本文關(guān)鍵詞：心理應(yīng)激對大鼠實驗性口腔潰瘍愈合影響的研究

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【摘要】：科技高速發(fā)展的全方位的滲透,隨之而來是社會競爭的日益激烈、工作生活狀態(tài)的快節(jié)奏化加之自身狀態(tài)的調(diào)節(jié)不善等,這些都為成為現(xiàn)代人各種生理及心理應(yīng)激的來源。過強持久的應(yīng)激會對機體產(chǎn)生不利影響,甚至會導(dǎo)致一系列疾病的產(chǎn)生。大量研究表明,心理應(yīng)激與全身系統(tǒng)性疾病的發(fā)生發(fā)展存在相關(guān)關(guān)系�？谇粷兓疾÷示涌谇火つげ≈�,嚴重影響患者的生活質(zhì)量,病因及致病機制不明且存在明顯個體差異,其中異常的免疫反應(yīng)及不良的環(huán)境因素與口腔潰瘍的發(fā)生密切相關(guān)。研究證實長期持續(xù)的心理應(yīng)激可以導(dǎo)致機體的免疫力低下,引起機體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。心理應(yīng)激作為一種不良的外界刺激因素,當機體受到應(yīng)激時,交感神經(jīng)興奮、HPA軸激活,抑制細胞免疫而增強體液免疫,影響機體免疫系統(tǒng);在創(chuàng)傷修復(fù)中,炎性細胞因子釋放水平的改變造成成纖維細胞分化延遲,最終導(dǎo)致皮膚及黏膜創(chuàng)口的愈合時間延長。同時,口腔潰瘍的發(fā)生與緊張刺激的心理反應(yīng)密切相關(guān)。綜上所述,心理應(yīng)激可以引發(fā)機體的異常免疫反應(yīng),同時作為環(huán)境因素整的不良因素,在口腔潰瘍的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。那么,在口腔潰瘍的愈合過程中,負性心理因素是否會影響潰瘍愈合的進程,以及其中的分子機制如何,值得我們?nèi)ヌ骄�。因�?本研究基于前期工作基礎(chǔ),選取心理應(yīng)激-免疫-口腔潰瘍這條主線,通過慢性束縛建立大鼠心理應(yīng)激模型及燒灼法建立大鼠實驗性口腔潰瘍模型,采用行為學實驗、elisa技術(shù)、組織病理學染色、免疫組織化學染色等方法觀察在應(yīng)激狀態(tài)下口腔潰瘍的發(fā)展、愈合以及愈合影響因子的表達變化,初步探究心理應(yīng)激對口腔潰瘍愈合的影響及其分子機制,為下一步深入研究提供了實驗依據(jù),也為臨床與心因性因素相關(guān)的口腔潰瘍的發(fā)生及治療提供指導(dǎo)。本研究分為以下三部分實驗:第一部分:大鼠心理應(yīng)激模型及實驗性口腔潰瘍模型的建立與評價采用完全隨機方法將大鼠分為四組:對照組(control)、潰瘍組(u)、潰瘍+心理應(yīng)激組(u+s)、潰瘍+心理應(yīng)激+抗應(yīng)激藥物組(u+s+m)。每組再按照實驗時間點隨機分為0h(刺激后即刻)、24h、48h、72h、120h組。采用束縛應(yīng)激的方式建立大鼠慢性心理應(yīng)激模型,潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組和抗應(yīng)激藥物組大鼠每日給予6h束縛應(yīng)激,連續(xù)應(yīng)激7d。7d后,使用尖端直徑為4mm的單電電極灼燒單純潰瘍組、潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組和抗應(yīng)激藥物組大鼠舌背部建立心理應(yīng)激環(huán)境下的口腔潰瘍模型。模型建立成功后,潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組和抗應(yīng)激藥物組按照時間點要求繼續(xù)給予應(yīng)激,同時抗應(yīng)激藥物組于每日實驗前半小時按1mg/kg皮下注射地西泮,于每日實驗前進行大鼠體重測量,應(yīng)激結(jié)束后進行行為學及血清學檢測驗證動物應(yīng)激模。結(jié)果顯示:潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組大鼠體重增長速度明顯減慢、行為學異常、血清皮質(zhì)酮(corticosterone,cort)與促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropichormone,acth)水平顯著升高。而地西泮能夠減輕動物的應(yīng)激樣行為學、血清學變化。本部分實驗結(jié)果證實慢性束縛應(yīng)激能夠使大鼠處于心理應(yīng)激狀態(tài),心理應(yīng)激模型建立有效。電極灼燒后舌體部黏膜出現(xiàn)潰瘍組織面,覆蓋黃色假膜,周邊有充血紅暈帶,中央凹陷,符合口腔潰瘍“紅、黃、凹”的臨床特征。he組織病理顯示炎細胞大量浸潤,固有層內(nèi)膠原纖維水腫變性,毛細血管充血擴張,膠原沉積等,表現(xiàn)出典型的口腔潰瘍的組織學特點。證實該實驗方法的可靠性。第二部分:心理應(yīng)激對大鼠實驗性口腔潰瘍自然愈合的影響我們通過大體及組織學觀察不同時間點潰瘍組織的愈合情況,探討心理應(yīng)激對大鼠實驗性口腔潰瘍愈合的影響。結(jié)果顯示,0h時,各實驗組間無顯著性差異。舌體黏膜組織呈現(xiàn)由壞死組織和以中性粒細胞為主的炎性滲出物覆蓋的潰瘍;黏膜固有層可觀察到中、高強度的充血及水腫;潰瘍基底部觀察到離散、中度的血管再生。24h、48h時,肉芽組織、血管生成和膠原沉積在單純潰瘍組明顯比潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組更加強烈。72h時進入潰瘍修復(fù)期,單純潰瘍組黏膜上皮水腫消失,可見少量新生上皮,炎癥細胞浸潤明顯減少,仍以中性粒細胞及淋巴細胞為主;黏膜固有層中大量新生膠原,排列較整齊,可見新生肉芽組織,血管再生明顯。潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組與單純潰瘍組相比,炎癥細胞仍大量浸潤;黏膜上皮固有層內(nèi)膠原纖維排列紊亂,炎癥明顯,血管再生較少。抗應(yīng)激藥物組與潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組相比,炎癥細胞浸潤明顯減少,固有層可見大量新生膠原,血管再生明顯。以上結(jié)果說明,心理應(yīng)激對大鼠實驗性口腔潰瘍的自然愈合有負性影響作用,而地西泮的應(yīng)用能夠在一定程度上逆轉(zhuǎn)這種負性效應(yīng)。第三部分:心理應(yīng)激對大鼠實驗性口腔潰瘍影響的分子機制初探在本部分實驗中,以hsp70以及egf在潰瘍區(qū)域的表達作為切入點,運用免疫組織化學染色方法檢測潰瘍部位熱休克蛋白70(hsp70)及表皮生長因子(egf)的表達情況。hsp70表達結(jié)果顯示:在各個時間點,正常對照組hsp70均呈陰性或低表達,單純潰瘍組大鼠潰瘍區(qū)域hsp70部分表達。隨著實驗時間的延長,各實驗組間hsp70表達量逐漸增加,潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組hsp70表達量高于正常對照組及單純潰瘍組間,且存在統(tǒng)計學差異。72h時,潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組hsp70表達達到最高峰,抗應(yīng)激藥物組較心理應(yīng)激組hsp70表達量有所升高,無統(tǒng)計學差異。egf表達結(jié)果顯示:在各時間點,正常對照組均有陽性表達,而其余各實驗組燒灼產(chǎn)生潰瘍后,egf陽性細胞數(shù)增加。隨著實驗時間的延長,各實驗組egf表達量逐漸增多,其中48h時egf表達量增幅最大。除0h以外,各時間點egf表達量在潰瘍復(fù)合心理應(yīng)激組均低于單純潰瘍組,且具有統(tǒng)計學差異。48h及72h時,egf表達量在抗應(yīng)激藥物組高于心理應(yīng)激組,且具有統(tǒng)計學差異。實驗結(jié)論:1、慢性束縛應(yīng)激可以使大鼠產(chǎn)生心理應(yīng)激狀態(tài),引起一系列應(yīng)激性改變;灼燒法可以有效建立大鼠實驗性口腔潰瘍模型。2、心理應(yīng)激可以減慢潰瘍黏膜愈合過程中炎癥消除、膠原沉積、血管再生等,從而影響口腔黏膜組織的修復(fù)。3、潰瘍愈合期,心理應(yīng)激使得HSP70的表達升高,提示HSP70在口腔黏膜組織修復(fù)中起到一定作用。4、潰瘍愈合期,心理應(yīng)激使得EGF的表達量降低,證實EGF參與了潰瘍的愈合過程,提示這可能是心理應(yīng)激影響潰瘍黏膜組織愈合的機制之一。5、抗應(yīng)激藥物地西泮能夠有效拮抗心理應(yīng)激帶來的口腔黏膜負性效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：心理應(yīng)激 電極灼燒 實驗性口腔潰瘍 黏膜愈合 熱休克蛋白70 表皮生長因子 地西泮
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R781.5
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 文獻回顧16-26
• 1 心理應(yīng)激研究進展16-20
• 2 口腔潰瘍病因相關(guān)研究現(xiàn)狀20-23
• 3 HSP7023-24
• 4 EGF24-26
• 第一部分 大鼠心理應(yīng)激模型及實驗性口腔潰瘍模型的建立與評價26-35
• 1 材料26-27
• 2 方法27-29
• 3 結(jié)果29-32
• 4 討論32-35
• 第二部分 心理應(yīng)激對大鼠實驗性口腔潰瘍自然愈合的影響35-40
• 1 材料35
• 2 方法35-36
• 3 結(jié)果36-38
• 4 討論38-40
• 第三部分 心理應(yīng)激對大鼠實驗性口腔潰瘍影響的分子機制初探40-45
• 1 材料40
• 2 方法40-41
• 3 結(jié)果41-44
• 4 討論44-45
• 小結(jié)45-47
• 參考文獻47-55
• 附錄55-56
• 個人簡歷和研究成果56-57
• 致謝57

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本文編號：1048557