本文關鍵詞：低能量激光照射對受牽張力刺激的人牙周膜細胞成骨分化的影響

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【摘要】：目的:建立人牙周膜細胞(human periodontal ligament cells h PDLCs)體外張應力加載模型,探討弱激光照射(low level laser irradiation,LLLI)對受張應力刺激的h PDLCs成骨分化的影響,為揭示LLLI促進正畸牙移動的分子生物學機制奠定理論基礎。方法:1、取臨床健康青少年(12-16歲)因正畸治療需要拔除的雙尖牙根中1/3牙周膜組織,通過組織塊結(jié)合酶消化法對h PDLCs進行原代分離培養(yǎng),常規(guī)的換液、消化、傳代,細胞呈貼壁生長狀態(tài)。取第三代細胞用于細胞來源的鑒定,第四代細胞用于本實驗中。2、人牙周膜細胞應力及激光加載實驗:取第四代細胞常規(guī)復蘇后,分為三組,即A組(空白組)、B組(張應力加載組)和C組(弱激光照射并張應力加載組),接種于6孔板中。A組細胞既不加力也不照射;B組細胞分別給予2h、6h、12h、24h的10%周期性張應力刺激;C組細胞先進行2s、5s激光照射,再分別進行2h、6h、12h、24h的周期性張應力加載。3、提取各組細胞的總RNA和總蛋白,通過實時熒光定量檢測技術(shù)(q RT-PCR)和免疫印跡(Western Blotting)檢測技術(shù),對各組成骨分化指標ALP、Runx2、OCN進行基因及蛋白檢測。4、應用SPSSl7.0醫(yī)用統(tǒng)計軟件包進行方差分析。實驗所得數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差(?x±s)表示。應用方差分析的統(tǒng)計方法,對A組、B組、C組各指標的m RNA和蛋白表達量差異進行統(tǒng)計學分析;使用LSD-t檢驗方法進行均數(shù)間的兩兩比較,以p0.05視為有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:1、h PDLCs鑒定:鏡下觀察,細胞呈長梭形,排列成放射狀或是漩渦狀。細胞抗波形絲蛋白染色陽性,抗角蛋白染色陰性,說明所得細胞為間充質(zhì)來源。2、q RT-PCR檢測結(jié)果顯示:不同的加力時間段,不同的激光照射劑量條件下,ALP、Runx2、OCN的m RNA表達量A組、B組、C組任兩組間比較差異有顯著性(p0.05)。C1、C2組之間比較差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),隨加力時間延長,激光照射時間增加,m RNA的表達增強,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。3、Western Blotting檢測結(jié)果顯示:ALP、Runx2、OCN的蛋白表達量隨加力時間和激光照射時間增加而增加,各組之間差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);C1、C2組蛋白表達量比較差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。A組、B組、C組蛋白表達量結(jié)果與m RNA表達趨勢一致。結(jié)論:1、組織塊聯(lián)合酶消化法培養(yǎng)人牙周膜細胞,操作簡單,培養(yǎng)成功率高,是一種可行的原代培養(yǎng)方法。2、弱激光照射能夠加速并增強受周期性張應力刺激的人牙周膜細胞成骨分化指標ALP、Runx2、OCN的m RNA和蛋白表達。3、在一定劑量范圍內(nèi),隨著能量密度增加,LLLI促進受張應力刺激的人牙周膜細胞成骨分化的作用增強。
【關鍵詞】：弱激光 牙周膜細胞 周期性張應力 牙移動
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R783.5
【目錄】：

• 摘要2-4
• abstract4-9
• 引言9-11
• 第一章 人牙周膜細胞周期性張應力加載模型的建立11-21
• 1. 主要實驗材料11-12
• 2. 實驗方法12-15
• 2.1 人牙周膜細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定12-14
• 2.2 PDLCs 組織來源鑒定14-15
• 3. 實驗結(jié)果15-19
• 4. 討論19-20
• 5. 結(jié)論20-21
• 第二章 弱激光照射對受周期性張應力的人牙周膜細胞ALP、Runx2、OCN mRNA表達的影響21-33
• 1. 主要實驗材料21
• 2. 實驗方法21-25
• 2.1 人牙周膜細胞周期性張應力及弱激光加載實驗21-22
• 2.2 總 RNA 提取以及實時熒光定量 PCR（q RT-PCR）檢測 ALP、Runx2、OCN 的 m RNA 表達22-25
• 2.3 統(tǒng)計學分析25
• 3. 實驗結(jié)果25-31
• 4. 討論31-33
• 第三章 弱激光照射對受周期性張應力刺激的人牙周膜細胞ALP、Runx2、OCN蛋白表達的影響33-41
• 1. 主要實驗材料33
• 2. 實驗方法33-37
• 2.1 實驗分組33
• 2.2 人牙周膜細胞周期性張應力加載及弱激光照射實驗33-34
• 2.3 收集蛋白樣品，，用免疫印跡（Western Blotting）技術(shù)檢測目標蛋白 ALP、OCN、Runx2 的蛋白表達34-37
• 3. 實驗結(jié)果37-40
• 4. 討論40-41
• 全文總結(jié)41-42
• 參考文獻42-45
• 綜述45-55
• 綜述參考文獻51-55
• 攻讀學位期間的研究成果55-56
• 英文縮略詞表56-57
• 致謝57-58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Jyun-Yi Wu;Chia-Hsin Chen;Li-Yin Yeh;Ming-Long Yeh;Chun-Chan Ting;Yan-Hsiung Wang;;Low-power laser irradiation promotes the proliferation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament cells via cyclic adenosine monophosphate[J];International Journal of Oral Science;2013年02期

2 高東輝;李軍;孫晶;曲志杰;常曉敏;李小菊;;牙周膜干細胞的研究進展[J];中國老年學雜志;2012年15期

3 李菲菲;丁寅;陳富林;李少妮;馮雪;;機械牽張應力對成骨細胞增殖和分化影響的初步研究[J];口腔醫(yī)學研究;2012年06期

4 李秋實;陳英新;周延民;;低能量激光治療對成骨細胞的生物效應研究進展[J];中國激光醫(yī)學雜志;2011年05期

5 徐晶;高蔚虹;張翔;;Nd:YAG激光與IPSe.max全瓷冠聯(lián)合治療前牙不良修復體引起的牙齦增生72例分析[J];中國誤診學雜志;2011年12期

6 劉慧平;;激光治療儀輔助治療重型口炎病人的護理[J];護理研究;2011年11期

7 汪蕾;何飛;毛斌;張綱;;Nd:YAG激光治療牙本質(zhì)過敏的臨床療效觀察[J];激光雜志;2010年04期

8 陳莉花;陳文靜;顧敏;王天叢;;大鼠牙移動過程中牙周膜中Runx2的表達[J];口腔醫(yī)學;2010年05期

9 趙和平;楊磊;丁寅;李東;;實時定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應檢測機械力對人牙周膜細胞骨鈣素表達的影響[J];實用醫(yī)技雜志;2009年05期

10 彭庭莉,楊軍,周繼祥,楊彥春;不同張應力對體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞形態(tài)和纖維型肌動蛋白改變的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2005年09期

本文編號：1017651