本文關(guān)鍵詞：鹽酸多奈哌齊及L-NNA對(duì)小鼠阿爾茨海默癥腦組織NOS活性影響及對(duì)NOS陽(yáng)性神經(jīng)元的保護(hù)作用

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【摘要】：本試驗(yàn)運(yùn)用D-半乳糖聯(lián)合鋁誘導(dǎo)的方法，成功制備了小鼠的阿爾茨海默癥（AD）模型，然后分別用鹽酸多奈哌齊和NOS抑制劑L-硝基-精氨酸（L-NNA）對(duì)成功的AD小鼠模型進(jìn)行比較治療試驗(yàn)。通過(guò)測(cè)定各組小鼠血清和腦海馬內(nèi)NO含量變化、NOS活性變化以及腦組織內(nèi)NOS陽(yáng)性神經(jīng)元的表達(dá)的變化來(lái)探討AD發(fā)病機(jī)理與NO的關(guān)系，NOS抑制劑L-NNA和鹽酸多奈哌齊對(duì)其主要病變部位的NO、NOS神經(jīng)元的影響。 運(yùn)用口腔灌服三氯化鋁及皮下注射D-半乳糖的方法進(jìn)行誘導(dǎo)，制備阿爾茨海默癥小鼠模型，，并通過(guò)行為學(xué)及免疫組織化學(xué)方法對(duì)模型進(jìn)行檢測(cè)。水迷宮行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果及剛果紅染色鏡檢顯示，本試驗(yàn)制備的小鼠AD模型達(dá)到了成功模型的標(biāo)準(zhǔn)。 運(yùn)用生物化學(xué)檢測(cè)和硝酸還原酶的方法分別檢測(cè)腦組織內(nèi)NOS的活性變化及各組小鼠血清及海馬內(nèi)的NO含量變化。結(jié)果顯示：模型組小鼠血清NO含量及海馬內(nèi)NO含量都顯著高于對(duì)照組、鹽酸多奈哌齊治療組和L-NNA治療組；鹽酸多奈哌齊組及L-NNA組的上述指標(biāo)與模型組顯著性差異(P0.05)。NOS活性檢測(cè)結(jié)果顯示，各組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)TNOS活性強(qiáng)弱順序均為：模型組鹽酸多奈哌齊組 L-NNA組正常對(duì)照組。iNOS活性變化表現(xiàn)為：模型組前期iNOS活性升高平緩不顯著(P0.05)，中后期活性顯著升高(P0.05)；兩個(gè)治療組iNOS活性變化規(guī)律表現(xiàn)為前期與模型組基本一致，8w-12w其活性顯著低于模型組(P0.05)，但較對(duì)照組仍有升高，兩個(gè)治療組之間比較，前期L-NNA降低iNOS活性的效果好于鹽酸多奈哌齊治療組，后期差異不顯著（P0.05）。 在顯微鏡下觀察SABC免疫組織化學(xué)法染色的各組小鼠腦海馬，觀測(cè)nNOS及iNOS陽(yáng)性神經(jīng)元的分布及形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示：模型組nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)與對(duì)照組比較神經(jīng)元密度逐漸降低，截面積變小，突起數(shù)量減少等。模型組與對(duì)照組比較各項(xiàng)指標(biāo)差異顯著（P0.05）；L-NNA治療組和鹽酸多奈哌齊治療組與模型組比較nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元密度顯著性升高（P0.05），胞體截面積，顯著增大（P0.05），最長(zhǎng)突起長(zhǎng)度和第一級(jí)突起數(shù)量增加。兩個(gè)治療組之間各項(xiàng)指標(biāo)差異不顯著（P0.05）。模型組nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元的表達(dá)逐漸降低，神經(jīng)元缺失，iNOS在前期神經(jīng)元表達(dá)痕量，隨著造模時(shí)間的上升表達(dá)逐漸上升，表現(xiàn)為模型組比對(duì)照組iNOS密度顯著升高（P0.05）；兩個(gè)治療組與模型組比較iNOS陽(yáng)性神經(jīng)元密度在8w后較模型組顯著降低（P0.05），兩個(gè)治療組間差異不顯著（P0.05）。 結(jié)果表明：模型組海馬內(nèi)NO及血清NO含量隨著時(shí)間的延續(xù)，含量持續(xù)增加，到達(dá)6w時(shí)達(dá)到巔峰，隨后保持較高含量。而通過(guò)L-NNA和鹽酸多奈哌齊治療的小鼠海馬內(nèi)NO含量及血清NO含量在各時(shí)間段內(nèi)顯著低于模型組（P0.05），且通過(guò)檢測(cè)腦海馬NOS活性與NO的變化呈正相關(guān)。鹽酸多奈哌齊及L-NNA治療組小鼠腦組織陽(yáng)性神經(jīng)元的數(shù)量、胞體截面積及最長(zhǎng)突起長(zhǎng)度變化顯著，神經(jīng)元細(xì)胞核固縮、核溶解等變化與相應(yīng)的模型組比較顯著減輕，只有少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)死亡。L-NNA和鹽酸多奈哌齊可明顯減少神經(jīng)元的死亡數(shù)量，并使神經(jīng)元的最長(zhǎng)突起長(zhǎng)度有所增加，治療效果顯著（P0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：L-NNA和鹽酸多奈哌齊在治療AD中對(duì)神經(jīng)元發(fā)揮著重要的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：小白鼠 腦海馬 阿爾茨海默癥 一氧化氮合酶 L-硝基-精氨酸 鹽酸多奈哌齊
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 英文縮略表4-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-14
• 1 引言14-26
• 1.1 一氧化氮的概述14-18
• 1.1.1 一氧化氮的生物學(xué)特性15-16
• 1.1.2 一氧化氮的生物合成和一氧化氮合酶的分類(lèi)16-17
• 1.1.3 一氧化氮合酶在腦內(nèi)的分布17-18
• 1.2 阿爾茨海默癥的研究進(jìn)展18-22
• 1.2.1 阿爾茨海默癥模型的研究進(jìn)展19-22
• 1.3 NO 與阿爾茨海默癥22-23
• 1.4 NOS 抑制劑與阿爾茨海默癥23-24
• 1.5 鹽酸多奈哌齊與阿爾茨海默癥24
• 1.6 本課題的研究目的和意義24-26
• 2 材料與方法26-32
• 2.1 試驗(yàn)材料26-27
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物26
• 2.1.2 主要試劑26
• 2.1.3 主要試驗(yàn)儀器26
• 2.1.4 試驗(yàn)場(chǎng)地及預(yù)備試驗(yàn)26-27
• 2.2 試驗(yàn)方法27-32
• 2.2.1 分組及其給藥方法27
• 2.2.2 Morris 水迷宮行為學(xué)測(cè)試27
• 2.2.3 取材27-28
• 2.2.3.1 小鼠血清的分離27-28
• 2.2.3.2 腦組織取樣和腦勻漿液的制備28
• 2.2.4 腦切片制作28
• 2.2.5 HE 染色28
• 2.2.6 Highman 甲醇剛果紅染色法28
• 2.2.7 SABC 免疫組織化學(xué)染色28-29
• 2.2.8 切片觀察和測(cè)量29
• 2.2.9 NO 濃度（含量）的測(cè)定29-30
• 2.2.10 NOS 活性的測(cè)定30-31
• 2.2.10.1 腦組織蛋白質(zhì)含量的測(cè)定30
• 2.2.10.2 NOS 活性測(cè)定步驟30-31
• 2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析31-32
• 3 結(jié)果與分析32-45
• 3.1 各組小鼠行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果32-33
• 3.2 各組小鼠 NO 檢測(cè)結(jié)果33-35
• 3.2.1 各組小鼠血清 NO 含量變化檢測(cè)結(jié)果33-34
• 3.2.2 各組小鼠海馬 NO 含量變化的檢測(cè)結(jié)果34-35
• 3.3 各組小鼠 NOS 活性檢測(cè)結(jié)果35-37
• 3.3.1 各組小鼠海馬 TNOS 活性檢測(cè)結(jié)果35-36
• 3.3.2 各組小鼠海馬 iNOS 活性的檢測(cè)結(jié)果36-37
• 3.4 各組小鼠海馬 nNOS 陽(yáng)性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)與分布37-41
• 3.4.1 各組小鼠海馬 nNOS 陽(yáng)性神經(jīng)元密度的變化37-38
• 3.4.2 各組小鼠海馬 nNOS 神經(jīng)元胞體截面積的變化38-39
• 3.4.3 各組小鼠海馬 nNOS 神經(jīng)元最長(zhǎng)突起長(zhǎng)度的變化39-40
• 3.4.4 各組小鼠海馬 nNOS 神經(jīng)元第一級(jí)突起數(shù)的變化40-41
• 3.5 各組小鼠海馬 iNOS 陽(yáng)性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)與分布41-45
• 3.5.1 各組小鼠海馬 iNOS 陽(yáng)性神經(jīng)元密度的變化41-42
• 3.5.2 各組小鼠海馬 iNOS 陽(yáng)性神經(jīng)元胞體截面積的變化42
• 3.5.3 各組小鼠海馬 iNOS 神經(jīng)元最長(zhǎng)突起長(zhǎng)度的變化42-43
• 3.5.4 各組小鼠海馬 iNOS 神經(jīng)元第一級(jí)突起數(shù)的變化43-45
• 4 討論45-49
• 4.1 AD 模型的選擇及 Morris 水迷宮對(duì) AD 小鼠的學(xué)習(xí)與記憶能力的評(píng)價(jià)45
• 4.2 AD 小鼠海馬 nNOS 陽(yáng)性神經(jīng)元凋亡機(jī)制45-46
• 4.3 AD 造模不同時(shí)間腦海馬 NOS 活性及 NO 含量的變化46-47
• 4.4 AD 腦海馬 nNOS 陽(yáng)性神經(jīng)元的分布、數(shù)量及形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化47-48
• 4.5 鹽酸多奈哌齊和 L-NNA 在 AD 腦海馬中的作用機(jī)制48-49
• 5 結(jié)論49-50
• 5.1 D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁造模方法49
• 5.2 鹽酸多奈哌齊在阿爾茨海默癥中的保護(hù)作用49
• 5.3 L-NNA 在阿爾茨海默癥中的保護(hù)作用49-50
• 參考文獻(xiàn)50-58
• 附圖58-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：928657