：IL-17和IFN-γ在破骨前體細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要作用。本研究旨在探討將兩者聯(lián)合作用對(duì)破骨前體細(xì)胞增殖、分化、凋亡功能的影響。 方法：采用RANKL和M-CSF刺激破骨前體細(xì)胞系RAW264.7培養(yǎng)24小時(shí)后,將IL-17, IFN-γ單獨(dú)和IL-17聯(lián)合IFN-γ干預(yù)細(xì)胞培養(yǎng)。采用CCK-8, TRAP活性試劑盒,流式細(xì)胞技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR,分別評(píng)價(jià)對(duì)破骨前體細(xì)胞增殖、分化、凋亡功能的差異。 結(jié)果小鼠RAW264.7細(xì)胞在50ng/mlRANKL和30ng/ml M-CSF的作用下可分化為破骨細(xì)胞,在體外建立破骨細(xì)胞研究模型,用于細(xì)胞因子的研究。IFN-γ通過Fas/FasL信號(hào)途徑而誘導(dǎo)破骨前體細(xì)胞的凋亡。而IL-17則具有抑制IFN-γ所導(dǎo)致的破骨前體細(xì)胞凋亡的作用,刺激更多的破骨細(xì)胞生成,推測(cè)可能和牙槽骨的吸收有關(guān)。 結(jié)論：Th1/Th17的特征細(xì)胞因子IL-17聯(lián)合IFN-γ對(duì)破骨前體細(xì)胞的凋亡抑制作用,提示其在牙周炎骨改建中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
【關(guān)鍵詞】：Th1細(xì)胞 Th2細(xì)胞 Th17細(xì)胞 白細(xì)胞介素-17 干擾素-γ 慢性牙周炎
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781.42
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-14
• 縮略語14-15
• 目次15-17
• 研究背景17-20
• 參考文獻(xiàn)20-24
• 第一章 慢性牙周炎患者TH1、TH2和THL7細(xì)胞及其細(xì)胞因子表達(dá)差異的研究24-51
• 研究背景24-26
• 1. 材料和方法26-35
• 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-41
• 3. 討論41-45
• 4. 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 第二章 TH1和TH17細(xì)胞在牙周炎病損組織中的分布及外周血IL-17~+IFN-Γ~+TH17細(xì)胞與慢性牙周炎的關(guān)系51-75
• 研究背景51-53
• 1. 材料和方法53-60
• 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果60-65
• 3. 討論65-69
• 4. 結(jié)論69
• 參考文獻(xiàn)69-75
• 第三章 IL-17和IFN-Γ對(duì)破骨前體細(xì)胞系RAW264.7增殖、分化和凋亡的影響75-98
• 研究背景75-77
• 1. 材料與方法77-83
• 2. 結(jié)果83-89
• 3. 討論89-93
• 4. 結(jié)論93
• 參考文獻(xiàn)93-98
• 全文小結(jié)98-99
• 綜述99-113
• 參考文獻(xiàn)105-113
• 作者簡(jiǎn)介113

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 宗敏,楊丕山,戚向敏,伊心浩;牙周治療對(duì)血清IFN-γ及IL-4水平的影響[J];上海口腔醫(yī)學(xué);2005年02期

2 孫元明,楊福軍,李雨民,盧飚,朱梅,邱明才;細(xì)胞凋亡信息分子Fas、FasL和NF-κB在氟化物作用后破骨樣細(xì)胞凋亡過程中的表達(dá)[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2002年05期

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本文編號(hào)：1131700