發(fā)布時間：2017-10-05 09:00

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用iTRAQ技術(shù)對阿爾茨海默病患者和正常老人顳葉組織進行差異蛋白分析

  更多相關(guān)文章： 阿爾茨海默病 蛋白質(zhì)組學(xué) 同位素標(biāo)記相對和絕對定量技術(shù) 尸檢顳葉組織 免疫印記 小腦皮層 正常增齡 阿爾茨海默病 膠質(zhì)纖維酸性蛋白 鈣結(jié)合蛋白-D28k

【摘要】：研究目的及意義：阿爾茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)是癡呆最常見的一種類型,約占老年癡呆的55%，其病理特征是細胞外β-淀粉樣蛋白沉積所致老年斑(senile plaques, SP)和細胞內(nèi)過度磷酸化的tau蛋白所致神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles, NFT)，其常見的沉積部位如海馬，額葉和顳葉。老齡腦與AD有著相互重疊的病理和生化改變。應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)從整體角度分析細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)組成和表達水平，將有助于篩選出AD早期診斷的分子標(biāo)志物,有的或可成為新藥設(shè)計的分子靶點。本研究旨在分析正常老年人和AD患者顳葉腦皮質(zhì)組織中的差異蛋白，為進一步研究AD發(fā)病機制奠定基礎(chǔ)。 主要內(nèi)容：從解放軍總醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)研究所老年組織庫中選取12例尸檢的老年人顳葉腦皮質(zhì)組織標(biāo)本，分為正常老年組(n=6)和AD組(n=6),1.利用HE、免疫組織化學(xué)方法對病例進行篩選，根據(jù)病理診斷標(biāo)準確診后，結(jié)合臨床診斷分組；2.應(yīng)用同位素標(biāo)記相對和絕對定量技術(shù)(isobaric tags for relative and absolutequantitation，iTRAQ)及二維液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(two-dimensional liquidchromatography-tandem mass spectrometry,2D LC-MS/MS)方法鑒定蛋白，利用生物信息學(xué)分析工具DAVID對質(zhì)譜鑒定的蛋白進行GO功能注釋、蛋白質(zhì)功能富集分析及PATHWAY定位分析，并分析差異蛋白在AD發(fā)病機制中的作用。3.對差異蛋白進行western blot驗證，驗證蛋白質(zhì)組分析的穩(wěn)定性和準確性。 結(jié)果：在正常老年組和AD組尸檢的顳葉腦皮質(zhì)組織中，經(jīng)質(zhì)譜鑒定共獲得3071種蛋白，生物信息分析差異蛋白質(zhì)有146種，與正常老年組相比，AD組中，有62種蛋白質(zhì)表達上調(diào)和84種蛋白質(zhì)表達下調(diào)。進一步分析從146種差異蛋白中發(fā)現(xiàn)7種AD通路相關(guān)蛋白（p=7.8E-3)，即基因轉(zhuǎn)錄翻譯的差異蛋白質(zhì)：絲裂原活化蛋白激酶1(mitogen activated protein kinase-1,MAPK-1)、NADH脫氫酶(nicotinamide adenine dinucleotide [H], NADH)亞基Ⅵ、亞基Ⅹ和細胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase, COX)亞基Ⅰ、亞基Ⅱ、亞基Ⅲ和亞基Ⅳ。western blot驗證顯示，MAPK-1蛋白在AD組中較正常老年組中表達上調(diào)，是正常老年組的1.473倍，而iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)分析顯示AD組MAPK-1蛋白表達也是同樣上調(diào)，AD組是正常老年組的1.57倍，證明蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果較好的可信度和準確性。結(jié)論：iTRAQ技術(shù)快速、有效地篩選出多種與AD相關(guān)的差異蛋白，為AD疾病采取有效預(yù)防措施或?qū)ふ抑委煱悬c的研究提供了基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)資料。 本文旨在研究正常增齡和阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)小腦結(jié)構(gòu)異同點。將收集的20例尸檢的老年男性小腦皮層組織分為3組：中年組、正常老年組和阿爾茨海默�。ˋD）組。Nissl染色用于測量小腦皮層顆粒細胞數(shù)量和小腦皮層的厚度變化、免疫組織化學(xué)觀察膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）免疫染色的星型膠質(zhì)細胞和鈣結(jié)合蛋白D28K（CB）免疫染色的蒲肯野細胞(Purkinje cells, PCs)數(shù)量的變化。結(jié)果顯示,與中年組相比，在正常老年組，分子層、顆粒層和小腦總皮層厚度顯著減小(p0.05),蒲肯野細胞(Purkinje cells, PCs)和顆粒細胞密度均減�。╬0.05）；星型膠質(zhì)細胞的數(shù)目顯著增加；在AD組與正常老年組比較顯示，AD組分子層和小腦總皮層厚度明顯減�。╬0.05)，，星型膠質(zhì)細胞數(shù)量有所增加。結(jié)果提示，正常增齡和AD的過程均影響人小腦皮層結(jié)構(gòu)變化，主要表現(xiàn)在PCs和顆粒細胞數(shù)目減少，而星型膠質(zhì)細胞數(shù)目的增加。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 蛋白質(zhì)組學(xué) 同位素標(biāo)記相對和絕對定量技術(shù) 尸檢顳葉組織 免疫印記 小腦皮層 正常增齡 阿爾茨海默病 膠質(zhì)纖維酸性蛋白 鈣結(jié)合蛋白-D28k
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 第一部分5-35
• 英文縮略語5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 材料和方法11-17
• 結(jié)果17-19
• 結(jié)論19-30
• 討論30-32
• 參考文獻32-35
• 第二部分35-56
• 英文縮略語36-37
• 中文摘要37-38
• Abstract38-39
• 前言39-40
• 材料和方法40-44
• 結(jié)果44-49
• 討論49-51
• 參考文獻51-56
• 綜述56-66
• 參考文獻63-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67-68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李玉梅;付劍亮;;阿爾茨海默病的線粒體功能紊亂機制[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2013年01期

2 崔虎;關(guān)立克;;絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)在動脈粥樣硬化中的意義[J];吉林醫(yī)學(xué);2013年01期

3 ;Involvement of the crebellum in sequential finger movement learning:Evidence from functional magnetic resonance imaging[J];Chinese Science Bulletin;2005年17期

本文編號：975881