本文關(guān)鍵詞：改良的胎鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)及模擬糖尿病并發(fā)抑郁環(huán)境對(duì)其的損傷作用

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【摘要】：目的:建立一種改良的胎鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法,研究模擬糖尿病并發(fā)抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)環(huán)境對(duì)其的損傷作用。方法:取胎齡18 d的SD大鼠,體視顯微鏡下分離海馬,0.25%胰蛋白酶和0.2%膠原酶(1∶1)消化后進(jìn)行體外培養(yǎng),分別觀察培養(yǎng)后4 h、24 h、5 d、8 d、14 d海馬神經(jīng)元的基本形態(tài)結(jié)構(gòu);神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。采用高糖聯(lián)合皮質(zhì)酮造模構(gòu)建類似糖尿病并發(fā)抑郁癥狀的模擬DD環(huán)境,MTT法檢測(cè)神經(jīng)元的存活率;流式AnnexinV/PI雙染和Hoechst熒光染色檢測(cè)神經(jīng)元的凋亡情況。結(jié)果:經(jīng)NSE免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定,培養(yǎng)7 d后的神經(jīng)元純度達(dá)95%以上,細(xì)胞胞體成球形,樹突分支明顯,并相互交織成豐富的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò);高糖、皮質(zhì)酮及兩者聯(lián)用造模18 h后,與正常對(duì)照組相比,MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率分別為53.1%、64.3%和56.7%,P0.05;流式細(xì)胞儀檢測(cè)正常對(duì)照組、高糖組、皮質(zhì)酮組、兩者聯(lián)用組Q3區(qū)的比例(分別為71.6%、47.9%、53.6%和39.2%),明顯低于陰性對(duì)照組(98.5%),P0.05。后四者Q2+Q4區(qū)總比例分別為24.4%、46.6%、40.4%、67.0%;Hoechst染色結(jié)果提示上述三個(gè)造模組的神經(jīng)元細(xì)胞核均出現(xiàn)不同程度的核染色質(zhì)聚集、濃縮,甚至核碎裂,呈現(xiàn)出典型的凋亡特征。結(jié)論:成功建立一種操作簡(jiǎn)便、細(xì)胞純度佳、活性好、產(chǎn)率高的胎鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)方法,驗(yàn)證了模擬DD環(huán)境對(duì)海馬神經(jīng)元的損傷作用,為體外深入研究DD的發(fā)病機(jī)制及藥物防治提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【作者單位】： 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院;湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)胞培養(yǎng) 海馬神經(jīng)元 糖尿病 抑郁癥 模擬DD環(huán)境 凋亡 胎鼠
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81373578,81573965,81403379) 湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)培育基地開放基金資助項(xiàng)目(ZYFT201401)
【分類號(hào)】：R587.2;R749.4
【正文快照】： 海馬是神經(jīng)元高度集中的部位,其在調(diào)控學(xué)習(xí)、記憶、情緒等生理功能方面發(fā)揮著重要作用,同時(shí)又是癲癇、抑郁等神經(jīng)變性疾病的主要病灶區(qū)。Banker和Cowan[1,2]首次在體外成功分離并培養(yǎng)了大鼠胚胎海馬神經(jīng)元,此后隨著實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞標(biāo)本要求的提高,如何建立一種操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定,細(xì)胞

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