本文關(guān)鍵詞：CUMS致大鼠行為學(xué)及TMJ髁突軟骨改變的自然轉(zhuǎn)歸研究

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【摘要】：心理應(yīng)激屬于應(yīng)激的一種，指機體對客觀要求和環(huán)境所作出的生理和心理上的緊張反應(yīng)。心理應(yīng)激根據(jù)應(yīng)激因子作用時長可分為慢性心理應(yīng)激和急性心理應(yīng)激，其危害大小與應(yīng)激源的強度及人員的心理素質(zhì)和耐受能力有關(guān)，外部可表現(xiàn)為情緒和行為異常，嚴(yán)重者可能引發(fā)機體產(chǎn)生器質(zhì)性病變。許多研究報道表明，當(dāng)人們經(jīng)歷過重大的災(zāi)難性事件或情感創(chuàng)傷后，這些重大事件給人們心理留下的陰影不會隨著事件的過去而迅速消失，有些人可能會就此終身受到影響，并以噩夢、反復(fù)回想創(chuàng)傷性事件的形式一次次受到傷害，他們中大多數(shù)人一般會否認(rèn)或回避與創(chuàng)傷相關(guān)的事件。經(jīng)歷過應(yīng)激后的這些人一般會在幾個月或幾年后出現(xiàn)應(yīng)激性精神障礙的癥狀，如果持續(xù)3個月以上，此時就不單單是情緒障礙癥狀了，而成為了慢性的應(yīng)激障礙疾病。這種應(yīng)激障礙在嚴(yán)重程度上會隨著治療的進行有所減輕，但不會消失，長此以往有些病人會產(chǎn)生嚴(yán)重的功能殘疾。 重大的創(chuàng)傷性事件通常屬于急性應(yīng)激，但是其影響卻可以是慢性的�，F(xiàn)在的城市生活中，大多數(shù)人們面對的是長期而相對較常見的生活事件，如學(xué)習(xí)和工作成績的競爭、就業(yè)的壓力、子女教育、贍養(yǎng)父母等等難題，當(dāng)實際能力與環(huán)境要求不能達成一致時，在這樣的壓力環(huán)境下生活的人們?nèi)菀桩a(chǎn)生抑郁情緒，甚至導(dǎo)致機體出現(xiàn)不同程度的病損，如胃潰瘍及各種心血管疾病。 顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病在臨床上的癥狀包括關(guān)節(jié)疼痛、活動度異常及關(guān)節(jié)彈響等，它的發(fā)病與多種因素有關(guān)，其中心理社會因素（精神緊張、焦慮、抑郁等）是一種不可忽視的誘因，甚至可以單獨作為病因引起口頜肌結(jié)構(gòu)異常和功能紊亂，進而導(dǎo)致顳下頜關(guān)節(jié)出現(xiàn)功能或結(jié)構(gòu)紊亂【1-3】。不適癥狀及其對患者造成的心理壓力又會作為一種新的慢性心理應(yīng)激，加重患者的焦慮或抑郁程度，打斷這種惡性循環(huán)對于治療顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病是有尤為重要的。生活中常見的各種應(yīng)激對生命個體的影響會不會隨著應(yīng)激事件的解決而消失，目前尚沒有明確的定論，如果在完全脫離應(yīng)激環(huán)境后機體的各種改變會不會逐漸回到正常？如果能夠恢復(fù)到正常水平需要多長時間？這個恢復(fù)時間是不是和刺激暴露時間成正比關(guān)系？這一系列問題都值得我們?nèi)ド钊胙芯俊?由于本科題組前期已經(jīng)通過建立慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激（chronic unpredictablemild stress，CUMS）8周和12周的動物模型，觀察到大鼠表現(xiàn)出明顯的抑郁癥狀，關(guān)節(jié)和咬肌都出現(xiàn)形態(tài)學(xué)損傷，咬肌的能量代謝、自由基代謝及酶類表達異常，而且髁突軟骨中的炎性因子、基質(zhì)金屬蛋白酶和其抑制劑的蛋白和基因表達均有升高，證明了CUMS可造成大鼠口頜系統(tǒng)的嚴(yán)重損傷【99、115】。因此，本課題沿用前期實驗所建立的CUMS模型，在前期研究的基礎(chǔ)上觀察去除應(yīng)激后，動物應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)和髁突軟骨改變的轉(zhuǎn)歸情況。 本課題分為兩部分： 第一部分：CUMS對大鼠行為學(xué)的影響及自然轉(zhuǎn)歸的研究 CUMS模型由7種柔和的應(yīng)激因子組成，7種應(yīng)激通過隨機方式排列，每日對大鼠施加一種應(yīng)激，連續(xù)不間斷施加8周和12周。 144只SD雄性大鼠，按應(yīng)激時間長短分為8周應(yīng)激組和12周應(yīng)激組，分別接受8周和12周的CUMS應(yīng)激。8周應(yīng)激組按自然恢復(fù)時間長短分為去除應(yīng)激后0周（應(yīng)激即刻組）、2周、4周、8周組，每個應(yīng)激組都有一個相應(yīng)時間點的空白對照組；12周應(yīng)激組按恢復(fù)時間長短分為去除應(yīng)激后0周（應(yīng)激即刻組）、2周、4周、8周、12周組，每個組都有一個相應(yīng)時間點的空白對照組。所有8周及12周組都分別接受8周和12周的慢性不可預(yù)見性應(yīng)激，所有空白對照組不接受任何應(yīng)激。應(yīng)激結(jié)束后，動物按照SPF級動物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)正常飼養(yǎng)，在規(guī)定的時間點對各組動物進行行為學(xué)測試后麻醉、眼球取血，之后脫頸處死。 應(yīng)激期間及去除應(yīng)激后每周測量一次大鼠體重，繪制大鼠體重變化折線圖。大鼠應(yīng)激后通過攝糖實驗測定大鼠的糖水偏愛度、曠場實驗對大鼠行為學(xué)進行評估，取血后，用酶聯(lián)免疫吸附實驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測量大鼠血清中促腎上腺皮質(zhì)激素（adrenocorticotropic hormon，ACTH）和皮質(zhì)醇（corticosterone，CORT）的濃度，通過以上指標(biāo)觀察大鼠全身狀態(tài)的改變及恢復(fù)狀況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CUMS可對大鼠的體重增長量及糖水偏愛度產(chǎn)生明顯影響，8周和12周應(yīng)激組大鼠體重增長量明顯低于對照組，且糖水偏愛度下降；曠場實驗的結(jié)果顯示，8周和12周應(yīng)激大鼠在曠場中的總移動速率及總移動距離下降、中央停留時間上升；血清學(xué)ELISA檢驗顯示，8周和12周應(yīng)激組大鼠的血清CORT及ACTH濃度升高。去除應(yīng)激后，大鼠的體重一直以較慢的速度在增長；應(yīng)激8周結(jié)束，2周后大鼠糖水偏愛度明顯升高，4周時即達到與對照組同一水平；應(yīng)激12周的大鼠攝糖實驗在恢復(fù)前2周沒有明顯改變，恢復(fù)4周時有所升高，到8周時達到與對照組同一水平。8周應(yīng)激組大鼠及12周應(yīng)激組大鼠在曠場實驗中的中央停留時間、總移動距離和總移動速率分別在經(jīng)過自然恢復(fù)8周、12周后均能恢復(fù)到和對照組同一水平；血清CORT及ACTH的濃度在4周之內(nèi)回復(fù)到正常水平。同樣的應(yīng)激，作用時間越長，動物行為學(xué)指標(biāo)恢復(fù)所需的時間也越長。 第二部分：CUMS致大鼠TMJ髁突軟骨改變的自然轉(zhuǎn)歸研究 動物模型的建立方法同第一部分，在相應(yīng)的時間點麻醉處死后，分離顳下頜關(guān)節(jié)周圍的組織，取下帶關(guān)節(jié)盤的顳下頜關(guān)節(jié)髁突，分別用于掃描電鏡、HE染色、免疫組化及Real-time PCR檢測。 結(jié)果如下： 1．通過觀察大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨表面的電鏡圖像發(fā)現(xiàn)，心理應(yīng)激8周和12周后大鼠髁突軟骨表面均出現(xiàn)病損，8周組大鼠的髁突以表面膠原纖維網(wǎng)的雜亂松解和表層細胞脫落為主，而12周組大鼠的髁突軟骨損傷達到深層，成熟層的軟骨細胞暴露受損。HE染色結(jié)果證實髁突軟骨出現(xiàn)退行性病變，破壞程度隨著應(yīng)激時間的延長而加重。應(yīng)激8周的大鼠在8周的自然轉(zhuǎn)歸過程中，可以觀察到軟骨表層纖維逐漸增厚，排列規(guī)律，最后基本恢復(fù)正常。而應(yīng)激12周的大鼠在12周的恢復(fù)過程中觀察到，軟骨細胞增生、膠原纖維及蛋白多糖增多，，最后深層的結(jié)構(gòu)被膠原纖維覆蓋，表面也變平坦，但是沒有達到完全修復(fù)�？梢�，應(yīng)激時間越長，軟骨損傷越嚴(yán)重，恢復(fù)也越不完全。 2．Real-time PCR結(jié)果顯示：各應(yīng)激組內(nèi)髁突軟骨的IL-1α、MMP-3和TIMP-1的mRNA表達水平也升高，應(yīng)激8周的大鼠在自然轉(zhuǎn)歸的8周內(nèi)IL-1α、MMP-3及TIMP-1的mRNA表達量呈梯度下降至正常水平，應(yīng)激12周大鼠在自然轉(zhuǎn)歸的12周內(nèi)，IL-1α及MMP-3的mRNA總體表達量逐漸減少至恢復(fù)8周時達到正常，TIMP-1在恢復(fù)4周時有所降低，至恢復(fù)12周時一直維持在高于對照組的水平。 3．免疫組化染色結(jié)果顯示：心理應(yīng)激8周和12周組大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨內(nèi)炎性因子白細胞介素-1α（interleukin1α，IL-1α）、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3，MMP-3）、基質(zhì)金屬蛋白酶試劑-1（tissue inhibitor of metal protease-1，TIMP-1）的蛋白表達水平均與同時間點對照組比較明顯升高；應(yīng)激8周組大鼠和應(yīng)激12周組的大鼠在分別自然恢復(fù)8周和12周的過程中顳下頜關(guān)節(jié)髁突中IL-1α、MMP-3以及TIMP-1的表達量不斷減少，至觀察期結(jié)束時仍未達到正常水平。 4．綜上所述，慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激可引起大鼠典型的抑郁癥狀，表現(xiàn)為體重減輕、糖水偏愛度降低、曠場中移動速率和移動距離減少及中央活動時間延長，血清中CORT和ACTH濃度升高，并且在顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨表現(xiàn)出軟骨的退行性變；去除應(yīng)激因子后，大鼠的行為學(xué)及血清學(xué)指標(biāo)均依次回到正常水平，髁突軟骨中IL-1α和MMP-3基因表達也已回落至對照水平，TIMP-1稍高于對照組；應(yīng)激時間長短與各指標(biāo)恢復(fù)時間成正比。而髁突軟骨的器質(zhì)性損傷雖然表現(xiàn)出顯著的修復(fù)性變化，且修復(fù)情況和應(yīng)激時間有關(guān)，應(yīng)激時間越長，修復(fù)越不完全。
【關(guān)鍵詞】：慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激 抑郁 髁突軟骨 自然轉(zhuǎn)歸 炎性因子 基質(zhì)金屬蛋白酶
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R782;R749.4
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-15
• 文獻回顧15-29
• 第一部分 CUMS 致大鼠行為學(xué)改變的自然轉(zhuǎn)歸研究29-43
• 1 材料29-30
• 2 方法30-34
• 3 結(jié)果34-41
• 4 討論41-43
• 第二部分 CUMS 對大鼠 TMJ 髁突軟骨影響的自然轉(zhuǎn)歸研究43-73
• 實驗一 CUMS 致大鼠 TMJ 髁突軟骨改變及自然恢復(fù)過程中的形態(tài)學(xué)觀察43-52
• 1 材料43-44
• 2 方法44-45
• 3 結(jié)果45-50
• 4 討論50-52
• 實驗二 CUMS 致大鼠 TMJ 髁突軟骨中 IL-1、MMP-3 及 TIMP-1 表達變化及自然轉(zhuǎn)歸的研究52-73
• 1 材料52-53
• 2 方法53-56
• 3 結(jié)果56-69
• 4 討論69-73
• 小結(jié)73-74
• 對課題進一步研究的思考74-75
• 參考文獻75-84
• 附錄84-85
• 個人簡歷和研究成果85-86
• 致謝86

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃飛;心理應(yīng)激對大鼠髁突軟骨結(jié)構(gòu)的影響及機理研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

本文編號：959760