本文關(guān)鍵詞：牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白對(duì)乳牙牙髓干細(xì)胞體外增殖、分化能力的影響

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【摘要】：研究背景:牙,作為人體最堅(jiān)硬的器官,具有咀嚼、消化、發(fā)音、維持面型等重要功能。齲齒、外傷、腫瘤等外因可導(dǎo)致牙缺失,這種不可逆損傷影響著人們的身心健康,導(dǎo)致生活質(zhì)量下降。因此,如何建立牙再生成為組織工程學(xué)的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。2000年,學(xué)者在人牙髓組織中成功分離出了牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cells,DPSCs),這些干細(xì)胞具有較強(qiáng)克隆能力及高度增殖、分化潛能,為實(shí)現(xiàn)牙再生帶來(lái)了希望和方向。成熟的牙由牙釉質(zhì)、牙本質(zhì)、牙髓及牙骨質(zhì)組成。由釉柱構(gòu)成的釉質(zhì)是牙齒抵御外界刺激的第一道防線。牙本質(zhì)作為牙齒的主要支撐結(jié)構(gòu),由牙本質(zhì)小管和細(xì)胞外基質(zhì)組成,是牙抵御外界刺激的主要防線。牙髓作為牙組成中細(xì)胞成分最多的部分,為牙本質(zhì)提供營(yíng)養(yǎng)、支持等作用。當(dāng)牙因磨損、酸蝕、齲等發(fā)生破壞時(shí),深部的牙本質(zhì)將暴露,該區(qū)域的成牙本質(zhì)細(xì)胞受到不同程度的刺激后部分將發(fā)生變性,此時(shí)牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的蛋白成分將在損傷部位釋放,從而促進(jìn)較深部位的牙髓干細(xì)胞遷移至損傷區(qū)域取代變性細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞,與尚有功能的成牙本質(zhì)細(xì)胞共同分泌牙本質(zhì)基質(zhì),繼而礦化,形成修復(fù)性牙本質(zhì)[1],抵御外界的刺激和傷害。在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過(guò)程中,牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白(dentin extracellular matrix proteins,DEMPs)起著重要作用。牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)主要由I型膠原和非膠原蛋白組成。非膠原蛋白主要包括:牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentin siaphosphoprotein,DSPP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)等。這些蛋白調(diào)控著牙髓細(xì)胞分化的方向和成牙本質(zhì)細(xì)胞的成熟,引導(dǎo)著牙本質(zhì)基質(zhì)礦化、修復(fù)性牙本質(zhì)形成。研究發(fā)現(xiàn),DSPP基因缺陷可導(dǎo)致牙本質(zhì)形成缺陷癥;DMP-1與鈣離子具有較強(qiáng)的親和力,促使牙本質(zhì)基質(zhì)中羥基磷灰石晶體沉積、成核,晶體擴(kuò)大和融合后可促進(jìn)牙本質(zhì)礦化,同時(shí)可調(diào)節(jié)DSPP的表達(dá);OPN對(duì)羥基磷灰石的形成與生長(zhǎng)有一定的抑制作用,可影響牙本質(zhì)的形成與再生。這提示我們,牙本質(zhì)的形成需要多種基質(zhì)蛋白相互影響、共同作用。目前,大多數(shù)研究集中于單一細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)牙髓細(xì)胞分化的影響,缺少混合性蛋白成分在干細(xì)胞領(lǐng)域作用的相關(guān)報(bào)道。目的:通過(guò)研究牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白在體外對(duì)人脫落的乳牙牙髓干細(xì)胞(Stem cell from human exfoliated deciduous teeth,SHED)增殖、分化能力的影響,從而為DEMPs在牙修復(fù)、再生研究方面的應(yīng)用提供依據(jù)。方法:采用組織塊聯(lián)合酶消化法獲得SHED并進(jìn)行體外培養(yǎng)。礦化誘導(dǎo)液培養(yǎng)SHED,鑒定其是否具有多向分化能力;拔取健康牛牙,用4mol/L鹽酸胍和0.5mol/L EDTA提取DEMPs,四唑鹽比色法(MTT)檢測(cè)各種不同濃度DEMPs對(duì)SHED增殖能力的影響,同時(shí)測(cè)定DEMPs對(duì)SHED堿性磷酸酶(ALP)活性的影響;Real-time PCR檢測(cè)DSPP與DMP-1的m RNA表達(dá)情況。結(jié)果:成功提取并鑒定牙髓干細(xì)胞。DEMPs誘導(dǎo)細(xì)胞培養(yǎng)3d、5d可促進(jìn)細(xì)胞增殖。細(xì)胞培養(yǎng)5d、7d時(shí),ALP的活性上調(diào),Real-time PCR結(jié)果顯示,DEMPs可促進(jìn)DSPP、DMP-1基因的表達(dá)。結(jié)論:牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白促進(jìn)SHED的增殖與牙向分化。
【關(guān)鍵詞】：牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白 乳牙牙髓干細(xì)胞 增殖 分化
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略詞表10-12
• 第1章 緒論12-14
• 第2章 文獻(xiàn)綜述14-19
• 2.1 牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)成分與生物學(xué)行為14-16
• 2.2 牙本質(zhì)生物活性成分的釋放16-17
• 2.3 細(xì)胞因素在修復(fù)性牙本質(zhì)形成方面的應(yīng)用17-19
• 第3章 實(shí)驗(yàn)材料和方法19-24
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器19-20
• 3.1.1 主要藥品與試劑19
• 3.1.2 主要儀器設(shè)備19-20
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法20-24
• 3.2.1 牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的提取20
• 3.2.2 SHED的分離培養(yǎng)與鑒定20-21
• 3.2.3 牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白對(duì)SHED增殖能力的影響21
• 3.2.4 牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白對(duì)SHED堿性磷酸酶活性的影響21-22
• 3.2.5 Real time-PCR檢測(cè)牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)作用SHED后，DSPP與DMP-1 基因的表達(dá)情況22-23
• 3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 第4章 結(jié)果與討論24-30
• 4.1 結(jié)果24-27
• 4.1.1 SHED的分離培養(yǎng)與鑒定24-25
• 4.1.2 牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白對(duì)SHED增殖能力的影響25
• 4.1.3 牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白對(duì)SHED ALP活性的影響25-26
• 4.1.4 RT-PCR檢測(cè)牙本質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)作用SHED的基因表達(dá)結(jié)果26-27
• 4.2 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-36
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間取得的科研成果36-37
• 致謝37

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本文編號(hào)：1090335