本文關(guān)鍵詞：正畸力作用下大鼠炎性牙周組織中IL-17的表達(dá)及作用機(jī)制初探

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【摘要】：背景和目的：正畸治療的生物學(xué)基礎(chǔ)是牙周組織改建。正畸治療是機(jī)械力作用牙齒并傳遞至牙周組織,引起牙周組織發(fā)生生理性改建,最終使牙齒達(dá)到理想位置的過(guò)程。牙周組織包括牙齦、牙周膜、牙槽骨等,其中牙槽骨的改建最為活躍。牙齒受力后壓力區(qū)破骨細(xì)胞功能活躍,牙槽骨吸收；張力側(cè)成骨細(xì)胞生成、新骨沉積。健康的牙周組織為正畸治療保駕護(hù)航。近年來(lái),隨著口腔保健意識(shí)的不斷提升,成人正畸患者日趨增多,成年患者多存在不同程度的牙周炎癥。炎性效應(yīng)如何影響正畸牙齒移動(dòng)(orthodontic tooth movement, OTM)和牙周組織改建,正在成為國(guó)際口腔學(xué)者關(guān)注和研究的熱點(diǎn)之一。白細(xì)胞介素(interleukin, IL)家族具有促進(jìn)炎癥發(fā)展以及影響破骨細(xì)胞形成的作用,IL-17是IL中的新成員,在多種骨丟失疾病中發(fā)揮重要作用,如哮喘、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牙周炎、骨關(guān)節(jié)炎等,但在牙周炎牙齒移動(dòng)中的表達(dá)和作用,迄今少有文獻(xiàn)報(bào)道。因此,本研究通過(guò)檢測(cè)正畸患者齦溝液中IL-17蛋白表達(dá),并建立牙周炎正畸動(dòng)物模型,對(duì)IL-17進(jìn)行定性、定位、定量分析,觀察炎癥和機(jī)械力共同影響下IL-17的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化規(guī)律,探索炎性化學(xué)信號(hào)和生物力學(xué)信號(hào)間的關(guān)系以及共同介導(dǎo)牙周組織改建的分子機(jī)制,為牙周炎患者選擇最佳正畸治療提供理論依據(jù)和臨床指導(dǎo)。方法1.OTM過(guò)程齦溝液內(nèi)IL-17的表達(dá)選擇20例正畸患者,分別在正畸加力前及加力后1d、3 d、7 d、2w、3w,4w于尖牙近遠(yuǎn)中側(cè)進(jìn)行GCF的取材。利用ELISA的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)IL-17的濃度。2.正畸力作用下大鼠炎性牙周組織中IL-17的表達(dá)將90只Wistar大鼠隨機(jī)平均分成5組,即：空白對(duì)照組(A組)、正常加力組(B組)、牙周炎對(duì)照組(C組)、牙周炎加力組(D組)、持續(xù)牙周炎加力組(E組)。各組分別于加力前及加力后1d、3d、5d、7d、14d處死并獲取大鼠組織,處理后制作石蠟切片。HE染色觀察牙周組織大體形態(tài)變化；免疫組化定性、定位、定量分析牙齒移動(dòng)過(guò)程牙周組織中IL-17的表達(dá)情況。3.正畸力作用下IL-17參與炎性牙周改建調(diào)控機(jī)制的研究選擇A、D組的壓力側(cè)進(jìn)一步分析,采用Trap的染色,計(jì)數(shù)OC；采用免疫組化染色定量分析RANKL、OPG的表達(dá)變化,分析IL-17與OC、RANKL、OPG的關(guān)系,從而初步探索IL-17參與炎性牙周改建的分子機(jī)理。結(jié)果1.GCF的ELISA結(jié)果正畸的加力前,齦溝液中有少量IL-17的表達(dá)；加力后,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),遠(yuǎn)中壓力(D)側(cè)和近中張力(M)側(cè)都出現(xiàn)先增高后降低的變化趨勢(shì)。雙側(cè)均在7d時(shí)達(dá)到最高水平(p0.05),4w時(shí)均恢復(fù)值正常水平(p0.05)。壓力側(cè)的整體變化幅度要明顯大于張力側(cè)。2.HE染色結(jié)果A組牙周膜(periodontal ligament, PDL)寬度接近,纖維排列整齊,牙槽骨(alveolar bone, Ab)表面平整,無(wú)明顯的成骨和破骨跡象。B組加力后,可見(jiàn)PDL寬度張力區(qū)增加,壓力區(qū)變窄；5d和7d時(shí),Ab邊緣出現(xiàn)骨吸收陷窩及破骨細(xì)胞；14d時(shí),壓力區(qū)Ab表面的破骨細(xì)胞數(shù)目減少,張力區(qū)骨表面成骨細(xì)胞鏈狀排列,并有新骨沉積。C組牙齦的溝內(nèi)上皮發(fā)生糜爛、結(jié)合上皮向根方增殖；淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞大片浸潤(rùn)；牙槽嵴頂高度降低。D組與B組相似。而E組牙周組織飛速破壞,破骨細(xì)胞數(shù)目倍增,14d時(shí),牙槽骨基本吸收至根尖1/3甚至更少,同時(shí)牙根發(fā)生吸收,破骨細(xì)胞遍布滿(mǎn)視野。3. TRAP染色結(jié)果正常牙周組織內(nèi)可見(jiàn)零星散在的幾個(gè)單核破骨細(xì)胞(mononuclear osteoclasts, MOC),幾乎無(wú)成熟的多核破骨細(xì)胞(osteoclasts, OC)。D組加力后MOC的數(shù)量增加,3d時(shí),達(dá)到最多,且有融合趨勢(shì)；5d時(shí)MOC融合而成的OC數(shù)量達(dá)到峰值,且多在壓力側(cè)固有牙槽骨表面的骨吸收陷窩內(nèi)。4.牙周組織中IL-17、RANKL、OPG的表達(dá)IL-17定位于成纖維細(xì)胞、OC、血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿。A組正常牙周組織中IL-17為弱陽(yáng)性表達(dá)；B組是加力后,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),牙周組織內(nèi)IL-17表達(dá)出現(xiàn)先增高后降低的變化趨勢(shì),5d時(shí)最強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),14d時(shí)基本恢復(fù)至正常水平(p0.05)。C組炎性牙周組織內(nèi)IL-17表達(dá)高于A組(p0.05),隨著炎癥的消退,IL-17的表達(dá)強(qiáng)度逐漸下降。D組炎性加力后,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),牙周組織內(nèi)IL-17表達(dá)同樣表現(xiàn)為先增高后降低的變化趨勢(shì),5d時(shí)最強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),但14d時(shí)略高于正常水平(p0.05)。E組持續(xù)炎癥加力后,牙周組織內(nèi)IL-17表達(dá)呈不斷增強(qiáng)狀態(tài)。RANKL及OPG主要定位于OC、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、OB等的胞漿。正常牙周組織內(nèi)兩者均為弱陽(yáng)性表達(dá),炎性加力后3d開(kāi)始,RANKL的表達(dá)量明顯增強(qiáng)(p0.05),且5d時(shí)最強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；OPG在早期表達(dá)較弱(p0.05),加力5d表達(dá)量開(kāi)始增強(qiáng),7d時(shí)呈最強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(p0.05)。炎性O(shè)TM的過(guò)程中,幾-17的表達(dá)與RANKL、OPG的表達(dá)量及OC的數(shù)量變化趨勢(shì)相一致,且與RANKL/OPG比值具有密切的相關(guān)性(r20.07)。結(jié)論1.IL-17少量存在于健康牙周組織的齦溝液中,說(shuō)明IL-17可能與正常牙周組織的生理性代謝相關(guān)。2.正畸力作用下,齦溝液內(nèi)的IL-17表達(dá)增加,且壓力側(cè)更為明顯,提示IL-17參與了機(jī)械力作用下牙周組織改建,尤其是壓力側(cè)的改建過(guò)程。3.IL-17在大鼠正常牙周組織中表達(dá)較弱,炎性牙周組織中表達(dá)增強(qiáng),且隨炎癥的逐漸消退表達(dá)量減少,表明IL-17是牙周炎癥的標(biāo)志物之一。4.炎性化學(xué)信號(hào)和機(jī)械力學(xué)信號(hào)共存時(shí),兩者會(huì)產(chǎn)生協(xié)同作用,引起IL-17釋放增多,炎癥效應(yīng)疊加,影響牙周組織改建。5.IL-17的表達(dá)變化規(guī)律與RANKL/OPG比值變化及OC數(shù)量變化規(guī)律一致且高度相關(guān),推測(cè)IL-17可能通過(guò)RANKL/OPG的路徑影響OC代謝,進(jìn)而參與牙周組織改建。
【關(guān)鍵詞】：IL-17 OTM 牙周炎 細(xì)胞核因子-kB受體活化因子配體 骨保護(hù)素
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R783.5
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 英文縮寫(xiě)詞15-16
• 前言16-19
• 第一部分 臨床齦溝液中IL-17蛋白的檢測(cè)19-26
• 材料和方法19-21
• 結(jié)果21-23
• 討論23-25
• 小結(jié)25-26
• 第二部分 正畸力作用下大鼠炎性牙周組織中IL-17的表達(dá)26-39
• 材料與方法26-30
• 結(jié)果30-34
• 討論34-38
• 小結(jié)38-39
• 第三部分 正畸力作用下IL-17參與炎性牙周改建調(diào)控機(jī)制的研究39-47
• 材料和方法39-41
• 結(jié)果41-44
• 討論44-46
• 小結(jié)46-47
• 全文總結(jié)47-49
• 附圖49-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄66-67
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表67

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本文編號(hào)：1065006