本文關鍵詞：齊拉西酮對LPS引起的小膠質細胞活化作用的研究

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【摘要】：背景:精神分裂癥是一種致殘性極高的慢性重性精神疾病,人群終生患病率近1%,其病理機理至今仍未明確。研究顯示,神經元的毒性損害與精神分裂癥大腦結構變化和病程進展有關,而氧化應激啟動的小膠質細胞活化,產生大量致炎性自由基、細胞因子等可以對神經元造成直接的毒性損害。誘導性NO合酶(i NOS)和NADPH氧化酶(NOX2)是小膠質細胞氧化應激的關鍵酶,i NOS和NOX2的激活可以產生一系列細胞因子從而對神經元產生損傷,抑制這兩個關鍵酶的表達和激活可以抑制小膠質細胞的活化從而對神經元細胞產生保護作用。目的:通過利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)建立小膠質細胞在體和離體炎癥模型,聚焦于小膠質細胞活化的關鍵酶i NOS和NOX2及其活化后的氧化應激產物,來探討在體和離體中非典型抗精神病藥物對活化小膠質細胞活化的作用并探索其作用的機制。方法:1、通過腹腔注射LPS建立在體動物腦內系統(tǒng)炎癥模型;2、運用ELISA法檢測齊拉西酮對離體小膠質活化后NO表達的作用。3、通過免疫印跡法(Western blot)檢測不同濃度齊拉西酮對在體和離體小膠質細胞誘導性一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表達的作用;4、通過western blot的方法檢測齊拉西酮對在體小膠質細胞NOX2亞單位gp91phox表達的影響。5、通過Oxyblot方法檢測藥物對在體和離體小膠質細胞蛋白氧化(蛋白羰基化水平)的作用;6、通過實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測齊拉西酮對在體和離體小膠質細胞i NOS m RNA的作用。結果:在體部分:1、LPS引起紋狀體部位i NOS表達的升高;2、LPS引起的紋狀體部位i NOS的升高可以被齊拉西酮抑制而不能被舒必利抑制。3、LPS對紋狀體部位NOX2亞單位gp91phox的表達無明顯作用。4、齊拉西酮能抑制LPS引起的蛋白羰基化產物的升高。5、齊拉西酮能抑制LPS引起的i NOS m RNA的升高。離體部分:1、齊拉西酮可以抑制LPS引起小膠質細胞活化所釋放的NO量;2、齊拉西酮可以抑制LPS引起的BV-2小膠質細胞內i NOS以及i NOS m RNA的表達增高。3、齊拉西酮能抑制BV-2小膠質細胞活化后細胞蛋白羰基化產物的升高。4、、LPS和齊拉西酮對BV-2小膠質細胞NOX2亞單位gp91phox的表達無明顯作用。結論:非典型抗精神病藥物可以通作用于小膠質細胞的兩個關鍵酶i NOS以及NOX2來抑制小膠質細胞的活化,從而對神經元產生保護作用,但其作用機制尚需進一步探索。意義:我們對于非典型抗精神病藥物對于小膠質細胞活化作用機制的研究,有助于我們明確新型抗精神病藥物的藥物作用機理、指導臨床合理用藥,更有助于我們深刻理解精神分裂癥的病因機制,為明確精神分裂癥臨床治療的新靶標提供理論基礎,并為人類最終治愈精神分裂癥找到科學的金鑰匙。
【關鍵詞】：齊拉西酮 小膠質細胞 iNOS NOX2 氧化應激
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 符號與縮寫12-14
• 第一章 緒論14-23
• 1.1 精神分裂癥的小膠質細胞假說14-16
• 1.2 小膠質細胞的活化16-18
• 1.3 精神分裂癥的抗炎治療18-20
• 1.4 非典型抗精神病藥物與小膠質細胞20-23
• 第二章 在體實驗部分23-43
• 2.1 背景介紹23-24
• 2.2 實驗材料與儀器24-25
• 2.2.1 實驗動物24
• 2.2.2 實驗試劑與耗材24-25
• 2.2.3 實驗儀器25
• 2.2.4 溶液的配置25
• 2.3 實驗方法25-31
• 2.3.1 實驗動物分組25-26
• 2.3.2 腹腔注射大鼠系統(tǒng)驗證模型的建立26
• 2.3.3 實驗切片的制作26
• 2.3.4 免疫熒光檢測26-27
• 2.3.5 大鼠在體細胞蛋白提取27
• 2.3.6 BCA法測蛋白濃度27-28
• 2.3.7 Western blot法檢測蛋白表達28-29
• 2.3.8 Oxyblot法檢測蛋白濃度29-30
• 2.3.9 RNA的提取30
• 2.3.10 逆轉錄30-31
• 2.4 數據統(tǒng)計方法31
• 2.5 實驗結果31-39
• 2.5.1 腹腔注射LPS誘導大鼠系統(tǒng)炎性模型的建立31-33
• 2.5.2 腹腔注射LPS對紋狀體部位iNOS表達的作用33-34
• 2.5.3 藥物對LPS引起的小膠質細胞iNOS表達的作用34-36
• 2.5.4 腹腔注射LPS對小膠質細胞NOX2亞單位gp91phox的影響36-37
• 2.5.5 藥物對LPS引起的在體蛋白氧化產物的影響37-38
• 2.5.6 藥物對LPS引起的在體小膠質細胞iNOSmRNA表達的影響38-39
• 2.6 討論39-42
• 2.7 小結42-43
• 第三章 離體實驗部分43-57
• 3.1 前言43-44
• 3.2 實驗材料與儀器44-46
• 3.2.1 實驗細胞株44
• 3.2.2 實驗試劑與耗材44-45
• 3.2.3 實驗儀器45
• 3.2.4 溶液的配置45-46
• 3.3 實驗方法46-49
• 3.3.1 小膠質細胞的培養(yǎng)46
• 3.3.2 細胞的凍存46
• 3.3.3 細胞的復蘇46-47
• 3.3.4 MTT法檢測細胞活性47
• 3.3.5 ELISA法測NO濃度47-48
• 3.3.6 細胞蛋白提取48
• 3.3.7 BCA法測蛋白濃度48
• 3.3.8 Western blot操作步驟48
• 3.3.9 Oxyblot操作步驟48
• 3.3.10 RNA提取48-49
• 3.3.11 逆轉錄49
• 3.3.12 數據分析方法49
• 3.4 結果49-54
• 3.4.1 MTT法測藥物對小膠質細胞生存率的影響49-50
• 3.4.2 藥物對小膠質細胞活化后釋放NO濃度的影響50-51
• 3.4.3 齊拉西酮對小膠質iNOS表達的影響51-52
• 3.4.4 齊拉西酮對小膠質細胞氧化蛋白表達的影響52
• 3.4.5 LPS和齊拉西酮對gp91~(phox)表達作用的影響52-53
• 3.4.6 齊拉西酮對小膠質細胞iNOS mRNA表達作用的影響53-54
• 3.5 討論54-56
• 3.6 小結56-57
• 第四章 總結57-59
• 4.1 主要工作與創(chuàng)新點57
• 4.2 后續(xù)研究工作57-59
• 參考文獻59-67
• 致謝67

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1 吳遠芳;;齊拉西酮治療青春型精神分裂癥50例對照研究觀察[J];兵團醫(yī)學;2008年02期

2 劉明山;車麗娜;盧錦秀;;齊拉西酮與利培酮治療難治性精神分裂癥對照研究[J];中國健康心理學雜志;2008年06期

3 隋忠國;畢曉林;荊凡波;;新型非典型抗精神病藥——齊拉西酮的臨床應用進展[J];中國藥房;2009年05期

4 郭斌;;齊拉西酮治療女性難治性精神分裂癥臨床觀察[J];中國醫(yī)藥指南;2009年24期

5 褚建平;石曉燕;譚天成;;齊拉西酮治療老年期精神分裂癥對照研究[J];臨床精神醫(yī)學雜志;2009年06期

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本文編號：722974