本文關(guān)鍵詞：Curcumin增強阿爾茨海默病自噬體的軸突轉(zhuǎn)運

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【摘要】：目的:阿爾茨海默病(AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的進行性退行性變性疾病。軸突轉(zhuǎn)運障礙所致的自噬體大量堆積于軸突并影響Aβ的代謝,促進AD發(fā)生發(fā)展,且分子馬達(dá)dynein和微管相關(guān)蛋白2(MAP2)與自噬體軸突轉(zhuǎn)運障礙和AD發(fā)展密切相關(guān);而GSK-3β參與調(diào)控dynein,是AD治療新靶點。姜黃素(Curcumin)是姜科草本植物姜黃根莖提取的植物化合物,可顯著抑制Aβ產(chǎn)生,在AD中發(fā)揮神經(jīng)保護作用,但其機制尚未完全闡明。本研究擬通過體內(nèi)和體外實驗,首先觀察Curcumin對自噬現(xiàn)象和自噬體軸突轉(zhuǎn)運的影響,再探討自噬體軸突轉(zhuǎn)運相關(guān)的分子馬達(dá)dynein和微管相關(guān)蛋白MAP2的表達(dá)以及Aβ產(chǎn)生的作用,并進一步分析該作用是否與GSK-3β有關(guān)。本研究從一個全新的視角探討Curcumin多重腦保護作用的分子機制,為Curcumin預(yù)防和治療AD提供新的實驗依據(jù)。方法:體內(nèi)實驗:將6個月齡大小的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因Tg2576小鼠隨機分為3組:普通飼喂組(按照正常普通飼料喂養(yǎng))、低濃度組(喂養(yǎng)含Curcumin0.16g/Kg混合飼料)、高濃度組(喂養(yǎng)含Curcumin 1.0g/Kg混合飼料)。每組10只,連續(xù)喂養(yǎng)6月。采用Morris水迷宮檢測Curcumin對雙轉(zhuǎn)基因鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響;免疫組化檢測雙轉(zhuǎn)基因小鼠Aβ42的沉積;透射電鏡觀察小鼠腦內(nèi)自噬體的形態(tài)變化;Western blot檢測小鼠腦內(nèi)Beclin1、LC-3的表達(dá);免疫組化檢測微管相關(guān)蛋白2(Microtuble-associate Proteins 2,MAP2)的表達(dá)變化;Western blot檢測Tau、p-Tau(Ser404)、糖原合成酶激酶-3β(Glycogen Synthase Kinase-3β,GSK-3β)、p-GSK-3β(Tyr216)、動力蛋白中間鏈(Dynein intermediate chain,DIC)蛋白表達(dá)變化。體外實驗:將N2a/WT和N2a/APP695swe分為以下4組:WT組(N2a/WT細(xì)胞)、對照組(5μM DMSO處理N2a/APP695swe 24h)、低濃度組(1.25μM Curcumin處理N2a/APP695swe 24h)、高濃度組(5μM Curcumin處理N2a/APP695swe 24h)。ELISA檢測Aβ42的表達(dá)變化;電鏡觀察N2a/APP695swe細(xì)胞內(nèi)自噬體的形態(tài)變化;Western blot檢測N2a/APP695swe細(xì)胞Beclin1、LC-3的表達(dá);免疫熒光檢測LC3與Aβ的共定位;Western blot檢測N2a/APP695swe細(xì)胞內(nèi)Tau、p-Tau(404)、GSK-3β、p-GSK-3β(Tyr216)和DIC蛋白表達(dá)變化;mRFP-GFP-LC3腺病毒轉(zhuǎn)染觀察細(xì)胞自噬體與溶酶體結(jié)合情況。結(jié)果:體內(nèi)實驗:Curcumin明顯改善轉(zhuǎn)基因鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;免疫組化顯示經(jīng)Curcumin處理后小鼠腦內(nèi)Aβ42明顯減少;電鏡發(fā)現(xiàn)經(jīng)Curcumin處理后小鼠腦內(nèi)軸突堆積的自噬體減少、胞體中自噬溶酶體增多;Western blot結(jié)果顯示Curcumin增加Beclin1、LC-3II/I的表達(dá);免疫組化顯示經(jīng)Curcumin處理后小鼠腦內(nèi)MAP2明顯增加(p0.05);Western blot結(jié)果顯示Curcumin抑制p-Tau(Ser404)/Tau、p-GSK-3β(Tyr216)/GSK-3β表達(dá),增加DIC的表達(dá)。體外實驗:ELISA結(jié)果顯示N2a/APP695swe細(xì)胞經(jīng)Curcumin處理后Aβ42減少(p0.05);電鏡發(fā)現(xiàn)經(jīng)Curcumin處理后自噬體和自噬溶酶體均增多;Western blot結(jié)果顯示Curcumin增加Beclin1、LC-3II/I的表達(dá),抑制p-Tau(Ser404)/Tau、p-GSK-3β(Tyr216)/GSK-3β表達(dá),增加的DIC表達(dá);LC3與Aβ存在共定位;自噬體與溶酶體結(jié)合增加。結(jié)論:Curcumin可以增強AD中自噬體的軸突轉(zhuǎn)運,表現(xiàn)為軸突中堆積的自噬體減少,胞體中自噬溶酶體增多,自噬的軸突轉(zhuǎn)運相關(guān)的主要分子馬達(dá)DIC上調(diào),MAP2表達(dá)增加,并抑制Tau蛋白過度磷酸化。Curcumin增強AD中自噬體軸突轉(zhuǎn)運的作用與其抑制GSK-3β的活性有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Curcumin 阿爾茨海默病 自噬體 軸突轉(zhuǎn)運 糖原合酶激酶-3β
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 1 材料與儀器12-16
• 2 實驗方法16-26
• 3 結(jié)果26-37
• 4 討論37-42
• 參考文獻42-47
• 文獻綜述: 自噬體軸突轉(zhuǎn)運在AD中的作用47-56
• 參考文獻52-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 He-Cheng Wang;Tao Zhang;Bolati Kuerban;Ying-Lan Jin;Weidong Le;Hideo Hara;Dong-Sheng Fan;Yan-Jiang Wang;Takeshi Tabira;De-Hua Chui;;Autophagy is involved in oral rAAV/Aβ vaccine-induced Aβ clearance in APP/PS1 transgenic mice[J];Neuroscience Bulletin;2015年04期

2 樊惠;魏鵬;陳曉培;馮慧利;任映;孫海蕓;楊金鐸;王蓬文;;姜黃素對9月齡APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠行為學(xué)的影響[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2013年06期

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本文編號：722209