本文關(guān)鍵詞：AD患者血漿長(zhǎng)鏈非編碼RNA BACE1-AS的提取及測(cè)序分析

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【摘要】：2011年,美國(guó)國(guó)家老齡化研究所和阿爾茨海默病學(xué)會(huì)(NIA-AA)發(fā)布AD新的臨床診斷指南,對(duì)阿爾茨海默病癡呆、癡呆前有癥狀階段及臨床前無(wú)癥狀階段分別提出了相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn),強(qiáng)調(diào)研究Aβ作為生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)診斷的重要意義。但目前無(wú)論腦脊液還是PET檢測(cè)Aβ,在臨床常規(guī)開(kāi)展仍存在困難。尋找新的血漿相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物,特別是分子生物學(xué)水平的標(biāo)志物,為AD的早期臨床診斷和治療提供依據(jù)是研究的熱點(diǎn)。近年來(lái),長(zhǎng)鏈非編碼RNA在疾病發(fā)生發(fā)展中的重要性不斷被研究者揭示,研究發(fā)現(xiàn)了一些與AD相關(guān)的lnc RNA,通過(guò)文獻(xiàn)回顧,我們發(fā)現(xiàn)BACE1-AS是其中最重要的發(fā)現(xiàn)。眾所周知,Aβ的異常沉積是AD發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵。而Aβ是由β-淀粉樣前體蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)在β-分泌酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)和γ-分泌酶的先后作用下形成的。BACE1的反義鏈轉(zhuǎn)錄形成的長(zhǎng)鏈非編碼RNA BACE1-AS可與BACE1 m RNA形成雙鏈結(jié)構(gòu)復(fù)合物,避免了BACE1 m RNA被核酸酶降解,增加其穩(wěn)定性,從而導(dǎo)致更多的Aβ沉積在腦組織。然而產(chǎn)生的Aβ又可作為細(xì)胞因子促進(jìn)BACE1-AS的表達(dá)上調(diào),從而實(shí)現(xiàn)了Aβ生成的正反饋調(diào)節(jié)機(jī)制,加速了AD病程的進(jìn)展。有研究表明BACE1-AS在AD患者腦內(nèi)高特異性高轉(zhuǎn)錄,但在患者血漿中的轉(zhuǎn)錄情況尚未見(jiàn)研究報(bào)道。本研究擬應(yīng)用異硫氰酸胍-酚氯仿技術(shù),提取中國(guó)漢族人AD患者血漿中BACE1-AS,通過(guò)測(cè)序分析驗(yàn)證其與國(guó)際報(bào)道序列的一致性,分析該lnc RNA在AD發(fā)生發(fā)展中的作用,為BACE1-AS作為AD治療新靶點(diǎn)及血漿分子標(biāo)志物提供研究基礎(chǔ)。本研究以吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門(mén)診及住院部收治的臨床可能AD患者和健康體檢中心收集的性別、年齡及學(xué)歷等相匹配的健康人為研究對(duì)象,共55例。入組者簽署知情同意書(shū)后,并進(jìn)行了血液樣本的收集。隨后采用異硫氰酸胍-酚氯仿法對(duì)血漿樣本進(jìn)行RNA提取;應(yīng)用Primer Premier5.0軟件設(shè)計(jì)引物;對(duì)提取的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄;對(duì)逆轉(zhuǎn)錄成功的目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增及凝膠電泳成像;基因測(cè)序分析;采用Chromas圖像分析軟件對(duì)比分析測(cè)序序列與genebank序列的一致性;通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析目的基因在兩組間轉(zhuǎn)錄情況的差異。結(jié)果:基因測(cè)序結(jié)果通過(guò)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(National Center of Biotechnology Information,NCBI)中BLAST進(jìn)行比對(duì)后,證實(shí)與目的基因BACE1-AS完全一致。且測(cè)序結(jié)果顯示,AD組中成功提取目的基因5例,達(dá)到18.52%。對(duì)照組成功提取目的基因0例,占0%。兩組比較存在顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:AD患者血漿中存在lnc RNA BACE1-AS,且lnc RNA可以穩(wěn)定存在于血漿中。AD組與對(duì)照組間存在顯著性差異,佐證BACE1-AS與AD密切相關(guān),且其特異性較高。為BACE1-AS作為診斷AD的生物學(xué)標(biāo)志物提供理論依據(jù)。本研究創(chuàng)新點(diǎn):首次對(duì)AD患者血漿中長(zhǎng)鏈非編碼RNA BACE1-AS的轉(zhuǎn)錄情況進(jìn)行檢測(cè),并進(jìn)行了測(cè)序分析,目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 長(zhǎng)鏈非編碼RNA β分泌酶1反義轉(zhuǎn)錄物 血漿 生物學(xué)標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 前言4-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-13
• 英文縮略詞表13-14
• 第1章 引言14-16
• 第2章 文獻(xiàn)綜述16-28
• 2.1 AD的研究簡(jiǎn)介16-20
• 2.1.1 AD的流行病學(xué)及發(fā)病機(jī)制16-18
• 2.1.2 AD的診斷標(biāo)準(zhǔn)18-20
• 2.2 lnc RNA概述20-24
• 2.2.1 lnc RNA的研究發(fā)現(xiàn)及其特性20-21
• 2.2.2 lnc RNA的分類及調(diào)控機(jī)制21-23
• 2.2.3 lnc RNA與神經(jīng)系統(tǒng)23-24
• 2.3 lnc RNA與AD24-27
• 2.3.1 BACE1-AS24-25
• 2.3.2 BC20025
• 2.3.3 ANT-Radl825-26
• 2.3.4 Apo E-ASl26-27
• 2.4 本章小結(jié)27-28
• 第3章 AD患者血漿長(zhǎng)鏈非編碼RNA BACE1-AS的提取及測(cè)序分析28-40
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料28-30
• 3.1.1 阿爾茨海默病的血漿標(biāo)本28-29
• 3.1.2 試劑及來(lái)源29
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)室所需的主要儀器及設(shè)備29-30
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法30-36
• 3.2.1 AD血漿RNA的提取30-31
• 3.2.2 引物的設(shè)計(jì)與合成31-32
• 3.2.3 RNA逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA32-33
• 3.2.4 PCR反應(yīng)33-35
• 3.2.5 PCR產(chǎn)物的電泳35
• 3.2.6 基因測(cè)序35
• 3.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35-36
• 3.3 結(jié)果36-40
• 3.3.1 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果36
• 3.3.2 基因測(cè)序結(jié)果與分析36-38
• 3.3.3 目的基因提取結(jié)果38-40
• 第4章 討論40-44
• 第5章 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 附錄50-54
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：691928