發(fā)布時(shí)間：2017-09-25 01:38

  本文關(guān)鍵詞：急性酒精對(duì)海馬γ振蕩的抑制作用涉及Akt-GSK3β信號(hào)通路

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【摘要】：背景神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)振蕩是一種節(jié)律性、同步化的、存在于多個(gè)腦區(qū)的神經(jīng)電活動(dòng)。海馬的gamma(γ)振蕩是神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)振蕩的一種重要的表現(xiàn)形式,與腦的高級(jí)功能密切相關(guān)。急性酒精暴露達(dá)到中毒劑量(≥50mM)可導(dǎo)致學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能的障礙。急性酒精抑制了γ振蕩,但相關(guān)細(xì)胞內(nèi)機(jī)制尚不清楚。目的探討急性酒精暴露對(duì)海馬γ振蕩的影響,并進(jìn)一步揭示急性酒精對(duì)海馬γ網(wǎng)絡(luò)振蕩活動(dòng)調(diào)節(jié)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)機(jī)制。方法1.制備海馬腦片,健康雄性SD大鼠60只(3-4周),10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔內(nèi)注射麻醉,待夾趾反射基本消失后,用手術(shù)剪打開(kāi)胸腔,暴露出心臟,在左心室用預(yù)冷(0℃)通氧(95%O2+5%CO2)的人工腦脊液進(jìn)行心臟灌注,觀察到四肢變白后,快速斷頭取腦,并放入預(yù)冷通有混合氧氣的人工腦脊液中。用LEICA VT 1000S振動(dòng)切片機(jī),水平切厚度為400μm的海馬腦片。2.建立神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)振蕩模型,將大鼠海馬腦片轉(zhuǎn)移至恒溫界面記錄槽內(nèi),持續(xù)灌流通有混合氧的ACSF(溫度維持在32±1℃),灌流速度為3-4ml/min。孵育1個(gè)小時(shí)后,采用細(xì)胞外微電極方式記錄。然后應(yīng)用神經(jīng)遞質(zhì)受體紅藻氨酸激動(dòng)劑(Kainate,KA)于大鼠海馬腦片,產(chǎn)生持久的γ(20~60 Hz)頻率振蕩,即成功建立神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)振蕩模型。3.在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)振蕩模型基礎(chǔ)上,將酒精(50mM、100mM)分別應(yīng)用于中間層海馬(IH)、背側(cè)海馬(DH)、腹側(cè)海馬(VH)腦片,觀察酒精對(duì)海馬不同區(qū)域γ振蕩的影響。之后,使用Akt、GSK3β、mTOR、Compound C等細(xì)胞內(nèi)激酶的抑制劑來(lái)揭示酒精對(duì)海馬網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)作用的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)機(jī)制。應(yīng)用Spike 2軟件(CED,Cambridge,UK)對(duì)原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行離線分析。使用Sigmastat軟件(SPSS Inc.,California,USA)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果以平均值(mean,M)加減標(biāo)準(zhǔn)誤(standard error of the Mean,SE)表達(dá)。如果P≤0.05,測(cè)量被認(rèn)為是具有統(tǒng)計(jì)顯著性。結(jié)果1.酒精對(duì)海馬γ振蕩的調(diào)節(jié)具有區(qū)域差異性:酒精降低中間層海馬的γ振蕩活動(dòng),對(duì)背側(cè)海馬γ振蕩活動(dòng)起部分抑制作用,而對(duì)腹側(cè)海馬的γ振蕩活動(dòng)不產(chǎn)生影響。2.細(xì)胞內(nèi)激酶Akt的抑制劑Tricribine(TCBN,5μM)阻斷了酒精對(duì)中間層海馬γ振蕩抑制作用。3.GSK3β抑制劑SB415286(SB,5μM)逆轉(zhuǎn)了酒精對(duì)中間層海馬γ振蕩的抑制作用。4.mTOR抑制劑Rapamycin(Rap,100nM)不能阻斷酒精對(duì)中間海馬CA3區(qū)的γ振蕩的抑制作用。5.AMPK抑制劑Compound C(CC)劑量依賴性增強(qiáng)了中間層海馬的γ振蕩;對(duì)大部分酒精調(diào)節(jié)的中間層海馬腦片的γ振蕩的抑制作用無(wú)影響。結(jié)論酒精對(duì)海馬γ振蕩的調(diào)節(jié)具有區(qū)域差異性;Akt-GSK3β信號(hào)通路的激活對(duì)酒精誘導(dǎo)的中間層γ振蕩的抑制起了關(guān)鍵作用。
【關(guān)鍵詞】：酒精 海馬 γ振蕩 區(qū)域差異性 細(xì)胞內(nèi)激酶
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R749.62
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 1 材料與方法13-20
• 2 結(jié)果20-25
• 3 討論25-30
• 4 小結(jié)30-31
• 參考文獻(xiàn)31-40
• 附圖40-50
• 綜述：酒精中毒與海馬γ振蕩的研究進(jìn)展50-68
• 參考文獻(xiàn)59-68
• 附錄68-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況69-70
• 致謝70-71
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷71

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本文編號(hào)：914640