發(fā)布時間：2017-08-18 19:31

  本文關(guān)鍵詞：抗Abeta抗體在阿爾茨海默病免疫治療中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 阿爾茨海默病 Aβ 免疫治療 副作用 Aβ自身抗體 外周清除

【摘要】：背景和目的阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年人群最常見的神經(jīng)退行性疾病,其發(fā)病機(jī)理尚不清楚。臨床上對于AD主要為對癥治療,目前尚無有效治療方法能夠終止或延緩疾病的進(jìn)展。淀粉樣蛋白β(amyloid-beta,Aβ)是AD的核心治病物質(zhì),Aβ在腦內(nèi)沉積形成老年斑(senile plaque)是AD的主要病理變化。針對Aβ的免疫治療,包括主動免疫(Aβ疫苗)和被動免疫(Aβ抗體),在AD動物模型中被證實(shí)有效。而AD免疫治療的臨床試驗(yàn)?zāi)壳熬允「娼K,主要失敗原因之一為副作用的發(fā)生,具體機(jī)制尚不清楚。人體內(nèi)廣泛存在天然Aβ自身抗體(NAbs-Aβ),研究表明NAbs-Aβ能夠拮抗Aβ的神經(jīng)毒性作用,對AD起保護(hù)作用。靜脈用免疫球蛋白(Invtrovenous immunoglobulin,IVIg)因含有NAbs-Aβ而被用于AD的治療研究,而其臨床試驗(yàn)也因認(rèn)知改善不明顯而提前終止。Aβ的聚合的關(guān)鍵位點(diǎn)與其毒性片段均位于Aβ中段。Aβ的結(jié)構(gòu)分析提示,Aβ氨基端(N端)纖維暴露在Aβ纖維的周圍,而羧基端(C端)和中段均位于Aβ纖維的核心。前期研究結(jié)果表明,針對Aβ-N端的單克隆抗體能夠促進(jìn)Aβ的產(chǎn)生,從而促進(jìn)AD的發(fā)生和發(fā)展。目前免疫治療臨床試驗(yàn)中所采用的抗體大多均為針對N端的抗體。在此研究中,我們旨在探索NAbs-Aβ表位相關(guān)的功能異質(zhì)性。同時,免疫治療的副作用可能與抗體促進(jìn)Aβ斑塊解聚為毒性更強(qiáng)的寡聚體有關(guān),我們探索了針對不同表位的抗體對Aβ纖維的解聚作用以及對Aβ神經(jīng)毒性的影響。另外,由于免疫治療的副作用均與抗體進(jìn)入腦內(nèi)發(fā)揮作用有關(guān),Aβ水平在腦內(nèi)與外周存在動態(tài)平衡,我們提出通過腦外途徑清除Aβ可能是更為安全的治療策略,我們在慢性腎病患者中探索了腎臟對Aβ的清除作用。同時,鑒于新藥物的副作用,我們從臨床現(xiàn)用藥物中篩選出用于急性缺血性卒中的藥物依達(dá)拉奉,在動物模型中探索其對AD的防治效果。材料與方法第一部分:檢測和比較AD患者(132例)和健康對照者(Healthy Control,HC,120例)中NAbs-Aβ的水平:采用ELISA和Western Blot方法,檢測AD患者和HC血清和腦脊液nabs-aβ的總體水平;采用elisa方法,檢測ad患者和hc血清和腦脊液nabs-aβ的表位;分析不同表位nabs-aβ水平與血液和腦脊液aβ水平、mmse評分以及cdr評分的相關(guān)性。分離不同表位的nabs-aβ:采用親和層析的方法,從靜脈用丙種球蛋白(intravenousimmunoglogulin,ivig)。為從ivig獲得針對不同表位的nabs-aβ,將不同aβ表位肽,通過連接臂化學(xué)橋聯(lián)至凝膠基質(zhì),制成不同aβ表位肽特異性的親和層析柱。對不同表位nabs-aβ進(jìn)行功能鑒定:在表達(dá)appsweps1wt的cho細(xì)胞株培養(yǎng)體系中,觀察不同表位的nabs-aβ對aβ產(chǎn)生的影響;采用tht和電鏡等方法,研究針對不同表位的nabs-aβ對aβ聚集的影響;在sh-sy5y細(xì)胞培養(yǎng)中,采用mtt試驗(yàn)和軸突生長試驗(yàn),檢測不同表位nabs-aβ對aβ神經(jīng)毒性(神經(jīng)元死亡和軸突生長抑制)的拮抗作用;將分離出的不同表位nabs-aβ,給予3月齡app-swepsen1de9轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)注射,觀察nabs-aβ對aβ代謝及神經(jīng)元凋亡的影響。第二部分:aβ單體在37℃孵育成aβ纖維,通過tht、westernblot和tem試驗(yàn)方法,觀察aβ-n端抗體6e10、aβ中段抗體4g8、aβ-c端抗體8g7對aβ纖維的解聚作用,pbs作為陰性對照。mtt試驗(yàn)和軸突生長試驗(yàn)觀察針對不同表位的抗體解聚aβ纖維后對aβ神經(jīng)毒性作用的影響。向3月齡c57雌性小鼠側(cè)腦室注射抗體解聚aβ纖維后的產(chǎn)物,觀察神經(jīng)元凋亡情況。第三部分:腎臟對aβ清除作用的臨床研究。采用elisa方法,檢測慢性腎病(chronickidneydisease,ckd)患者(47例,其中透析31例,未透析16例)和hc(43例)外周血aβ40和aβ42水平。分析外周血aβ水平在透析ckd患者、未透析ckd患者和hc中的差異及其與腎功能的關(guān)系。結(jié)果1:在外周血和腦脊液中,ad患者nabs-aβ總體水平及針對不同表位nabs-aβ水平較正常人顯著降低;外周血和腦脊液中,ad患者針對中段的nabs-aβ比例較hc顯著降低;腦脊液中,ad患者針對n端的nabs-aβ比例較正常人顯著升高;針對所有表位的nabs-aβ均能拮抗aβ的神經(jīng)毒性作用,而針對中段的nabs-aβ對aβ毒性的拮抗作用最強(qiáng);針對中段的nabs-aβ能夠顯著抑制aβ聚集;針對n端的nabs-aβ能夠與神經(jīng)元結(jié)合并促進(jìn)aβ產(chǎn)生;針對n端的nabs-aβ能夠促進(jìn)神經(jīng)元凋亡。2:6e10可促進(jìn)aβ纖維解聚為寡聚體,而4g8、8g7無解聚作用;n端抗體6e10解聚纖維的解聚物具有抑制細(xì)胞軸突生長、促進(jìn)神經(jīng)元死亡的作用;6e10解聚物能夠顯著促進(jìn)小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元凋亡,而4G8、8G7則無此作用。3:未透析CKD患者外周血Aβ40和Aβ42水平較HC顯著升高,而透析CKD患者外周血Aβ40和Aβ42水平較HC無顯著差異;外周血Aβ40和Aβ42水平與腎小球?yàn)V過率呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論1:NAbs-Aβ具有表位相關(guān)的功能異質(zhì)性,即中段NAbs-Aβ能夠顯著抑制Aβ聚集、拮抗Aβ神經(jīng)毒性作用,從而具有神經(jīng)保護(hù)作用;而N端NAbs-Aβ則能夠與神經(jīng)元直接結(jié)合并促進(jìn)Aβ產(chǎn)生,促進(jìn)神經(jīng)元凋亡;AD患者體內(nèi)Aβ自身抗體譜呈現(xiàn)特征性紊亂,即中段的NAbs-Aβ比例相對降低而N端NAbs-Aβ比例相對升高,Aβ自身抗體譜的紊亂可能參與了AD的發(fā)生和發(fā)展,同時具有一定的臨床診斷價值;2:N端Aβ抗體能夠促進(jìn)Aβ纖維解聚為寡聚體,特別是毒性較強(qiáng)的Aβ二聚體和三聚體的產(chǎn)生,從而進(jìn)一步加重Aβ的神經(jīng)毒性作用;此效應(yīng)可能是免疫治療副作用產(chǎn)生的重要機(jī)制之一;因此免疫治療應(yīng)該避免使用針對N端的抗體;3:腎臟對外周Aβ具有清除作用,提示外周器官可能參與了Aβ的代謝;同時,透析能夠有效清除血液Aβ,為Aβ“外周清除”的可行性提供了依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 Aβ 免疫治療 副作用 Aβ自身抗體 外周清除
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-10
• 中文摘要10-13
• 前言13-16
• 第一部分 ABETA自身抗體表位相關(guān)的功能異質(zhì)性及在阿爾茨海默病中的意義16-59
• （一） ABETA自身抗體水平和表位檢測16-31
• 1.1 材料16-20
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)方法20-24
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-31
• （二） 不同表位ABETA自身抗體功能研究31-59
• 2.1 材料31-35
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)方法35-43
• 2.3 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-54
• 2.4 討論54-59
• 第二部分 抗ABETA抗體對ABETA纖維的解聚和神經(jīng)毒性的影響59-75
• 1.1 材料59-62
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)方法62-67
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果67-73
• 1.4 討論73-75
• 第三部分 腎臟對ABETA清除作用的研究75-82
• 1.1 材料75
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)方法75-77
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果77-79
• 1.4 討論79-82
• 全文結(jié)論82-83
• 今后研究方向83-84
• 參考文獻(xiàn)84-94
• 文獻(xiàn)綜述一 Immunotherapy for Alzheimer disease  the challenge of adverse effects94-106
• 參考文獻(xiàn)102-106
• 文獻(xiàn)綜述二 Immunity and Alzheimer’s disease: immunological perspectives in developmentof novel therapies106-131
• 參考文獻(xiàn)118-131
• 攻讀博士學(xué)位期間的研究成果131-133
• 致謝133

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6 記者 李宏策;免疫治療可激活嗜中性粒細(xì)胞治療癌癥[N];科技日報;2013年

7 Ben Hirschler 編譯 儲e，

本文編號：696404