本文關鍵詞：缺糖缺氧導致培養(yǎng)海馬神經(jīng)元突起病變與機制研究

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【摘要】：阿爾茲海默病(Alzheimer disease,AD)是老年性癡呆癥最常見的一種類型,以中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元退行性變性為主要特征,患者主要表現(xiàn)為進行性加重的認知障礙、記憶力下降以及智力喪失,最終生活無法自理,這不僅使患者的家庭痛苦,也給社會帶來沉重的壓力。AD有兩大明顯的神經(jīng)病理改變即老年斑塊(senile plaques,SP)和神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFT),但到目前為止,AD的病理機制是不清楚的,也沒有獲得有效的治療方法。近幾年來的研究發(fā)現(xiàn)提示軸突病變在AD的發(fā)病機制上可能扮演重要的角色,而且軸突病變的特征性改變包括軸突和膨體的腫脹、軸突轉(zhuǎn)運障礙以及軸突漏可能參與了SP和NFT的起源和形成。最近的動物模型研究也證實AD相關的危險因子如腦缺血、腦損傷、氧化應激和糖尿病腦病可以導致突起病變包括軸突病變和樹突病變。為了進一步闡明AD相關的危險因子和軸突病變在AD病理機制上的重要性,本研究使用培養(yǎng)的海馬神經(jīng)細胞研究氧和葡萄糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)并結(jié)合復氧復糖的處理對神經(jīng)突起的影響。培養(yǎng)8天的大鼠海馬神經(jīng)元實施不同時間的(0.5 h、1 h、2 h、4 h)OGD以及結(jié)合復糖復氧24 h處理。使用細胞工作站對神經(jīng)元的形態(tài)(胞體和突起)、神經(jīng)突起的轉(zhuǎn)運功能和線粒體在神經(jīng)突起的分布進行實時觀察和成像以及進一步的測量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)短時間(0.5 h和1 h)的缺糖缺氧和24 h復糖復氧處理對神經(jīng)元突起形態(tài)影響不明顯;相對較長時間(2 h)的缺糖缺氧和24 h復糖復氧處理后部分神經(jīng)元胞體出現(xiàn)空泡樣改變伴隨突起的退休性變化;長時間(4 h)的缺糖缺氧和24 h復糖復氧處理后大部分的神經(jīng)元胞體出現(xiàn)壞死性變化伴隨神經(jīng)突起斷裂和崩解;(2)神經(jīng)元在受到缺糖缺氧刺激后,突起的順行和逆行轉(zhuǎn)運都受到明顯抑制,長時間的缺糖缺氧和復糖復氧處理最終可以導致突起轉(zhuǎn)運的停止;(3)長時間(2 h)的缺糖缺氧和24 h復糖復氧處理能導致培養(yǎng)海馬神經(jīng)突起內(nèi)線粒體分布改變和線粒體的聚集。這些結(jié)果提示明顯的缺糖缺氧以及復糖復氧處理可導致培養(yǎng)的原代海馬神經(jīng)元突起的結(jié)構和功能變化。我們的發(fā)現(xiàn)對于闡明腦血管病變以及腦中風在AD病理機制上的作用提供重要的實驗證據(jù)。
【關鍵詞】：氧和葡萄糖剝奪 培養(yǎng)海馬神經(jīng)元 線粒體 軸突病變 突起病變 突起轉(zhuǎn)運障礙 阿爾茨海默病
【學位授予單位】：中南民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 綜述12-24
• 1.1 阿爾茨海默病12
• 1.2 阿爾茨海默病分類12-13
• 1.3 阿爾茨海默病病理學特征13
• 1.4 阿爾茨海默病危險因素13-15
• 1.4.1 年齡13-14
• 1.4.2 氧化應激14
• 1.4.3 基因突變或基因型改變14
• 1.4.4 炎癥14
• 1.4.5 腦缺血14
• 1.4.6 其它病因14-15
• 1.5 阿爾茨海默病的發(fā)病及分子機制15-23
• 1.5.1 Aβ 級聯(lián)假說15-16
• 1.5.2 Tau蛋白過度磷酸化假說16
• 1.5.3 氧化應激假說16
• 1.5.4 軸突轉(zhuǎn)運障礙、軸突病變和“軸突漏”假說16-23
• 1.5.4.1 軸突轉(zhuǎn)運16-17
• 1.5.4.2 軸突轉(zhuǎn)運的分子機制17-18
• 1.5.4.3 軸突轉(zhuǎn)運與分子馬達18-19
• 1.5.4.4 軸突轉(zhuǎn)運與微管相關蛋白19-20
• 1.5.4.5 軸突病變與AD的關系20
• 1.5.4.6 軸突漏和“軸突漏”假說20-22
• 1.5.4.7 軸突病變與腦缺血、腦損傷以及糖尿病腦病22-23
• 1.6 本文的主要研究內(nèi)容和目標23-24
• 第二章 海馬神經(jīng)元培養(yǎng)24-28
• 2.1 實驗材料24-25
• 2.1.1 實驗動物24
• 2.1.2 實驗主要試劑及溶液配制24
• 2.1.2.1 主要試劑24
• 2.1.2.2 溶液配制24
• 2.1.3 主要儀器設備24-25
• 2.2 實驗方法25-26
• 2.2.1 實驗前準備25
• 2.2.2 分離海馬神經(jīng)元25-26
• 2.2.3 接種及后續(xù)培養(yǎng)26
• 2.2.4 細胞生長狀況分析26
• 2.3 實驗結(jié)果26-27
• 2.4 小結(jié)27-28
• 第三章 缺糖缺氧對培養(yǎng)海馬神經(jīng)細胞形態(tài)的影響28-38
• 3.1 引言28
• 3.2 試驗材料與方法28-29
• 3.2.1 實驗材料28
• 3.2.2 實驗方法28-29
• 3.3 實驗結(jié)果29-37
• 3.3.1 海馬神經(jīng)元缺糖缺氧不同時間后的形態(tài)變化29-31
• 3.3.2 胞體面積變化31-32
• 3.3.4 神經(jīng)細胞死亡的雙染色鑒定32-34
• 3.3.5 神經(jīng)元突起轉(zhuǎn)運速率的改變34-37
• 3.4 小結(jié)37-38
• 第四章 缺糖缺氧導致海馬神經(jīng)元線粒體分布改變38-41
• 4.1 引言38
• 4.2 實驗材料與方法38-39
• 4.2.1 實驗材料38-39
• 4.2.2 實驗方法39
• 4.3 實驗結(jié)果39-40
• 4.3.1 神經(jīng)元線粒體的分布改變39-40
• 4.4 小結(jié)40-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-51
• 致謝51-52
• 附錄攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文52

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本文編號：847907