本文關(guān)鍵詞：藥物成癮候選基因的DNA甲基化研究

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【摘要】：目的:本研究測(cè)定病例對(duì)照中藥物成癮易感基因的DNA甲基化水平,探究DNA甲基化水平與藥物成癮的關(guān)系。并驗(yàn)證所檢測(cè)區(qū)域的DNA甲基化是否會(huì)引起表達(dá)量的改變。方法:收集確診的藥物成癮患者60例和健康對(duì)照52例,利用焦磷酸測(cè)序法對(duì)BDNF、DRD4和OPRK1基因的啟動(dòng)子區(qū)域CGI進(jìn)行DNA甲基化水平測(cè)定。并與患者的POMS問(wèn)卷結(jié)果進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析。借助雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)DNA甲基化水平測(cè)定區(qū)域?qū)Ρ磉_(dá)的影響,通過(guò)5’AZA去甲基化處理,檢測(cè)測(cè)定區(qū)域的DNA甲基化改變對(duì)表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)海洛因成癮對(duì)精神情緒狀態(tài)上的影響比甲基苯丙胺更大。尤其是憤怒-敵意評(píng)分(P=0.010),抑郁-沮喪評(píng)分(P=0.033),有力-好動(dòng)評(píng)分(P=0.001)和困惑-迷茫評(píng)分(P=0.001);(2)病例對(duì)照研究:藥物成癮組BDNF CpG1-CpG4高甲基化,而CpG5低甲基化(P=0.002);DRD4啟動(dòng)子CpG1(P=0.009)、CpG4(P=0.009)和CpG7(P=0.003)高甲基化,OPRK1啟動(dòng)子Cp G2-Cp G7呈現(xiàn)低甲基化(P0.05);(3)甲基苯丙胺組BDNF CpG3甲基化水平高于海洛因組(P=0.024),而其他位點(diǎn)均沒(méi)有顯著差異(P0.05);(4)BDNF CpG5的甲基化水平都分別與抑郁-沮喪評(píng)分(P=0.018),疲憊-惰性評(píng)分(P=0.016),憤怒-敵意評(píng)分(P=0.036)和緊張-焦慮評(píng)分(P=0.010)呈負(fù)相關(guān),而DRD4 CpG6的甲基化水平與藥物成癮患者的迫切性評(píng)分有負(fù)相關(guān)性(P=0.017)。亞組分析發(fā)現(xiàn),海洛因組中BDNF Cp G5甲基化水平與疲憊-惰性評(píng)分負(fù)相關(guān)(P=0.032);DRD4 CpG5甲基化水平與抑郁-沮喪評(píng)分正相關(guān)(P=0.002),OPRK1 CpG2甲基化水平與疲憊-惰性平分負(fù)相關(guān)(P=0.020);(5)BDNF檢測(cè)區(qū)域片段缺失會(huì)引起表達(dá)下調(diào)(P=0.019),OPRK1檢測(cè)區(qū)域片段缺失會(huì)引起表達(dá)上調(diào)(P=0.013),而DRD4檢測(cè)區(qū)域片段缺失,基因表達(dá)嚴(yán)重受阻(P=0.000002);(6)BDNF檢測(cè)區(qū)域片段去甲基化后引起表達(dá)下調(diào)(P=0.008),OPRK1檢測(cè)區(qū)域片段去甲基化后表達(dá)上調(diào)(P=0.044)。結(jié)論:病例對(duì)照研究:BDNF CpG5低甲基化;DRD4啟動(dòng)子CpG1、CpG4和CpG7高甲基化,OPRK1啟動(dòng)子CpG2-CpG7呈現(xiàn)低甲基化與藥物成癮患病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。而B(niǎo)DNF CpG3甲基化水平可用于評(píng)價(jià)海洛因成癮與甲基苯丙胺成癮之間的差異;在四類情緒狀態(tài)評(píng)分上(憤怒-敵意評(píng)分,抑郁-沮喪評(píng)分,有力-好動(dòng)評(píng)分和困惑-迷茫評(píng)分),海洛因組的影響都比甲基苯丙胺更大;BDNF,DRD4和OPRK1三個(gè)基因的甲基化水平與不同的情緒狀態(tài)有關(guān)。所測(cè)定的區(qū)域都與基因表達(dá)量有關(guān)聯(lián),BDNF檢測(cè)區(qū)域片段缺失會(huì)引起表達(dá)下調(diào),OPRK1檢測(cè)區(qū)域片段缺失會(huì)引起表達(dá)上調(diào),而DRD4檢測(cè)區(qū)域片段缺失,基因表達(dá)嚴(yán)重受阻;BDNF測(cè)定區(qū)域去甲基化后引起表達(dá)下調(diào),OPRK1檢測(cè)區(qū)域片段去甲基化后表達(dá)上調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：藥物成癮 DNA甲基化 BDNF DRD4 OPRK1
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.6
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 1 目的12
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法12-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器12
• 2.2 主要試劑12-14
• 2.2.1 部分試劑配制13-14
• 2.3 人群樣本的甲基化水平測(cè)定14-18
• 2.3.1 候選基因的挑選14
• 2.3.2 引物設(shè)計(jì)14
• 2.3.3 實(shí)驗(yàn)對(duì)象14-15
• 2.3.4 外周血全基因組DNA的提取15-16
• 2.3.5 亞硫酸氫鹽處理16
• 2.3.6 PCR反應(yīng)16-17
• 2.3.7 焦磷酸測(cè)序17-18
• 2.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建18-22
• 2.4.1 引物設(shè)計(jì)18-19
• 2.4.2 目標(biāo)片段的PCR擴(kuò)增19-20
• 2.4.3 pGL3質(zhì)粒提取20
• 2.4.4 PCR片段和pGL3粘性末端的獲得20-21
• 2.4.5 PCR片段和pGL3連接21-22
• 2.4.6 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的鑒定22
• 2.5 293細(xì)胞培養(yǎng)和重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染22-24
• 2.5.1 293細(xì)胞復(fù)蘇22
• 2.5.2 細(xì)胞傳代22-23
• 2.5.3 細(xì)胞凍存23
• 2.5.4 提取去內(nèi)毒素的重組質(zhì)粒23
• 2.5.5 細(xì)胞種板和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染23
• 2.5.6 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染23-24
• 2.5.7 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)24
• 2.5.8 5’AZA處理24
• 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析24-25
• 3 結(jié)果25-39
• 3.1 臨床資料比較和各基因檢測(cè)的CpG位點(diǎn)信息25-27
• 3.2 藥物成癮組與健康對(duì)照組甲基化水平比較27-30
• 3.3 海洛因組和甲基苯丙胺組甲基化水平比較和POMS評(píng)分關(guān)聯(lián)性分析30-33
• 3.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建33-36
• 3.5 檢測(cè)目的片段對(duì)基因表達(dá)的影響36-37
• 3.6 5’AZA對(duì)檢測(cè)目的片段基因表達(dá)的影響37-39
• 4 討論39-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 附錄A 部分中英文對(duì)照表46-47
• 附錄B 綜述47-66
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 在學(xué)研究成果66-67
• 致謝67

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