本文關(guān)鍵詞：β-細(xì)辛醚靶向ROCK通路抗阿爾茨海默病神經(jīng)突觸損傷的分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 5月齡APP/PS1小鼠 β-細(xì)辛醚 ROCK通路 microRNA

【摘要】：研究目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和神經(jīng)突觸損傷為主要特征的神經(jīng)退行性疾病,以Aβ淀粉樣蛋白聚集和tau蛋白異常磷酸化形成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)作為主要病理特征,AD早期出現(xiàn)學(xué)習(xí)和記憶能力的下降與神經(jīng)突觸受損有直接相關(guān)性,其中,與AD病因?qū)W密切相關(guān)的Aβ升高經(jīng)研究證實(shí)可促進(jìn)Rock通路的表達(dá)作用增強(qiáng),出現(xiàn)神經(jīng)突觸的抑制作用,同時(shí),Rho/ROCK通路興奮也能反向引起Aβ的異常集聚。因此,我們考慮ROCK通路作為藥物的靶點(diǎn)研究其作用機(jī)制。中藥石菖蒲化濕和胃,寧神益志,其性辛開苦燥溫通,芳香走竄,具開竅醒神之功,且兼化濕,豁痰,辟穢之效,常輔佐其他藥物以加強(qiáng)祛痰化濕之功。在前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)石菖蒲有效成分中β-細(xì)辛醚對(duì)AD神經(jīng)突觸損傷有保護(hù)作用,對(duì)A β42的異常集聚抑制作用不明顯,同時(shí),研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)可能與ROCK表達(dá)有關(guān),但其具體機(jī)制仍不明確。因此,本研究通過建立AD動(dòng)物和細(xì)胞模型,探索β-細(xì)辛醚靶向ROCK通路對(duì)AD神經(jīng)突觸的保護(hù)作用的分子機(jī)制研究。研究方法：1.選用5月齡APP/PS1小鼠作為AD動(dòng)物模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,野生型小鼠作為空白對(duì)照組,采用Morris水迷宮檢測(cè)小鼠行為學(xué)變化,用高爾基銀染,剛果紅染色從形態(tài)學(xué)上觀察小鼠大腦中海馬突觸損傷和皮質(zhì)部位β淀粉樣蛋白的沉淀情況,觀察β-細(xì)辛醚對(duì)小鼠行為學(xué)的影響和病理形態(tài)學(xué)上的作用；采用Western blot法檢測(cè)突觸相關(guān)蛋白突觸素Synapsin 1 (SYN1)和突觸后密度蛋白95抗體(PSD95)在APP/PS1小鼠海馬中的表達(dá)情況,觀察β-細(xì)辛醚對(duì)神經(jīng)突觸的保護(hù)作用；檢測(cè)ROCK通路相關(guān)蛋白(ROCK2, LIMK1)的表達(dá)情況,觀察β-細(xì)辛醚對(duì)ROCK通路的作用。2.采用miRNA基因芯片技術(shù),對(duì)APP/PS1小鼠海馬中miRNA進(jìn)行高通量篩選,并經(jīng)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行有效驗(yàn)證,觀察β-細(xì)辛醚對(duì)APP/PS1小鼠海馬組織中特異性表達(dá)miRNA的影響,考慮是否存在與ROCK通路等相關(guān)表達(dá)的miRNA。3.通過構(gòu)建ROCK2啟動(dòng)子雙熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞,用A β 25-35作為處理因素,觀察β-細(xì)辛醚對(duì)ROCK2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的作用。4.采用免疫熒光和Western blot法檢測(cè)神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白Growth Associated Protein-43 (GAP43),突觸素SYN1和Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體(ROCK2)在AD細(xì)胞模型中的表達(dá)情況,觀察β-細(xì)辛醚對(duì)AD細(xì)胞模型的保護(hù)作用和對(duì)ROCK2的表達(dá)影響。5.通過ROCK2-siRNA和ROCK2-overexpression質(zhì)粒轉(zhuǎn)染AD細(xì)胞模型,觀察β-細(xì)辛醚依賴ROCK2的藥效作用。6.構(gòu)律特異性表達(dá)miRNA的模擬物和抑制物(如miR-335),并經(jīng)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)后進(jìn)行WB功能性驗(yàn)證,再次通過構(gòu)建ROCK2-3'UTR區(qū)含miR-335的結(jié)合位點(diǎn)的雙熒光素酶報(bào)告基因確定miRNA的功能。研究結(jié)果：1.β-細(xì)辛醚能有效改善5月齡APP/PS1小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。2.β-細(xì)辛醚能阻止突觸相關(guān)蛋白SYN1和PSD95在APP/PS1小鼠海馬組織中的丟失,同時(shí)能有效抑制ROCK2和LIMK1蛋白的表達(dá)。3.經(jīng)miRNA基因芯片初步篩選,與APP/PS1小鼠相比,β-細(xì)辛醚組存在上調(diào)miRNA60個(gè),下調(diào)53個(gè)；再經(jīng)qRT-PCR檢測(cè)后,與野生型小鼠作為參照,APP/PS1小鼠中miRNA表達(dá)下調(diào)的為miR-335,表達(dá)上調(diào)的為miR-574和miR-711,而β-細(xì)辛醚處理后能有效改善其miRNA水平,其中,經(jīng)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-335, miR-574和miR-711分別與ROCK2,轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起蛋白抗體neuritin (Nrnl)和p21激活激酶2抗體(PAK2)的mRNA有結(jié)合位點(diǎn)。4.β-細(xì)辛醚能有效抑制A β 25-35誘導(dǎo)的ROCK2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的升高。5.β-細(xì)辛醚能增強(qiáng)A β 25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞和原代海馬神經(jīng)元中SYN1和GAP43蛋白的表達(dá),降低ROCK2的表達(dá),同時(shí)經(jīng)轉(zhuǎn)染ROCK2-siRNA和ROCK2-over expression質(zhì)粒后,β-細(xì)辛醚在沉默ROCK2后PC12細(xì)胞中SYN1表達(dá)無明顯變化,而過表達(dá)ROCK2的情況下,β-細(xì)辛醚對(duì)Aβ 25-35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞中的SYN1表達(dá)明顯改變。6.β-細(xì)辛醚阻止miR-335下降,抑制ROCK2表達(dá)。研究結(jié)論：β-細(xì)辛醚通過抑制ROCK表達(dá)對(duì)AD神經(jīng)突觸抗損傷作用,同時(shí)亦能阻止miR-335下降,增強(qiáng)ROCK翻譯水平的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：5月齡APP/PS1小鼠 β-細(xì)辛醚 ROCK通路 microRNA
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 研究背景11-27
• 第一節(jié) 阿爾茨海默病的研究進(jìn)展11-20
• 第二節(jié) Rho/ROCK通路在神經(jīng)系統(tǒng)的研究進(jìn)展20-23
• 第三節(jié) 石菖蒲防治阿爾茨海默病的研究進(jìn)展23-25
• 第四節(jié) 研究思路25-27
• 實(shí)驗(yàn)部分27-78
• 第一章 β-細(xì)辛醚對(duì)APP/PS1小鼠神經(jīng)突觸損傷的保護(hù)作用27-47
• 第一節(jié) β-細(xì)辛醚改善APP/PS1小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力27-29
• 第二節(jié) β-細(xì)辛醚阻止APP/PS1小鼠海馬突觸表達(dá)下降29-36
• 第三節(jié) β-細(xì)辛醚抑制APP/PS1小鼠海馬中ROCK及下游表達(dá)36-38
• 第四節(jié) β-細(xì)辛醚對(duì)APP/PS1小鼠海馬中miRNA的影響38-43
• 第五節(jié) 討論43-47
• 第二章 β-細(xì)辛醚靶向ROCK2對(duì)A β 25-35誘導(dǎo)AD細(xì)胞模型損傷的保護(hù)作用47-78
• 第-節(jié) A β 25-35對(duì)PC12細(xì)胞活性和細(xì)胞凋亡的影響47-52
• 第二節(jié) β-細(xì)辛醚抑制A β 25-35誘導(dǎo)ROCK2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的高表達(dá)52-58
• 第三節(jié) β-細(xì)辛醚對(duì)AD細(xì)胞模型中神經(jīng)損傷的保護(hù)作用58-62
• 第四節(jié) β-細(xì)辛醚靶向ROCK2對(duì)神經(jīng)突觸的保護(hù)作用62-66
• 第五節(jié) β-細(xì)辛醚靶向特異性表達(dá)miRNA的功能驗(yàn)證66-73
• 第六節(jié) 討論73-78
• 結(jié)語(yǔ)與展望78-79
• 參考文獻(xiàn)79-89
• 附錄89-90
• 在讀期間發(fā)表論文及參與課題情況90-91
• 致謝9

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳洪流;趙靜國(guó);謝令德;王旭東;陳強(qiáng);;α-細(xì)辛醚的合成研究[J];化學(xué)與生物工程;2008年12期

2 蘭燁榮;劉素香;張鐵軍;陳常青;;細(xì)辛醚的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2013年02期

3 向仁德;汪西元;;介紹一種制取α-細(xì)辛醚的新方法[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1984年01期

4 錢曾年,顧振綸,許美鳳,潘建新,金黎清,王雅琴,孔祥庭;α-細(xì)辛醚對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1985年Z1期

5 劉立東，凌樹森;α－細(xì)辛醚透皮吸收研究[J];中國(guó)藥房;1994年03期

6 黃曉潔;邢成鋒;魏剛;劉柳芳;歐斯健;羅明;張龍開;蔣梅;陳志輝;嚴(yán)慕賢;;β-細(xì)辛醚對(duì)小鼠急性毒性作用的初步研究[J];山東醫(yī)藥;2013年42期

7 蔣麗平,劉付平;α-細(xì)辛醚對(duì)慢性肺源性心臟病心電圖及心血管影像的影響[J];臨床中老年保健;2003年04期

8 何玉萍;方永奇;江ng;梁毅;王淑英;;β-細(xì)辛醚抗動(dòng)脈硬化的體外作用觀察[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2008年03期

9 苗靜琨;陳啟雄;李春;李曉文;劉振球;吳小玫;張曉萍;;α-細(xì)辛醚對(duì)癲癇大鼠的海馬鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)控的影響[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志;2013年02期

10 陳建家;;α-細(xì)辛醚抗癲vN的藥理作用及其臨床應(yīng)用[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1982年09期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 徐敏;馬偉斌;粱文權(quán);;α-細(xì)辛醚大鼠、兔、人尸皮體外透皮釋放比較[A];浙江省藥劑學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

2 徐敏;馬偉斌;梁文權(quán);;α-細(xì)辛醚貼劑的制備和皮膚刺激性考察[A];浙江省藥劑學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 魏立平;王文俊;吳玫涵;;石菖蒲揮發(fā)油中α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚血藥濃度的同時(shí)測(cè)定[A];色譜分析在藥物分析中的應(yīng)用專題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

4 金虹;徐國(guó)波;黃毅;;石菖蒲體外抑酶活性的研究[A];2008年中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第八屆中國(guó)藥師周論文集[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李延斌;菖蒲藥理研究新進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

2 仲海亮;石菖蒲主要成分具抗癲癇功效[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 賴先銀 梁鴻 趙玉英;石菖蒲藥理活性研究概況[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 陳奕芝;β-細(xì)辛醚對(duì)谷氨酸所致神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

2 劉林;石菖蒲成分β-細(xì)辛醚減輕缺血再灌注腦損傷的自噬機(jī)理研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

3 張升;石菖蒲成分β-細(xì)辛醚對(duì)帕金森病模型大鼠作用的自噬機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 邱東鷹;β-細(xì)辛醚對(duì)氣道副交感節(jié)前運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元突觸傳遞的抑制作用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

5 李菲;β-細(xì)辛醚靶向ROCK通路抗阿爾茨海默病神經(jīng)突觸損傷的分子機(jī)制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

6 莫鎮(zhèn)濤;β-細(xì)辛醚對(duì)缺糖缺氧PC12細(xì)胞自噬的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

7 楊立彬;中藥石菖蒲及其主要成分α-細(xì)辛醚抗幼鼠癲癇作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2004年

8 李志強(qiáng);β-細(xì)辛醚對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及血管保護(hù)機(jī)制研究[D];暨南大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王旭東;石菖蒲中α-細(xì)辛醚類衍生物的合成與殺蟲活性研究[D];武漢工業(yè)學(xué)院;2010年

2 宋金鳳;中藥成分細(xì)辛醚的熒光性質(zhì)與分析方法研究[D];河北師范大學(xué);2012年

3 徐敏;α-細(xì)辛醚經(jīng)皮給藥貼劑的研究[D];浙江大學(xué);2002年

4 吳爭(zhēng);α-細(xì)辛醚經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的研究[D];浙江大學(xué);2006年

5 石琛;石菖蒲有效單體β-細(xì)辛醚在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

6 陳洪流;細(xì)辛醚及其衍生物的合成與生物活性初步研究[D];武漢工業(yè)學(xué)院;2009年

7 魏立平;石菖蒲揮發(fā)油中β-細(xì)辛醚的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

8 李成沖;石菖蒲活性成分β-細(xì)辛醚抗老年癡呆模型大鼠海馬細(xì)胞凋亡作用及機(jī)制[D];佳木斯大學(xué);2010年

9 王綺雯;β-細(xì)辛醚對(duì)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

10 張靜;細(xì)辛醚殺蟲作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

，

本文編號(hào)：847413