本文關鍵詞：AF1q在神經(jīng)發(fā)育中的功能及調(diào)控機制研究

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【摘要】：研究背景阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)是老年癡呆癥最常見的病因,大約占老年癡呆癥的三分之二。隨著中國人口老齡化進程的加速,AD患病率也在逐年增加。晚期AD患者喪失獨立生活的能力,嚴重危害老年人群的健康。AD是一種以記憶障礙為主的慢性、進行性的神經(jīng)退行性疾病,其主要的神經(jīng)病理學特征為老年斑形成、神經(jīng)原纖維纏結和神經(jīng)元丟失。目前,AD的發(fā)病機制仍未完全明了,因而也缺乏有效的治療方法。成年神經(jīng)再生的研究是神經(jīng)科學中發(fā)展快速的一個領域。現(xiàn)在普遍認為成年腦內(nèi)神經(jīng)干細胞具有增殖、遷移和分化的能力,并最終能整合到神經(jīng)元網(wǎng)絡中,在各種腦損傷以及AD等神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病中發(fā)揮著重要作用。大量研究表明,在AD進展過程中,海馬神經(jīng)再生會發(fā)生改變。神經(jīng)再生可以補償損傷神經(jīng)元的功能,為AD的治療提供了一個新方法。目前,用于治療AD的神經(jīng)干細胞療法主要有體外干細胞移植和自體神經(jīng)干細胞激活兩種方法。應用外源性神經(jīng)干細胞移植治療AD的嘗試取得了較大的進展,但因面臨倫理質(zhì)疑、干細胞資源匱乏以及移植后的免疫排斥反應等問題而受到諸多限制。與異體神經(jīng)干細胞相比,自體神經(jīng)干細胞具有來源穩(wěn)定、無免疫原性、無致瘤性、不引起內(nèi)環(huán)境紊亂及操作簡便等特點,而成為AD治療的研究熱點。因此,激發(fā)自身神經(jīng)干細胞的活化最終達到自身修復的目的是AD治療的一個嶄新理念,具有廣闊的應用前景,對此方面的研究將為AD等神經(jīng)退行性疾病的機制研究和治療提供新的思路。成年海馬神經(jīng)再生受多種內(nèi)源性和外源性因素的調(diào)節(jié),例如Wnt信號通路。Wnt信號通路對神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、海馬區(qū)神經(jīng)再生的增殖和分化有著重要的調(diào)控作用。Wnt信號可以增強來源于大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)干細胞的增殖,而下調(diào)Wnt信號后海馬區(qū)的神經(jīng)干細胞的增殖則受到抑制。此外,Wnt信號通路不僅與神經(jīng)干細胞再生直接相關,而且還參與AD的病理發(fā)生。綜上所述,與Wnt信號通路相關的特異性蛋白或化合物將可能會激發(fā)自身神經(jīng)干細胞的活化,而達到治療AD的目的。第一部分AFlq的轉錄調(diào)控研究目的研究在阿爾茨海默病中AFlq的表達是否具有特異性,并明確與神經(jīng)發(fā)育及阿爾茨海默病致病相關的轉錄調(diào)控因子REST蛋白對AF1q的轉錄調(diào)控的分子機制,從而進一步認識兩者的重要關系。研究方法1.應用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(Real-time RT-PCR)法檢測AD鼠模型B6C3-Tg(APPswe, PSEN1dE9)及其同窩陰性小鼠中AF1q表達的差異性。分別取出生后7天,1個月,3個月,6個月,9個月,12個月的(APPswe,PSEN1dE9)雙陽性的B6C3-Tg小鼠及其同齡的同窩陰性小鼠中大腦皮層,采用TRIzol提取組織的總RNA,應用Takara PrimeScriptTM逆轉錄試劑盒逆轉錄為cDNA,應用SYBR Green Real-time PCR檢測AF1qmRNA的表達情況。2.研究轉錄因子REST對人類AF1q基因的轉錄調(diào)控。2.1細胞轉染：應用Lipofectamine 2000分別將REST高表達質(zhì)粒pREST或敲除質(zhì)粒psiREST及各自對照轉染HEK293細胞,48小時后收集各組細胞,逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測內(nèi)源性AF1q mRNA表達的變化。2.2啟動子質(zhì)粒的構建：利用PCR技術從人類基因組中得到AF1q啟動子序列,并將其克隆到?jīng)]有啟動子活性的pGL3-Basic載體中,構建質(zhì)粒pAF1qpromoter,應用Lipofectamine 2000轉染HEK293細胞,24小時后利用Luciferase技術檢測啟動子活性。2.3將REST高表達質(zhì)粒pREST或其空白對照與啟動子質(zhì)粒pAF1qpromoter或其對照pGL3-Basic應用Lipofectamine 2000共同轉染HEK293細胞,24小時后收集細胞,Luciferase檢測REST對AF1q啟動子活性的影響。3.AF1q啟動子功能性NRSE位點的確定。3.1結合位點預測：計算機Jaspar軟件預測AF1q啟動子區(qū)域的REST作用的結合位點即NRSE位點。3.2構建含有或者不含有預測NRSE位點的截短AF1q啟動子載體,應用Lipofectamine 2000轉染HEK293細胞,24小時后Luciferase檢測構建的截短載體啟動子活性；并且分別與REST高表達質(zhì)�；蛘咂鋵φ召|(zhì)粒應用Lipofectamine2000共轉染HEK293細胞,Luciferase檢測REST對不同截短啟動子的作用功能,初步找出轉錄因子REST對AF1q啟動子的調(diào)控位點。3.3凝膠遷移率試驗(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)和染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)試驗從體內(nèi)體外兩方面驗證功能性NRSE位點。4.應用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(Real-time RT-PCR)法檢測AFlq與REST在C57BL/6小鼠大腦發(fā)育過程中的表達情況。分別取胚胎13.5,18天(E13.5,E18),及出生后1,7,14天(P1,P7,P14)的小鼠的大腦皮層,采用TRIzol提取大腦皮層組織的總RNA,應用TakaraPrimeScriptTM逆轉錄試劑盒逆轉錄為cDNA,應用SYBR Green Real-time PCR檢測Rest和AF1qmRNA的表達情況。5.統(tǒng)計分析：應用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù),采用t檢驗和Sperman相關分析對數(shù)據(jù)分別進行差異性分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。研究結果1.與同齡陰性對照小鼠相比,APPswe/PSEN1dE9雙陽性B6C3-Tg小鼠中AF1qmRNA的表達量相對較低；提示AFlq水平的降低可能與AD的致病相關,AF1 q可能是參與AD的致病過程的相關分子。2.REST可以抑制人類AF1q基因的轉錄。2.1 REST高表達后內(nèi)源性AF1qmRNA的表達量降低,而敲除REST后內(nèi)源性AF1q mRNA表達量升高：提示轉錄因子REST能夠下調(diào)AF1q的轉錄。2.2與pGL3-Basic相比,Luciferase檢測示pAF1qpromotor的熒光素酶活性明顯升高,說明克隆的AF1q啟動子序列具有啟動子活性。2.3與對照組相比,REST能夠抑制AF1q啟動子的活性,說明REST通過抑制AF1q啟動子的活性來下調(diào)AF1q的轉錄。3.AFlq基因啟動子功能性NRSE位點的確定。3.1計算機Jaspar軟件預測AF1q啟動子區(qū)域的具有2個結合位點,分別位于-383--363bp和+422～+442bp；3.2 Luciferase檢測證實構建的截短啟動子均具有啟動子活性,而REST能夠下調(diào)包含-383～-363bp位點的啟動子,當-383～-363bp不包含時REST的下調(diào)作用消失,初步證實REST作用的功能性NRSE位點位于-383-363bp；3.3 EMSA和ChIP均驗證功能性NRSE位點位點位于-383--363bp。4.AF1q與Rest在正常成年小鼠大腦神經(jīng)發(fā)育過程中呈負相關。當Rest表達比較高時,Af1q表達處于低水平,而當Rest表達比較低時,Af1q表達處于高水平,說明兩者有負相關；進一步證實REST對AF1q的負調(diào)控作用。結論1.AF1q在AD鼠中的表達明顯低于正常對照組小鼠。2.REST可以抑制人類AF1q基因的轉錄。3.人類AF1q基因啟動子區(qū)-383-363bp可與REST結合,發(fā)揮功能性NRSE位點的作用。4.AF1q與Rest在正常小鼠大腦神經(jīng)發(fā)育過程中呈負相關。第二部分AFlq通過TCF7激活Wnt信號通路參與神經(jīng)發(fā)育的過程的研究研究目的研究AF1q在神經(jīng)發(fā)育中的功能作用；并揭示AFlq作為Wnt信號通路的新分子,調(diào)控Wnt信號通路的分子機制；明確AF1q與TCF7之間相互作用,以完善Wnt信號通路。研究方法1.研究AFlq在神經(jīng)源性細胞SH-SY5Y中的功能。1.1質(zhì)粒的構建及細胞轉染：構建AF1q高表達質(zhì)粒pcDNA3.1-AF1q-6myc,以及帶綠色熒光蛋白的pEGFP-AF1q-C3,上調(diào)AF1q的表達,應用Lipofectatmine2000轉染神經(jīng)源性細胞SH-SY5Y細胞,48小時后RT-PCR、Western blot方法檢測AFlq的表達,或者熒光顯微鏡直接觀測pEGFP-AF1q-C3質(zhì)粒的轉染效率。1.2病毒包裝及細胞感染：分別包裝攜帶AFlq表達載體的慢病毒,感染SH-SY5Y細胞,上調(diào)AFlq表達,48小時后RT-PCR, Western blot方法檢測AF1q的表達；應用Blastin藥物篩選獲得穩(wěn)定感染細胞系,RT-PCR、Western blot方法檢測病毒感染穩(wěn)篩后AFlq表達情況。1.3將AFlq表達質(zhì)粒pEGFP-AF1q-C3和對照質(zhì)粒應用Lipofectamine 2000轉染SH-SY5Y細胞中,共聚焦顯微鏡下觀察AF1q在細胞中的定位。1.4 MTT檢測細胞的增殖：將篩選穩(wěn)定表達的AFlq的SH-SY5Y細胞系及對照組按合適的密度種植到96孔板中,分別在細胞增殖的第0,1,2,3,4,5天,對細胞進行MTT檢測,繪制增殖曲線。1.5 EdU檢測細胞的增殖：將篩選穩(wěn)定表達的AF1q的SH-SY5Y細胞系及對照組按合適的密度種植到共聚焦小皿中,孵育24小時后,待細胞貼壁完善后進行EdU染色,熒光顯微鏡下觀察細胞的增殖狀態(tài),并計數(shù)分析。1.6流式細胞術檢測細胞周期：將篩選穩(wěn)定表達的AFlq的SH-SY5Y細胞系及對照組細胞收集后,70%冰乙醇在-20℃條件下固定1小時,經(jīng)PI染色后流式細胞儀檢測細胞周期。2.研究AFlq對神經(jīng)干細胞的增殖和分化的作用。2.1神經(jīng)干細胞的獲取：取胚胎13天的胎鼠,斷頭取腦,分離海馬,使用木瓜胰蛋白酶消化后制成單細胞懸液,神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)5-7天后形成神經(jīng)球,細胞免疫化學檢測神經(jīng)干細胞標記蛋白Nestin,確定培養(yǎng)的神經(jīng)球為神經(jīng)干細胞。2.2病毒感染：將攜帶AFlq表達載體的慢病毒,感染神經(jīng)干細胞,上調(diào)AFlq表達,48小時后熒光顯微鏡觀測感染效率,并且RT-PCR、Western blot方法檢測病毒感染后AF1q表達情況。2.3測量神經(jīng)干細胞球大小和數(shù)目：將高表達AFlq或對照組的神經(jīng)干細胞消化傳代培養(yǎng)3天,顯微鏡下觀察兩組神經(jīng)干細胞球大小和數(shù)目的差異性。2.4檢測神經(jīng)干細胞分化能力：將慢病毒感染后并穩(wěn)定表達的神經(jīng)干細胞傳代,RT-PCR檢測神經(jīng)元前體Neurogenin-1的表達差異；培養(yǎng)一周后加入神經(jīng)干細胞分化培養(yǎng)基誘導干細胞分化,細胞免疫熒光檢測神經(jīng)元標記蛋白MAP-2和星形膠質(zhì)細胞標記蛋白GFAP的表達,檢測神經(jīng)干細胞的分化能力。3.AF1q作用于Wnt信號通路的分子機制研究。3.1 TOP-FlashFOP-Flash熒光素酶活性檢測：在HEK293細胞中分別應用Lipofectamine 2000轉染AFlq高表達載體和對照質(zhì)粒,轉染24小時后進行TOP-FlashFOP-Flash熒光素酶活性檢測。3.2免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)實驗檢測AFlq蛋白與TCF7結合作用：將攜帶6myc標簽AFlq編碼基因全長表達載體,分別與攜帶Flag標簽的TCF7,LEF1表達載體或β-catenin載體,應用Lipofectamine 2000共轉染HEK293細胞,Co-IP實驗檢測驗證AFlq蛋白與Wnt細胞通路關鍵分子的結合作用。3.3 Western blot分析AFlq結合TCF7蛋白后TCF7蛋白的穩(wěn)定性：將AFlq表達載體或對照質(zhì)粒和TCF7分別應用Lipofectamine 2000共轉染HEK293細胞,轉染48小時候后加入終濃度100ug/ml的蛋白合成抑制劑CHX,分別在加藥0h、3h、 6h、 9h、12h和24h后收集細胞,Western blot分析TCF7蛋白的表達變化。3.4 TCF7的核轉錄：將AFlq表達載體和對照質(zhì)粒分別與TCF7應用Lipofectamine 2000共轉染HEK293細胞,轉染48小時后分別提取核質(zhì)蛋白,Western blot分析核質(zhì)中TCF7蛋白的表達。3.5 EdU檢測AFlq通過TCF7發(fā)揮功能：構建TCF7敲除質(zhì)粒psiTCF7, Lipofectamine 2000轉染HEK293細胞,Western blot分析敲除效果；將AFlq高表達質(zhì)粒分別與psiTCF7或其對照應用Lipofectamine 2000轉染SH-SY5Y細胞,轉染48小時后,EdU檢測細胞的增殖。3.6 Co-IP明確AFlq與TCF7的結合位點：構建了AFlq的系列缺失表達載體,包括1-30aa、30-90aa、1-60aa、60-90aa、 1-20aa、20-80aa、 1-10aa,10-90aa、 20-30aa和11-20aa,這些系列缺失載體分別與TCF7表達質(zhì)粒應用Lipofectamine2000共轉染HEK293細胞,利用CO-IP技術分析,確定TCF7的結合位點。3.7 AFlq的磷酸化與TCF7的作用關系。3.7.1制備AFlq11位絲氨基酸突變?yōu)楸奖彼岬馁|(zhì)粒pAF1qS11F,將pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc,與pcDNA3.1-AF1q-6myc及對照質(zhì)粒分別轉染HEK293細胞,轉染48小時后Western blot檢測AFlq蛋白表達的差異。3.7.2 Western blot檢測AFlq蛋白穩(wěn)定性：將pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc,與pcDN A3.1-AF1q-6myc及對照質(zhì)粒分別轉染HEK293細胞,轉染48小時后加入終濃度100ug/ml的蛋白合成抑制劑CHX,分別在加藥Oh、3h、6h、 9h、12h和24h后收集細胞,Western blot分析AFlq蛋白的表達變化。3.7.3 TOP-FlashFOP-Flash報告系統(tǒng)：pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc與pcDNA3.1-AF1q-6myc及對照質(zhì)粒分別應用Lipofectamine 2000轉染HEK293細胞,24小時后TOP-Flash FOP-Flash分析Wnt信號通路的激活作用。3.7.4 EdU測細胞的增殖：分別應用Lipofectamine 2000將SH-SY5Y細胞轉染pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc與pcDNA3.1-AF1q-6myc及對照質(zhì)粒,48小時后EdU檢測細胞的增殖。4.統(tǒng)計分析：應用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù),采用t檢驗進行差異性分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。研究結果1.AFlq促進細胞的增殖。1.1RT-PCR結果顯示與對照組相比,構建的pcDNA3.1-AF1q-6myc質(zhì)粒以及pEGFP-AF1q-C3質(zhì)粒,均能夠上調(diào)AFlq的表達。熒光顯微鏡下觀察pEGFP-AF1q-C3能夠表達綠色熒光融合蛋白。1.2 RT-PCR結果顯示與對照組相比,含AF1q表達載體的慢病毒lenti-AF1q能夠上調(diào)AFlq表達。1.3共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)AF1q主要定位于細胞漿中,細胞核中比較少,而在處于細胞分裂狀態(tài)的細胞中AFlq在核膜周圍有顆粒狀匯集,表明AFlq主要在細胞漿中發(fā)揮作用。1.4 MTT檢測表明,與對照組相比,AFlq高表達能夠促進SH-SY5Y細胞的增殖。1.5 EdU檢測表明,與對照組相比,AFlq高表達能夠促使SH-SY5Y細胞處于增殖狀態(tài)的增多。1.6流式細胞術檢測細胞周期顯示,與對照組相比,AF1q高表達能夠促進細胞處于S期,G2期且使處于G1期的細胞比例減少。說明AFlq能夠影響細胞周期。2.AF1q促進神經(jīng)干細胞的增殖并抑制其向神經(jīng)元方向分化。2.1細胞免疫化學Nestin染色證實分離獲得的懸浮細胞球為神經(jīng)干細胞。2.2RT-PCR證實AFlq表達載體的慢病毒lenti-AF1q能夠感染神經(jīng)干細胞,并上調(diào)AFlq表達。2.3顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),與對照組相比,AFlq高表達能夠促進神經(jīng)干細胞球變大和增加半徑較大的神經(jīng)干細胞球的數(shù)目。2.4 RT-PCR檢測證實與對照組相比,AFlq高表達后,神經(jīng)元前體Neurogenin-1的表達量降低；細胞免疫熒光檢測神經(jīng)元標記蛋白MAP-2和星形膠質(zhì)細胞標記蛋白GFAP的表達結果顯示,與對照組相比AF1q高表達導致神經(jīng)元標記蛋白MAP-2相對含量降低；綜上所述,AFlq能夠抑制神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元方向的分化。3.AFlq通過與TCF7相互作用激活Wnt信號通路。3.1 TOP-Flash FOP-Flash熒光素酶活性檢測表明AFlq能夠激活Wnt信號通路。表明AFlq有可能是Wnt信號通路的新的分子。3.2 Co-IP實驗檢測AFlq蛋白能夠與TCF7相互作用,而與LEF1或β-catenin沒有相互結合。說明AFlq參與Wnt信號通路可能是通過與TCF7的相互作用。3.3 Western blot分析顯示,與對照組相比,在AFlq存在的條件下,TCF7蛋白的表達量增加,而且加入CHX后,TCF7的降解速率明顯減慢。說明AF1q能夠穩(wěn)定TCF7蛋白的穩(wěn)定性。3.4 Western blot分析顯示,與對照組相比,AF1q高表達后,細胞核中TCF7的含量明顯增加,說明AF1q能夠促進TCF7的核轉錄。3.5干擾TCF7蛋白的表達,導致AF1q促進細胞增殖的效果降低,說明AF1q是通過TCF7來間接的促進細胞的增殖。3.6 Co-IP明確AF1q與TCF7的結合位點位于AF1q蛋白上第11-20氨基酸位點。3.7 AF1q11位點的磷酸化是與TCF7結合并發(fā)揮作用的關鍵位點。3.7.1 pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc為AF1q11位點絲氨酸突變?yōu)楸奖彼岬馁|(zhì)粒,其中第11位點不能夠被磷酸化,Western blot示pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc主要表達非磷酸的的分子量較小的AF1q,而pcDN A3.1-AF1q-6myc質(zhì)粒表達的AF1q蛋白中磷酸化和非磷酸化的AF1q均有表達；3.7.2 Western blot檢測示pcDNA3.1-AF1q-6myc蛋白表達的AF1q蛋白的穩(wěn)定性比pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc表達的AF1q蛋白的穩(wěn)定性高：3.7.3 TOP-Flash FOP-Flash檢測系統(tǒng)顯示與pcDNA3.1-AF1q-6myc相比,pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc對Wnt信號通路的激活作用減弱；3.7.4 EdU示與pcDN A3.1-AF1q-6myc相比,pcDNA3.1-AF1qS11F-6myc促進細胞增殖作用減弱。結論1.AF1q促進SH-SY5Y細胞的增殖。2.AF1q促進神經(jīng)干細胞的增殖并抑制其向神經(jīng)元方向的分化。3.AF1q通過與TCF7相互作用激活Wnt信號通路。4.AF1q與TCF7的作用位點位于AF1q蛋白11-20氨基酸位點。5.11位點的磷酸化為AF1q發(fā)揮功能的關鍵位點。
【關鍵詞】：阿爾茨海默病 MLL-AF1q易位融合基因 神經(jīng)元限制性沉默因子 負調(diào)控 MLL-AF1q易位融合基因 T細胞因子7 Wnt信號通路 神經(jīng)發(fā)育
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 中文摘要9-18
• ABSTRACT18-29
• 符號說明29-31
• 第一部分 AF1q的轉錄調(diào)控31-76
• 第一章 前言31-34
• 第二章 材料與方法34-61
• 2.1 實驗材料及試劑34-39
• 2.2 實驗儀器39-40
• 2.3 質(zhì)粒的構建40-48
• 2.4 細胞培養(yǎng)48-50
• 2.5 細胞轉染50
• 2.6 雙熒光素酶報告基因分析50-51
• 2.7 RNA提取及RT-PCR51-53
• 2.8 Western Bloting蛋白分析53-56
• 2.9 凝膠遷移率實驗(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)56-58
• 2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)58-60
• 2.11 實驗動物60
• 2.12 核苷酸序列編號60
• 2.13 數(shù)據(jù)分析60-61
• 第三章 實驗結果61-71
• 3.1 Af1q在阿爾茨海默病鼠模型中表達相對較低61-62
• 3.2 REST能夠抑制人類AF1q基因的表達62-64
• 3.3 確定AF1q基因啟動子上功能性NRSE結合位點64-69
• 3.4 AF1q與Rest在小鼠腦內(nèi)表達呈負相關69-71
• 第四章 討論與總結71-74
• 參考文獻74-76
• 第二部分 AFlq通過TCF7激活Wnt信號通路參與神經(jīng)發(fā)育過程的研究76-120
• 第一章 前言76-78
• 第二章 材料與方法78-92
• 2.1 實驗材料和試劑78
• 2.2 主要實驗儀器78-79
• 2.3 Western blot膠的配制79-80
• 2.4 慢病毒的包裝、濃縮和感染80-81
• 2.5 表達載體的構建81-85
• 2.6 流式細胞術檢測細胞周期85-86
• 2.7 細胞培養(yǎng)及傳代86
• 2.8 神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)86-87
• 2.9 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)87-88
• 2.10 核蛋白的提取88-89
• 2.11 神經(jīng)球Nestin免疫熒光染色89
• 2.12 MTT檢測細胞增殖89-90
• 2.13 EdU檢測細胞增殖90-91
• 2.14 數(shù)據(jù)分析91-92
• 第三章 實驗結果92-110
• 3.1 AF1q促進SH-SY5Y細胞以及神經(jīng)干細胞的增殖抑制向神經(jīng)元方向分化92-98
• 3.2 AF1q通過TCF7激活Wnt信號通路98-104
• 3.3 TCF7與AF1q結合位點的確定104-105
• 3.4 磷酸化的AF1q起重要作用105-110
• 第四章 討論與總結110-117
• 參考文獻117-120
• 第三部分 文獻綜述 AF1q在相關疾病中的作用及其機制研究進展120-131
• 參考文獻128-131
• 總結131-132
• 文章創(chuàng)新點及意義132-133
• 致謝133-135
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄135-136
• 學位論文評閱及答辯情況表136-137
• English anicles Ⅰ137-150
• English anicles Ⅱ150-169

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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6 Robert D.Terry;;阿爾采木病理學新發(fā)現(xiàn)[J];上海精神醫(yī)學;1992年S1期

7 Robert D.Terry;;Pathology of Alzheimer Disease: A New Addition[J];上海精神醫(yī)學;1992年S1期

8 辜清,白曉春,林剛,龔貴如;腦內(nèi)微血管的發(fā)育[J];江西教育學院學報(自然科學);2001年03期

9 隆曉菁;陳書中;徐禮勝;廖煒圻;姜春香;張麗娟;;阿爾茨海默氏癥患者大腦的結構偏側性研究[J];集成技術;2013年05期

10 張慧;范月超;;侵襲性垂體腺瘤分子機制的研究進展[J];臨床神經(jīng)外科雜志;2013年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Shaosheng Wang;Xiaohong Zhao;Jie Wang;Yingmei Wen;LinJing Zhang;Dezhu Wang;Huili Chen;Qiuxia Chen;Wei Xiang;;Upregulation of micro RNA-203 is associated with advanced tumor progression and poorprognosis in epithelial ovarian cancer[A];第七屆生命科學聯(lián)合學術大會論文匯編[C];2015年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜波;補陽還五湯膠囊對AD大鼠NF-κB信號調(diào)控及對星形膠質(zhì)細胞相關蛋白表達影響的實驗研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2010年

2 鄒純樸;地黃飲子對Aβ致海馬神經(jīng)元損傷影響的實驗研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2004年

3 王四平;活血化痰法治療血管性癡呆的機理研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2005年

4 何秀麗;地黃飲子對Aβ誘導的PC12細胞鈣離子通道及相關基因表達的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2007年

5 周忠光;補陽還五湯對Aβ_（1-40）所致AD大鼠β-淀粉樣蛋白影響及相關機制的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2007年

6 賀文彬;腎陽虛對海馬突觸可塑性的影響[D];山東中醫(yī)藥大學;2007年

7 丁硯兵;壽爾智膠囊對老年性癡呆與海馬神經(jīng)元細胞離子通道的影響[D];湖北中醫(yī)學院;2009年

8 蔡林鴻;PTEN抑制劑對脊髓損傷神經(jīng)保護作用的機制研究[D];華中科技大學;2013年

9 喬艷;遺傳變異與結直腸癌和非霍奇金淋巴瘤易感性及直腸癌術后同步放化療副反應的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

10 潘陽;人—鼠嵌合型抗弓形蟲IgM抗體檢測質(zhì)控物研制和基于病毒樣顆粒的microRNA-146a轉運方法建立及其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的治療研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 杜海宇;水楊酸鈉對順鉑所致豚鼠耳毒性的保護作用[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

2 孫家琛;活性氧調(diào)制因子1在人直腸癌組織中的表達和意義[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

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本文編號：803677