本文關(guān)鍵詞：APPK724M新發(fā)突變導(dǎo)致中國(guó)家庭早發(fā)型阿爾茨海默病研究

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【摘要】：目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是老年人群常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。盡管中國(guó)擁有全世界數(shù)量最多的老年人口和癡呆人群,國(guó)內(nèi)鮮有關(guān)于家族性AD基因突變的報(bào)道。我們?cè)谇捌诠ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)了一個(gè)早發(fā)型家族性AD(early-onset familial AD, EOFAD)家系攜帶有新的APP基因突變：APPK724M。為了證實(shí)該EOFAD的致病基因及其機(jī)制,本研究對(duì)該家系成員三個(gè)AD致病基因的突變位點(diǎn)及風(fēng)險(xiǎn)因子APOE等進(jìn)行了全面、系統(tǒng)分析,并對(duì)該家系A(chǔ)PPK724M基因突變的致病機(jī)理進(jìn)行了探討。 方法：收集AD患者及其直系親屬和無(wú)關(guān)人群對(duì)照組外周血DNA樣本,針對(duì)PSEN-1和PSEN-2基因的編碼外顯子和APP外顯子16、17設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增基因外顯子后進(jìn)行DNA測(cè)序和序列分析；針對(duì)APOE基因編碼外顯子設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增基因外顯子后測(cè)序鑒定APOE基因型。同時(shí),構(gòu)建APPK724M突變基因真核表達(dá)載體,使用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,Western Blot、ELISA檢測(cè)APP表達(dá)和代謝情況。 結(jié)果：臨床樣本AD致病基因的測(cè)序結(jié)果表明,該家系中接受檢測(cè)的癡呆癥患者皆攜帶APPK724M突變,而PSEN1/2基因未見(jiàn)編碼突變,已檢測(cè)的該家系的健康個(gè)體及對(duì)照組成員標(biāo)本均未見(jiàn)相應(yīng)的APP基因突變。先證者APOE基因型為3/4,而其他成員皆為3/3。Western Blot結(jié)果顯示野生型與突變型APP表達(dá)水平接近；ELISA結(jié)果顯示,與野生型APP相比,K724M突變型APP在細(xì)胞內(nèi)代謝后能產(chǎn)生更多的Aβ42,同時(shí)Aβ42/40比例增加。 結(jié)論：首次報(bào)道并確認(rèn)APPK724M突變是導(dǎo)致一個(gè)中國(guó)家系早發(fā)型FAD的致病因子,APPK724M突變影響APP在細(xì)胞內(nèi)的代謝,產(chǎn)生更高水平的Aβ42可能是該家系A(chǔ)D患者的發(fā)病原因。
【關(guān)鍵詞】：早發(fā)型家族性阿爾茨海默病 基因突變 β-淀粉樣肽 淀粉樣前體蛋白
【學(xué)位授予單位】：北京交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 1. 引言10-15
• 1.1 研究背景10-12
• 1.2 FAD研究現(xiàn)狀12-14
• 1.3 研究目的和意義14
• 1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和流程14-15
• 2. 材料和方法15-29
• 2.1 材料15-18
• 2.1.1 質(zhì)粒載體15
• 2.1.2 細(xì)胞株與細(xì)菌菌株15
• 2.1.3 主要試劑盒及耗材15
• 2.1.4 主要工具酶及試劑15-16
• 2.1.5 主要試劑的配制16-17
• 2.1.6 主要儀器17-18
• 2.2 方法18-29
• 2.2.1 AD外周血樣本的收集及基因組DNA的提取18-19
• 2.2.2 PSEN-1、PSEN-2、APP致病基因擴(kuò)增引物的設(shè)計(jì)合成19
• 2.2.3 致病基因的篩查19
• 2.2.4 APP695野生型及突變型真核表達(dá)質(zhì)粒的提取及鑒定19-24
• 2.2.5 APOE的PCR擴(kuò)增和純化測(cè)序24-25
• 2.2.6 Western Blot及ELISA分析APP在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及代謝25-29
• 3. 結(jié)果29-37
• 3.1 FAD致病基因及風(fēng)險(xiǎn)因子測(cè)序分析29-33
• 3.1.1 FAD家系成員信息29-30
• 3.1.2 FAD致病基因測(cè)序30
• 3.1.3 AD風(fēng)險(xiǎn)因子測(cè)序情況30-32
• 3.1.4 FAD家系成員AD致病基因和風(fēng)險(xiǎn)因子核酸分析總結(jié)32
• 3.1.5 對(duì)照組APP基因外顯子測(cè)序分析32-33
• 3.2 pcDNA3.1(-)-APP695野生型及突變型的鑒定、制備33-35
• 3.3 Western Blot、ELISA分析APP細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞表達(dá)及代謝35-37
• 3.3.1 Western Blot分析APP的細(xì)胞表達(dá)水平35
• 3.3.2 ELISA分析HEK293細(xì)胞胞內(nèi)及上清中的Aβ40、Aβ4235-37
• 4. 討論37-39
• 5. 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 附錄A42-43
• 作者簡(jiǎn)歷及攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果43-45
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集45

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本文編號(hào)：937916