本文關鍵詞：Theacrine對水浸拘束應激負荷小鼠海馬神經元增殖的影響及機制研究

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【摘要】：目的：建立水浸拘束應激（CWIRS）負荷小鼠抑郁模型，研究1,3,7,9-四甲基尿酸（Theacrine, Tc）對CWIRS誘導的小鼠抑郁樣癥狀的影響，并從神經再生的角度去探討其作用機制。 方法：（1）藥效考察：采用CWIRS建立小鼠抑郁癥模型，用經典的行為學實驗（懸尾實驗、強迫游泳、高價十字迷宮以及糖水偏愛實驗）評價造模效果以及考察藥物的干預作用；用自發(fā)活動箱對給藥后小鼠的自發(fā)活動進行測定，以考察藥物對小鼠是否有中樞興奮作用；采用HPLC-ESA方法檢測CWIRS對小鼠海馬中神經遞質含量的影響以及給予Tc干預后神經遞質含量變化。（2）作用機制探究：采用HPLC-UV方法分析考察Tc對CWIRS小鼠血漿中皮質酮(corticosterone, CORT)含量的影響；采用免疫熒光技術考察Tc對CWIRS小鼠海馬神經元增殖的影響。此外，本課題還采用HPLC方法來分析考察Tc對小鼠海馬組織中磷酸二酯酶（PDEs）活性的影響；用ELASA方法考察Tc對PC12細胞中cAMP含量的影響；采用Western blotting方法考察Tc對CWIRS小鼠海馬組織中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及p-TrkB等蛋白表達的影響。最后，建立了皮質酮損傷細胞模型，用Western blotting方法考察Tc對PC12細胞中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及p-TrkB等蛋白表達的影響，給予Rp-cAMP后，再次考察Tc對上述蛋白表達的影響。 結果：CWIRS導致小鼠出現(xiàn)抑郁樣癥狀，表現(xiàn)為絕望、焦慮、興趣缺乏以及海馬組織中5-hydroxytryptamine（5-HT）含量顯著降低，而5-hydroxy indole aceticacid（5-HIAA）含量顯著升高等。給予Tc及Ca可以有效改善應激小鼠抑郁樣行為，表現(xiàn)為縮短應激后小鼠強迫游泳和懸尾實驗中的不動時間，延長應激小鼠在十字迷宮實驗中進入開放臂的時間和增加進入開放臂的次數(shù)，逆轉應激導致小鼠糖水偏嗜度降低現(xiàn)象以及改善應激導致的海馬5-HT水平低下這一癥狀。機制研究發(fā)現(xiàn)，CWIRS可以導致小鼠血漿CORT水平顯著升高，而只有Tc可以逆轉應激導致的CORT水平升高作用；免疫熒光結果表明，，Ca和Tc均可以改善應激導致的海馬BrdU+/DCX+陽性細胞數(shù)降低這一作用。進而我們又從分子水平探究了Tc促進神經元增殖的分子機制，體內結果顯示，Ca和Tc促進CWIRS小鼠海馬組織中p-CREB、BDNF及p-TrkB等蛋白表達。在體外細胞模型上也發(fā)現(xiàn)，200μM皮質酮會導致細胞中p-CREB、BDNF及p-TrkB等蛋白表達水平降低，Tc和Ca可以有效逆轉這一作用，而Rp-cAMP完全拮抗了Tc促進p-CREB蛋白表達的作用，部分拮抗了Tc促進BDNF和p-TrkB蛋白表達的作用，而Ca促進p-CREB、BDNF、p-TrkB等蛋白表達的作用被Rp-cAMP全部拮抗。 結論：由動物實驗可知和Tc和Ca均可以改善CWIRS誘導的小鼠抑郁樣狀態(tài)，且Ca有一定的中樞興奮作用，該作用可能介導了其抗抑郁作用的發(fā)揮，而Tc則無中樞興奮作用。Tc抗抑郁作用的機制可能是通過降低應激小鼠血漿皮質酮水平，從而改善慢性應激誘導致的小鼠海馬神經元增殖抑制作用。Tc通過激活cAMP/CREB/BDNF/TrkB信號通路來促進小鼠海馬神經元增殖水平，從而改善應激誘導的小鼠抑郁樣癥狀，有望開發(fā)成為神經元保護劑，成為新型的抗抑郁藥物。
【關鍵詞】：抑郁 慢性水浸拘束應激 1 3 7 9-四甲基尿酸 咖啡因 神經元增殖
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.4
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-6
• 英文縮略詞表6-7
• 目錄7-10
• 1. 前言10-20
• 1.1 抑郁癥10-13
• 1.1.1 抑郁癥的特征10-11
• 1.1.2 抑郁癥解剖學基礎11-12
• 1.1.3 抑郁癥發(fā)病機制12-13
• 1.2 應激與抑郁癥的關系13-16
• 1.2.1 抑郁癥與應激13-16
• 1.3 抑郁癥的治療16-17
• 1.3.1 抗抑郁藥16-17
• 1.3.2 其他非藥物治療17
• 1.4 嘌呤生物堿與情緒調節(jié)17-19
• 1.5 立題依據(jù)19-20
• 2. Tc 對應激負荷小鼠抑郁癥狀的影響20-32
• 2.1 實驗材料20-21
• 2.1.1 實驗動物20
• 2.1.2 主要試劑20
• 2.1.3 主要設備20-21
• 2.2 實驗方法21-24
• 2.2.1 CWIRS 的建立21
• 2.2.2 懸尾實驗（Suspension test, TST）21
• 2.2.3 強迫游泳（Forced swimming test, FST）21-22
• 2.2.4 高架十字迷宮測試（Elevated plus maze test, EPMT）22
• 2.2.5 糖水偏愛實驗（Sucrose preference test, SPT）22
• 2.2.6 自發(fā)活動實驗（Spontaneous motor activity test, SMAT）22-23
• 2.2.7 海馬中神經遞的測定23
• 2.2.8 統(tǒng)計學處理23-24
• 2.3 實驗結果24-29
• 2.3.1 Tc 對小鼠懸尾不動時間的影響24
• 2.3.2 Tc 對小鼠強迫游泳不動時間的影響24-25
• 2.3.3 Tc 對小鼠十字迷宮開放臂停留時間和進入次數(shù)的影響25-26
• 2.3.4 Tc 對小鼠糖水偏嗜度的影響26-27
• 2.3.5 Tc 對小鼠自發(fā)活動的影響27-28
• 2.3.6 Tc 對小鼠海馬中 5-HT 和 5-HIAA 含量的影響28-29
• 2.4 小結與討論29-32
• 3. Tc 抗抑郁作用機制研究32-48
• 3.1 實驗材料32-34
• 3.1.1 動物的飼養(yǎng)32
• 3.1.2 PC12 細胞的復蘇、傳代及凍存32
• 3.1.3 實驗試劑32-33
• 3.1.4 實驗設備33-34
• 3.2 實驗方法34-37
• 3.2.1 小鼠血漿樣品處理34-35
• 3.2.2 皮質酮標準溶液配制及標準曲線繪制35
• 3.2.3 血漿中皮質酮含量測定35
• 3.2.4 海馬組織切片樣品處理35-36
• 3.2.5 神經元增殖細胞數(shù)測定36
• 3.2.6 雙管法測定 PDEs 活性36
• 3.2.7 PC12 細胞中 cAMP 的含量測定36
• 3.2.8 皮質酮損傷細胞模型建立36-37
• 3.2.9 蛋白質印跡法（western blotting）測定相關蛋白表達37
• 3.3 結果37-44
• 3.3.1 Tc 逆轉應激導致的血漿皮質酮升高作用37-38
• 3.3.2 Tc 改善應激對海馬神經元增殖的抑制作用38-39
• 3.3.3 Tc 抑制以 cAMP 為底物的 PDEs 的活性39-40
• 3.3.4 Tc 促進 PC12 細胞中 cAMP 的分泌40-41
• 3.3.5 Tc 激活 CREB/BDNF/TrkB 信號通路41-44
• 3.4 小結與討論44-48
• 4 總結與展望48-52
• 4.1 問題與討論48
• 4.2 結果與討論48-50
• 4.3 創(chuàng)新與突破50
• 4.4 前景與展望50-52
• 參考文獻52-64
• 附錄64-65
• 1. 已申請專利64
• 2. 已投稿文章64-65
• 致謝65-67

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本文編號：744593