本文關(guān)鍵詞：DMP-1參與下頜功能前伸過程中髁突軟骨增殖的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:下頜髁突作為顳下頜關(guān)節(jié)重要的組成部分,功能性前伸后其骨改建過程及穩(wěn)定性是研究的熱點(diǎn)。髁突的生長與外界機(jī)械刺激高度相關(guān),髁突軟骨細(xì)胞在受到外界相關(guān)因素刺激,尤其機(jī)械應(yīng)力刺激后,經(jīng)過相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),表現(xiàn)出細(xì)胞增殖,分化,程序性死亡等一系列的生物學(xué)反應(yīng)。然而,相關(guān)細(xì)胞因子是如何調(diào)節(jié)軟骨生成及軟骨內(nèi)成骨,完成骨改建還需要進(jìn)一步研究。DMP-1是一種屬于小整合素結(jié)合配體N端連接糖蛋白(SIBLINGs)家族的非膠原蛋白,作為礦化因子,參與硬組織的礦化,在軟骨細(xì)胞和骨細(xì)胞中均有表達(dá),是軟骨和骨必不可少的特異性標(biāo)記產(chǎn)物。近年來發(fā)現(xiàn)機(jī)械應(yīng)力刺激后骨細(xì)胞中DMP-1出現(xiàn)適應(yīng)性表達(dá),DMP-1作為轉(zhuǎn)錄因子參與骨改建引起關(guān)注,下頜骨形成、發(fā)育和改建與DMP-1基因的表達(dá)有密切關(guān)系,并且其可能作為候選基因調(diào)控下頜骨和髁突軟骨生長發(fā)育。同時(shí),PCNA只存在于增殖細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中,是細(xì)胞增殖活動(dòng)的標(biāo)志之一,能有效的輔助反映軟骨細(xì)胞增殖功能。本實(shí)驗(yàn)采用組織學(xué)染色、免疫組織化學(xué)染色等方法,在不同的時(shí)間點(diǎn),檢測大鼠下頜功能前伸過程中髁突軟骨內(nèi)DMP-1的表達(dá)及其變化規(guī)律,及PCNA的表達(dá),以探討DMP-1對功能矯治前伸下頜過程中髁突骨改建中軟骨增殖的作用,為臨床上骨性II類錯(cuò)He患者骨骼矯形治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:選用4周齡的健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠70只,體重約90克,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,將大鼠隨機(jī)等量分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,組內(nèi)根據(jù)實(shí)驗(yàn)周期(1、3、7、14、21、28和35天)分為7組,每組5只,共14組。實(shí)驗(yàn)組將自制下頜前伸斜面導(dǎo)板矯治器利用3M玻璃離子粘接劑粘固于大鼠上切牙,選用合適型號(hào)的橡皮圈經(jīng)鼻上頜復(fù)合體與兩側(cè)口外弓連接,使得斜面導(dǎo)板獲得穩(wěn)定的固位,將大鼠四肢用醫(yī)用橡皮膏緊緊包裹,有效地防止大鼠前爪對裝置的破壞以及對面部組織的傷害,矯治器全天24h戴用;對照組不做任何實(shí)驗(yàn)操作。所有動(dòng)物均以軟食飼養(yǎng),自由飲水,同環(huán)境下飼養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)后1、3、7、14、21、28和35天分別取材,常規(guī)固定,脫鈣,脫水,包埋。石蠟切片后進(jìn)行常規(guī)HE染色觀察髁突組織學(xué)變化;免疫組織化學(xué)方法檢測DMP-1和PCNA的表達(dá),采用細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行免疫組化染色評分,以IHS值表示染色強(qiáng)度。所有數(shù)據(jù)結(jié)果均應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,統(tǒng)計(jì)分析時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對照組組間比較采用t檢驗(yàn),組內(nèi)比較采用單因素方差分析,實(shí)驗(yàn)組DMP-1和PCNA運(yùn)用雙變量相關(guān)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果:1大體觀察實(shí)驗(yàn)組SD大鼠下頜處于適度前伸狀態(tài),上下頜前牙呈對刃或者略反He關(guān)系,摘除矯治器后,下頜不能后退。而對照組SD大鼠前牙覆蓋約3mm。2組織學(xué)特點(diǎn)下頜骨髁突具有獨(dú)特的層域化分帶,從表面向深部大致可以分為四層結(jié)構(gòu):纖維性關(guān)節(jié)表面帶、多細(xì)胞帶、纖維軟骨帶、鈣化軟骨帶。對照組:顯微鏡下可見一層纖維組織(關(guān)節(jié)盤)包繞在髁突軟骨的表面,髁突軟骨的前部最薄,后部最厚,隨著時(shí)間的推移,髁突軟骨出現(xiàn)增齡性變化,軟骨的中部及后部變化更為顯著,纖維性關(guān)節(jié)表面帶和多細(xì)胞帶變化不明顯,而纖維軟骨帶減少變薄較為明顯。實(shí)驗(yàn)組:在同時(shí)間點(diǎn)下,可見大鼠髁突軟骨的厚度較對照組有所增加,尤其是后部更為明顯,前部厚度變化不明顯,未發(fā)現(xiàn)病理性改變。多細(xì)胞帶、纖維軟骨帶的細(xì)胞層數(shù)增多,肥大軟骨細(xì)胞的細(xì)胞體積增大,胞外基質(zhì)增多。3免疫組織化學(xué)結(jié)果陰性對照組(PBS代替一抗),顯示無陽性著色。對照組髁突軟骨細(xì)胞中,DMP-1主要在纖維軟骨帶表達(dá)而且保持相對較低的水平,第7天到第14天較高,組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組第3天,髁突軟骨中DMP-1蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng),IHS=44.67±3.05,與對照組IHS=10.33±0.58有明顯差異(P0.01);第7天時(shí),實(shí)驗(yàn)組IHS=50.67±7.02陽性表達(dá)持續(xù)增強(qiáng),與對照組IHS=10.67±1.15比較有明顯差異(P0.01);第14天,實(shí)驗(yàn)組IHS=85.67±4.51,DMP-1的表達(dá)達(dá)到最高水平,與對照組IHS=10.67±1.53及實(shí)驗(yàn)組第7天比較有顯著差異(P0.01);第21天,實(shí)驗(yàn)組IHS=42.67±10.07,DMP-1陽性表達(dá)細(xì)胞開始減少,但與對照組IHS=10.00±1.00比較有顯著差異(P0.01);直至第28天,實(shí)驗(yàn)組IHS=16.67±1.15與對照組IHS=10.00±1.00相比仍有明顯差異(P0.01);第35天,髁突軟骨DMP-1蛋白表達(dá)回落至較低水平,實(shí)驗(yàn)組IHS=10.00±1.00,與對照組IHS=9.67±0.58相比無顯著差異(P0.05)。PCNA位于髁突軟骨多細(xì)胞帶和淺肥大軟骨細(xì)胞層,實(shí)驗(yàn)組第3天起髁突軟骨細(xì)胞中PCNA表達(dá)開始增加,IHS=49.67±13.50,與對照組IHS=7.33±1.15相比有顯著差異(P0.01);實(shí)驗(yàn)組第7天IHS=124.0±7.55,與對照組IHS=9.00±2.00相比有顯著差異(P0.01);實(shí)驗(yàn)組第14天PCNA陽性表達(dá)開始下降,IHS=108.33±8.50,但是與對照組IHS=8.67±0.58相比仍有顯著差異(P0.01);實(shí)驗(yàn)組第21天,28天,35天實(shí)驗(yàn)組與對照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。運(yùn)用雙變量相關(guān)分析,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組DMP-1與PCNA的相關(guān)系數(shù)為0.825,P0.01,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1 DMP-1參與大鼠下頜前伸過程中髁突軟骨適應(yīng)性改建,促進(jìn)髁突軟骨增殖和軟骨內(nèi)成骨。2 DMP-1可能參與了大鼠髁突軟骨骨改建過程中機(jī)械應(yīng)力-生物學(xué)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。
【關(guān)鍵詞】：下頜功能前伸 髁突軟骨 骨改建 DMP-1 PCNA
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R782
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-37
• 附表37-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述 骨及軟骨改建中的牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白-146-62
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 致謝62-63
• 個(gè)人簡歷63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 盛海瑩;左艷萍;陳瀟;苑學(xué)微;;磷脂酶C-γ1_(tyr783)在下頜功能前伸大鼠髁突軟骨后部表達(dá)變化的研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年05期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 唐國華;;Runx2在下頜前導(dǎo)中調(diào)節(jié)髁突軟骨內(nèi)成骨的研究[A];2004年上海市口腔醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年

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本文編號(hào)：1131452