本文關(guān)鍵詞：miR-31-5p對(duì)C2C12細(xì)胞增殖與肌向分化的調(diào)控作用

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【摘要】：背景:miRNA是一類小分子非編碼RNA,可以通過與其靶mRNA的完全或不完全互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后階段調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)。miRNA在人類及其他生物物種中都有不同程度的時(shí)空表達(dá)特異性,參與了包括發(fā)育、分化、腫瘤發(fā)生、病毒感染等多種生理和病理過程,對(duì)于miRNA與骨骼肌發(fā)育相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究是近幾年的研究熱點(diǎn)之一。骨骼肌發(fā)育與分化的過程,是多因子共同調(diào)控的結(jié)果,其中生肌調(diào)節(jié)因子(MRFs)起著至關(guān)重要的核心作用。四種生肌調(diào)節(jié)因子既可以在骨骼肌成肌過程的不同階段發(fā)揮自己獨(dú)特的作用,總體來說又對(duì)骨骼肌發(fā)育過程中有一定的協(xié)同作用。如MyoD與Myf5被認(rèn)為是在骨骼肌發(fā)育的早期發(fā)揮細(xì)胞命運(yùn)定向與啟動(dòng)后續(xù)成肌程序的作用,而Myogenin與MRF4被認(rèn)為是在前者的下游,相當(dāng)于被上述兩因子激活后完成后續(xù)成肌細(xì)胞的融合促進(jìn)骨骼肌的成肌分化。目前對(duì)成肌調(diào)節(jié)因子研究結(jié)果顯示,在正常的成肌過程中四種成肌調(diào)節(jié)因子都有不同程度的表達(dá),只是在不同的時(shí)期由各自發(fā)揮其主導(dǎo)作用。C2C12成肌細(xì)胞系是從小鼠C3H細(xì)胞中分離得到的成肌細(xì)胞系,體外培養(yǎng)時(shí)增殖與分化的能力都較強(qiáng),可以通過改變培養(yǎng)基中存在血清的量來促進(jìn)其肌向分化,較常被選為在體外研究骨骼肌成肌細(xì)胞增殖與分化的模型,在體外條件下模擬骨骼肌細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育過程以供研究骨骼肌發(fā)育的具體調(diào)控機(jī)制。近年來對(duì)miR-31-5p研究的熱點(diǎn)主要集中在其調(diào)控一些腫瘤的生物學(xué)行為上。miR-31-5p與其他已證實(shí)其調(diào)控機(jī)制的miRNA類似,通過對(duì)其靶mRNA的降解或阻礙后續(xù)蛋白翻譯,進(jìn)而通過發(fā)揮對(duì)下游對(duì)應(yīng)基因表達(dá)的調(diào)控從而對(duì)后續(xù)生命活動(dòng)發(fā)揮調(diào)控作用。但是,目前關(guān)于mir-31-5p對(duì)于骨骼肌細(xì)胞增殖、分化調(diào)控作用的相關(guān)研究還少有報(bào)道。目的:在體外條件下,通過檢測(cè)c2c12細(xì)胞增殖時(shí)的細(xì)胞活性、體外誘導(dǎo)肌向分化不同階段中各生肌因子的相對(duì)表達(dá)量,研究上調(diào)和下調(diào)mir-31-5p對(duì)c2c12細(xì)胞系增殖與肌向分化的影響,并進(jìn)一步探討可能的作用機(jī)制,為mirna調(diào)控骨骼肌發(fā)育相關(guān)的機(jī)制探究提供可能的理論依據(jù)。方法:1.建立c2c12細(xì)胞體外誘導(dǎo)肌向分化實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?檢測(cè)肌向分化不同階段mir-31-5p的相對(duì)表達(dá)量。2.利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),上調(diào)或下調(diào)c2c12細(xì)胞中mir-31-5p的表達(dá)量,并于轉(zhuǎn)染24h后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。3.應(yīng)用cck-8法檢測(cè)上調(diào)或下調(diào)mir-31-5p對(duì)c2c12細(xì)胞增殖水平的影響。4.將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞繼續(xù)體外誘導(dǎo)肌向分化,應(yīng)用qrt-pcr技術(shù)檢測(cè)各時(shí)期實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中生肌調(diào)節(jié)因子myod與myogenin的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:1.mir-31-5p在c2c12體外肌向誘導(dǎo)分化過程中呈動(dòng)態(tài)表達(dá),且在分化第四天,其表達(dá)較前期表達(dá)量顯著降低(p0.001)。2.qrt-pcr結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染mir-31-5pmimics與inhibitor后24h后,轉(zhuǎn)染mir-31-5pmimics的c2c12細(xì)胞中mir-31-5p的表達(dá)量顯著高于陰性對(duì)照組,其上升倍數(shù)約為42倍(p0.01);而轉(zhuǎn)染mir-31-5pinhibitor的c2c12細(xì)胞中mir-31-5p的表達(dá)量較陰性對(duì)照組顯著降低。3.cck-8結(jié)果表明,上調(diào)c2c12細(xì)胞mir-31-5p的表達(dá)后,c2c12細(xì)胞增殖水平在48h時(shí)顯著下降(p0.01);下調(diào)c2c12細(xì)胞中mir-31-5p的表達(dá)后,c2c12細(xì)胞增殖活性在24h、36h與48h時(shí)均顯著升高(p0.01)。4.qrt-pcr結(jié)果顯示,上調(diào)mir-31-5p后,c2c12肌向分化的第四天,myod和myogenin的表達(dá)均顯著低于對(duì)照組(p0.05);下調(diào)mir-31-5p的表達(dá)后,在c2c12肌向分化的第四天,myod(p0.01)和myogenin(p0.05)的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組。結(jié)論:miR-31-5p可抑制C2C12細(xì)胞增殖,在C2C12誘導(dǎo)肌向分化過程中表達(dá)呈動(dòng)態(tài)變化,同時(shí)對(duì)生肌調(diào)節(jié)因子MyoD和Myogenin表達(dá)有具有負(fù)調(diào)控作用,提示了miR-31-5p對(duì)C2C12細(xì)胞的增殖和肌向分化具有調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：miR-31-5p C2C12 細(xì)胞系 生肌調(diào)節(jié)因子 增殖 分化
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-16
• 材料和方法16-21
• 1. 材料16-17
• 2. 方法17-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述36-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 致謝49-50

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本文編號(hào)：1049078