本文關(guān)鍵詞：低氧條件下紅景天苷對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人牙周膜細(xì)胞活性氧及炎癥因子表達(dá)的影響

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【摘要】：研究目的:牙周炎(Periodontitis)是威脅人類口腔健康的兩大慢性疾病之一,是由病原體及其代謝產(chǎn)物,尤其是脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激引起的持續(xù)性炎癥免疫反應(yīng),導(dǎo)致局部牙周支持組織破壞,是牙齒松動(dòng)和脫落的一個(gè)主要原因。流行病學(xué)調(diào)查顯示:在復(fù)雜多變的高原環(huán)境下,機(jī)體血液變得“黏、濃、聚、凝”,牙周組織中氧濃度急劇降低,氧化應(yīng)激升高,齦下菌群種類更加豐富,其中G-厭氧菌大量繁殖,牙周組織微環(huán)境變化,對(duì)細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物的抵抗力下降,牙周炎癥加重。由此可見高原牙周病的發(fā)病機(jī)制具有一定的特殊性,其重要防治策略是抗炎和抗氧化。然而,目前尚沒有針對(duì)高原牙周病的特異性治療藥物,牙周炎的治療仍是基礎(chǔ)治療加藥物治療或牙周手術(shù)治療等,不僅治療周期長(zhǎng),預(yù)后不佳,并且人工合成的治療藥物大多具有潛在的不安全性,侵襲性治療還會(huì)給患者造成心理上的陰影,因此非常有必要尋找一種安全有效的藥物。近年來,紅景天苷(Salidroside,SAL)受到越來越多學(xué)者的關(guān)注,它是從藥用植物紅景天中提取的一種主要活性成分,具有免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、抗抑郁、抗炎、抗氧化等多種作用。但是,SAL是否對(duì)高原牙周病有治療作用目前還未見相關(guān)報(bào)道。為探討SAL對(duì)高原牙周病的作用,本課題參照國內(nèi)外研究,選用牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)LPS刺激人牙周膜細(xì)胞建立牙周炎細(xì)胞模型并在1%O2低氧環(huán)境下培養(yǎng),檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和細(xì)胞內(nèi)外的腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factoralpha,tnf-α)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,il-1β)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,il-6)、核轉(zhuǎn)錄因子-κb(nuclearfactor-kappab,nf-κb)及胞漿中抑制蛋白(inhibitorkappab,iκba)磷酸化的表達(dá)情況,初步探討sal對(duì)低氧條件下lps誘導(dǎo)的人牙周膜細(xì)胞的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制,為預(yù)防或治療高原牙周病提供了新的思路。研究方法:1、改良酶消化組織塊貼壁法原代培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞。2、用含sal終濃度為0、30、60、100ug/mlsal的dmem分別培養(yǎng)第5代人牙周膜細(xì)胞,并于培養(yǎng)后1、2、3、4、5、6d各時(shí)間點(diǎn),采用mtt法檢測(cè)各濃度組細(xì)胞的增殖活性。3、模型建立及實(shí)驗(yàn)分組:取第5代人牙周膜細(xì)胞并將其隨機(jī)分為5組,分別用不含lps和sal的dmem(a組,對(duì)照組)以及含10ug/mllps+0ug/mlsal(b組,單純lps組)、10ug/mllps+30ug/mlsal(c組)、10ug/mllps+60ug/mlsal(d組)、10ug/mllps+100ug/mlsal(e組)的dmem進(jìn)行1%o2低氧連續(xù)培養(yǎng)6h后,收集各組細(xì)胞及其上清液,分別用2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽法(2,7-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,dcfh-da)檢測(cè)各組細(xì)胞中的ros表達(dá)水平、反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerasechainreaction,rt-pcr)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked-immunosorbentassays,elisa)檢測(cè)各組細(xì)胞tnf-α、il-1β、il-6mrna和蛋白的表達(dá)水平、westernblot法檢測(cè)a組、b組和10ug/mllps+100ug/mlsal細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子-κb(nf-κb)信號(hào)通路的磷酸化情況。研究結(jié)果:1、采用改良酶消化組織塊貼壁法,在體外能成功獲得原代人牙周膜細(xì)胞。2、mtt實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:本實(shí)驗(yàn)最大劑量100ug/ml的sal不影響低氧條件下lps誘導(dǎo)的人牙周膜細(xì)胞的增殖活力(p(29)0.05)。3、dcfh-da實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較,單純LPS組人牙周膜細(xì)胞內(nèi)的ROS顯著升高(P0.05);與LPS組比較,3個(gè)SAL實(shí)驗(yàn)組人牙周膜細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)降低(P0.05),且具有劑量依賴性。4、RT-PCR和ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:和對(duì)照組比較,單純LPS組人牙周膜細(xì)胞的TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)顯著升高(P0.05);與單純LPS組比較,3個(gè)SAL實(shí)驗(yàn)組TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)降低(P0.05),且具有劑量依賴性。5、Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:和對(duì)照組比較,單純LPS組人牙周膜細(xì)胞的NF-κB和IκBa的磷酸化水平升高(P0.05);與單純LPS組比較,100ug/ml的SAL實(shí)驗(yàn)組的人牙周膜細(xì)胞的NF-κB和IκBa的磷酸化水平降低(P0.05)。研究結(jié)論:1、本實(shí)驗(yàn)最大劑量100ug/ml的SAL不影響人牙周膜細(xì)胞的增殖,無毒副作用,是安全的。2、SAL可降低低氧條件下LPS誘導(dǎo)的人牙周膜細(xì)胞的ROS和TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子表達(dá),具有一定的保護(hù)人牙周膜細(xì)胞的作用。這個(gè)保護(hù)機(jī)制可能是SAL抑制人牙周膜細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的磷酸化。3、SAL可作為高原牙周病的預(yù)防和治療用藥,為高原牙周病提供了一個(gè)新的治療思路。
【關(guān)鍵詞】：紅景天苷 人牙周膜細(xì)胞 脂多糖 活性氧 炎癥細(xì)胞因子 核轉(zhuǎn)錄因子
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-30
• 結(jié)果30-36
• 討論36-42
• 全文總結(jié)42-44
• 參考文獻(xiàn)44-56
• 縮略語表56-58
• 致謝58-60
• 高原低氧環(huán)境與牙周炎癥的相關(guān)性研究 綜述60-74
• 參考文獻(xiàn)68-74

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本文編號(hào)：1050306