發(fā)布時(shí)間：2017-09-03 09:09

  本文關(guān)鍵詞：阿司匹林對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)神經(jīng)元炎性損傷的保護(hù)作用研究

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【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)的主要臨床特征為進(jìn)行性認(rèn)知功能下降,通常最初為近期記憶丟失,隨后影響到所有智力功能,嚴(yán)重者可導(dǎo)致生活基本功能完全喪失和過早死亡。細(xì)胞外β淀粉樣蛋白(βamyloid protein,Aβ)沉積、細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFT)和引起神經(jīng)元死亡的炎性反應(yīng)是AD的主要病理特征。由于老齡化危機(jī),AD的患病率在全世界范圍內(nèi)都將增加,并將對(duì)社會(huì)產(chǎn)生沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。神經(jīng)元功能障礙和死亡是AD出現(xiàn)一系列癥狀的原因,然而現(xiàn)有的藥物治療措施并不能減緩或阻止這一病理改變,AD仍是一種不可治愈的疾病。因此,探索一種經(jīng)濟(jì)有效的防治藥物具有重要意義。AD的發(fā)生發(fā)展與神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)密切相關(guān)。炎性因子腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白細(xì)胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)均具有神經(jīng)毒性作用,可影響神經(jīng)突觸的傳遞功能。TNF-α和IL-1β也是核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)最有效的刺激因子。激活的NF-κB可繼續(xù)誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β、Toll樣受體和脂多糖等細(xì)胞因子表達(dá),形成慢性炎性反應(yīng)的惡性循環(huán)。臨床資料顯示,服用阿司匹林(aspirin,Asp)的人群AD患病率較未服用者明顯減少。鑒于Asp具有抗炎作用,推測(cè)其降低AD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可能與抗炎作用有關(guān)。本研究使用Aβ制造AD神經(jīng)損傷模型,通過ASP的干預(yù)來探究其對(duì)神經(jīng)炎性反應(yīng)中TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(phosphorylated inhibitor proteinαof nuclear factor kappa B,p IκB-α)表達(dá)的影響及其作用機(jī)制,以期能為AD的治療提供新方法。研究目的神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)在AD的進(jìn)程中起到重要作用,本研究通過使用Aβ來建立AD神經(jīng)損傷細(xì)胞模型,在Asp干預(yù)后觀察其對(duì)神經(jīng)炎性反應(yīng)中TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)的影響,探討NF-κB通路在此過程中的作用和Asp在AD臨床治療中的意義。研究方法(1)取孕17~18d胎鼠海馬,經(jīng)過剪碎、消化、離心和吹打過濾后接種培養(yǎng);(2)觀察并記錄第2、3、4、5天神經(jīng)元生長(zhǎng)狀況,并于第7天用神經(jīng)元特異性烯醇化酶熒光染色法鑒定神經(jīng)元,計(jì)算其純度。(3)將培養(yǎng)至第7天的神經(jīng)元隨機(jī)分為4組:(1)Aβ組:加入終濃度為20μmol/L的Aβ;(2)低劑量Asp組:加入終濃度為50μmol/L的Asp和20μmol/L的Aβ;(3)高劑量Asp組:加入終濃度為100μmol/L的Asp和20μmol/L的Aβ;(4)空白對(duì)照組:加入等量維持培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48h后,采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定上清液中TNF-α和IL-1β含量,Wstern Blotting法檢測(cè)NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)水平。結(jié)果(1)與對(duì)照組比較,Aβ組TNF-α和IL-1β含量最高(P0.01),其次為低劑量Asp組(P0.01)和高劑量Asp組(P=0.02和P0.01);Aβ組NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白的表達(dá)水平也明顯升高(P0.01),低劑量Asp組NF-κB/p65核蛋白表達(dá)水平稍有升高(P=0.01),p IκB-α總蛋白表達(dá)水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.61);高劑量Asp組NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值分別為0.13和0.77)。(2)與Aβ組比較,低劑量Asp組TNF-α和IL-1β含量均降低(P0.01),NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)水平也明顯降低(P0.01);高劑量Asp組TNF-α和IL-1β含量也明顯降低(P0.01),并減少NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)水平(P0.01)。(3)低劑量和高劑量Asp組兩組TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)水平比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值分別為0.36、0.58、0.19和0.82)。結(jié)論Aβ組TNF-α和IL-1β含量均明顯升高,NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)水平也明顯升高,提示Aβ組炎性反應(yīng)較為明顯,且NF-κB被激活并進(jìn)入核內(nèi);低劑量和高劑量Asp組TNF-α和IL-1β含量均降低,NF-κB/p65核蛋白和p IκB-α總蛋白表達(dá)水平也偏低,提示低劑量和高劑量Asp組炎性反應(yīng)受到抑制,且NF-κB的激活受到抑制。推測(cè)Aβ可能通過神經(jīng)元中激活NF-κB通路而誘導(dǎo)炎性因子TNF-α和IL-1β的釋放增多,Asp可能通過抑制神經(jīng)元中NF-κB的活化,減少TNF-α和IL-1β的生成,從而對(duì)神經(jīng)炎性損傷起到保護(hù)作用。提示炎性反應(yīng)在AD發(fā)生發(fā)展中具有不可忽視的作用,以及AD抗炎治療的可能性。高劑量和低劑量Asp組兩組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,若進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),為了避免高劑量Asp產(chǎn)生的胃腸道副作用,建議從低劑量Asp開始使用。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 神經(jīng)炎性反應(yīng) 阿司匹林 核轉(zhuǎn)錄因子κB
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-17
• 參考文獻(xiàn)13-17
• 課題設(shè)計(jì)17-18
• 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料18-21
• 實(shí)驗(yàn)方法21-26
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-36
• 分析與討論36-42
• 參考文獻(xiàn)42-50
• 結(jié)論50-52
• 綜述52-65
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況說明65-66
• 致謝66-67

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本文編號(hào)：784090