發(fā)布時間：2017-09-28 20:33

  本文關鍵詞：APPK724M新發(fā)突變導致中國家庭早發(fā)型阿爾茨海默病研究

  更多相關文章： 早發(fā)型家族性阿爾茨海默病 基因突變 β-淀粉樣肽 淀粉樣前體蛋白

【摘要】：目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是老年人群常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。盡管中國擁有全世界數(shù)量最多的老年人口和癡呆人群,國內鮮有關于家族性AD基因突變的報道。我們在前期工作中發(fā)現(xiàn)了一個早發(fā)型家族性AD(early-onset familial AD, EOFAD)家系攜帶有新的APP基因突變：APPK724M。為了證實該EOFAD的致病基因及其機制,本研究對該家系成員三個AD致病基因的突變位點及風險因子APOE等進行了全面、系統(tǒng)分析,并對該家系APPK724M基因突變的致病機理進行了探討。 方法：收集AD患者及其直系親屬和無關人群對照組外周血DNA樣本,針對PSEN-1和PSEN-2基因的編碼外顯子和APP外顯子16、17設計引物,PCR擴增基因外顯子后進行DNA測序和序列分析；針對APOE基因編碼外顯子設計引物,PCR擴增基因外顯子后測序鑒定APOE基因型。同時,構建APPK724M突變基因真核表達載體,使用脂質體法轉染HEK293細胞,Western Blot、ELISA檢測APP表達和代謝情況。 結果：臨床樣本AD致病基因的測序結果表明,該家系中接受檢測的癡呆癥患者皆攜帶APPK724M突變,而PSEN1/2基因未見編碼突變,已檢測的該家系的健康個體及對照組成員標本均未見相應的APP基因突變。先證者APOE基因型為3/4,而其他成員皆為3/3。Western Blot結果顯示野生型與突變型APP表達水平接近；ELISA結果顯示,與野生型APP相比,K724M突變型APP在細胞內代謝后能產(chǎn)生更多的Aβ42,同時Aβ42/40比例增加。 結論：首次報道并確認APPK724M突變是導致一個中國家系早發(fā)型FAD的致病因子,APPK724M突變影響APP在細胞內的代謝,產(chǎn)生更高水平的Aβ42可能是該家系AD患者的發(fā)病原因。
【關鍵詞】：早發(fā)型家族性阿爾茨海默病 基因突變 β-淀粉樣肽 淀粉樣前體蛋白
【學位授予單位】：北京交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 1. 引言10-15
• 1.1 研究背景10-12
• 1.2 FAD研究現(xiàn)狀12-14
• 1.3 研究目的和意義14
• 1.4 實驗設計和流程14-15
• 2. 材料和方法15-29
• 2.1 材料15-18
• 2.1.1 質粒載體15
• 2.1.2 細胞株與細菌菌株15
• 2.1.3 主要試劑盒及耗材15
• 2.1.4 主要工具酶及試劑15-16
• 2.1.5 主要試劑的配制16-17
• 2.1.6 主要儀器17-18
• 2.2 方法18-29
• 2.2.1 AD外周血樣本的收集及基因組DNA的提取18-19
• 2.2.2 PSEN-1、PSEN-2、APP致病基因擴增引物的設計合成19
• 2.2.3 致病基因的篩查19
• 2.2.4 APP695野生型及突變型真核表達質粒的提取及鑒定19-24
• 2.2.5 APOE的PCR擴增和純化測序24-25
• 2.2.6 Western Blot及ELISA分析APP在細胞內的表達及代謝25-29
• 3. 結果29-37
• 3.1 FAD致病基因及風險因子測序分析29-33
• 3.1.1 FAD家系成員信息29-30
• 3.1.2 FAD致病基因測序30
• 3.1.3 AD風險因子測序情況30-32
• 3.1.4 FAD家系成員AD致病基因和風險因子核酸分析總結32
• 3.1.5 對照組APP基因外顯子測序分析32-33
• 3.2 pcDNA3.1(-)-APP695野生型及突變型的鑒定、制備33-35
• 3.3 Western Blot、ELISA分析APP細胞內的細胞表達及代謝35-37
• 3.3.1 Western Blot分析APP的細胞表達水平35
• 3.3.2 ELISA分析HEK293細胞胞內及上清中的Aβ40、Aβ4235-37
• 4. 討論37-39
• 5. 結論39-40
• 參考文獻40-42
• 附錄A42-43
• 作者簡歷及攻讀碩士學位期間取得的研究成果43-45
• 學位論文數(shù)據(jù)集45

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本文編號：937916