本文關(guān)鍵詞：養(yǎng)血清腦顆粒改善血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能障礙的機(jī)制研究

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【摘要】：目的:近年來,癡呆癥逐漸成為全球的主要威脅之一。血管性癡呆(Vascular dementia,VD)是繼阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)之后第二位最常見的癡呆病因,目前有臨床研究證實(shí)養(yǎng)血清腦顆粒可改善VD患者的認(rèn)知功能,然而,相關(guān)的作用機(jī)制探索中對(duì)神經(jīng)細(xì)胞自噬及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控關(guān)注甚少。本實(shí)驗(yàn)通過干預(yù)雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎制作VD大鼠模型,觀察VD大鼠術(shù)后應(yīng)用養(yǎng)血清腦顆粒治療對(duì)認(rèn)知功能的改善作用,并進(jìn)一步探討其是否與JNK/Bcl-2通路介導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞自噬有關(guān)。方法:3月齡250-300g雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠為研究對(duì)象,采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(bilateral carotid artery ligation,2-VO)的方法建立VD大鼠模型。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4組,即假手術(shù)組(Sham+Saline)、模型組(2VO+Saline)、養(yǎng)血清腦低劑量治療組(2VO+CG0.4)、養(yǎng)血清腦高劑量治療組(2VO+CG0.8),術(shù)后連續(xù)灌胃給藥28天,日一次,假手術(shù)組及模型組給予適量的生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥28天后進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試,包括定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn),觀察各組大鼠空間認(rèn)知能力的變化。水迷宮測(cè)試結(jié)束后,采用尼氏染色觀察各組大鼠海馬組織病理學(xué)變化。丙二醛(Malondialdehyde,MDA)測(cè)試盒及總超氧化物歧化酶(Total superoxide dismutase,T-SOD)測(cè)試盒檢測(cè)各組大鼠海馬組織MDA含量及SOD活性。應(yīng)用Western blot檢測(cè)各組大鼠海馬組織中JNK、p-JNK、p-bcl-2及自噬相關(guān)因子Beclin 1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白的表達(dá),免疫組織化學(xué)方法觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元Beclin 1和p62陽性細(xì)胞數(shù)量的變化。結(jié)果:1水迷宮結(jié)果1.1定位航行實(shí)驗(yàn)各組大鼠的逃避潛伏期(即入水到找到平臺(tái)的時(shí)間)隨訓(xùn)練天數(shù)逐漸縮短。第1天,各組大鼠的逃避潛伏期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),第2至5天,模型組大鼠較假手術(shù)組大鼠的逃避潛伏期明顯延長(P0.01)。與模型組大鼠相比,養(yǎng)血清腦治療組大鼠的逃避潛伏期均明顯縮短(第3天P0.05,其余P0.01)。1.2空間探索實(shí)驗(yàn)與假手術(shù)組大鼠相比,模型組大鼠在目標(biāo)象限(即原平臺(tái)所在象限)停留時(shí)間百分比比值偏低(P0.01),而養(yǎng)血清腦治療組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比較模型組大鼠明顯增加(P0.05),且高劑量治療組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比比值高于低劑量治療組大鼠(P0.05)。2尼氏染色結(jié)果假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整且排列緊密,胞漿清亮,細(xì)胞核清晰可見。與假手術(shù)組大鼠相比,模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列疏松,有缺失現(xiàn)象,部分神經(jīng)元可見胞體及胞核固縮。養(yǎng)血清腦顆粒治療組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元缺失有所減少,仍存在胞核固縮現(xiàn)象。3 MDA含量及SOD活性檢測(cè)結(jié)果與假手術(shù)組大鼠相比,模型組大鼠MDA含量顯著增加(P0.01),養(yǎng)血清腦治療組大鼠較模型組大鼠MDA含量有所下降(P0.01),高劑量治療組大鼠MDA含量低于低劑量治療組(P0.01)。與假手術(shù)組大鼠相比,模型組大鼠SOD活性顯著降低(P0.01),養(yǎng)血清腦治療組大鼠較模型組大鼠SOD的活性有所增高(P0.01),高劑量治療組較低劑量治療組大鼠SOD活性更高(P0.01)。4 Western blot結(jié)果4.1 VD大鼠海馬組織中JNK、p-JNK、p-bcl-2、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表達(dá):與假手術(shù)組大鼠相比,模型組大鼠海馬組織JNK蛋白表達(dá)未見明顯差異,p-JNK、p-bcl-2及Beclin 1蛋白表達(dá)水平明顯增加,LC3-II/I比值升高,p62蛋白表達(dá)顯著下降,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4.2養(yǎng)血清腦顆粒對(duì)VD大鼠海馬組織JNK、p-JNK、p-bcl-2、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的影響:養(yǎng)血清腦治療組大鼠與模型組大鼠相比,JNK蛋白表達(dá)未見明顯差異,p-JNK蛋白表達(dá)水平下降,且p-bcl-2、Beclin 1蛋白表達(dá)明顯減少,LC3-II/I比值下降,p62蛋白表達(dá)顯著增加,高劑量治療組大鼠較低劑量治療組大鼠變化更明顯(P0.01)。5免疫組織化學(xué)結(jié)果5.1 Beclin 1陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果:Beclin 1陽性細(xì)胞呈棕黃色,于細(xì)胞漿表達(dá)。與假手術(shù)組大鼠相比,模型組大鼠海馬CA1區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.01),養(yǎng)血清腦治療組大鼠較模型組大鼠海馬CA1區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)減少(P0.01)。5.2 p62陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果:p62陽性細(xì)胞呈棕黃色,于細(xì)胞漿表達(dá)。與假手術(shù)組大鼠相比,模型組大鼠海馬CA1區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)明顯偏少(P0.01),養(yǎng)血清腦顆粒治療組大鼠較模型組大鼠海馬CA1區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)增多(P0.05)。結(jié)論:養(yǎng)血清腦顆�？梢宰鳛榭寡趸瘎p輕VD大鼠海馬區(qū)氧化損傷,改善慢性腦灌注不足所致的認(rèn)知功能障礙。細(xì)胞自噬過度激活在VD發(fā)病過程中起重要作用。養(yǎng)血清腦顆�？梢愿纳芕D大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶損害及海馬區(qū)病理損傷,通過調(diào)控JNK/Bcl-2通路抑制海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬可能是其作用機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：血管性癡呆 認(rèn)知功能障礙 慢性腦供血不足 養(yǎng)血清腦顆粒 自噬 JNK/Bcl-2通路
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.13
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫12-13
• 引言13-15
• 第一部分 養(yǎng)血清腦顆粒對(duì)血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能的影響15-27
• 前言15-16
• 材料與方法16-19
• 結(jié)果19-20
• 附圖20-22
• 附表22-23
• 討論23-24
• 小結(jié)24-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二部分 養(yǎng)血清腦顆粒在血管性癡呆大鼠海馬組織氧化應(yīng)激損傷中的作用27-44
• 前言27-28
• 材料與方法28-34
• 結(jié)果34-35
• 附圖35-37
• 附表37-38
• 討論38-40
• 小結(jié)40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 第三部分 血管性癡呆大鼠海馬組織自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)及養(yǎng)血清腦顆粒的影響44-67
• 前言44-45
• 材料與方法45-53
• 結(jié)果53-54
• 附圖54-59
• 附表59-60
• 討論60-63
• 小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 結(jié)論67-68
• 綜述 認(rèn)知功能障礙相關(guān)的自噬信號(hào)及其轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究68-77
• 參考文獻(xiàn)73-77
• 致謝77-78
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷78

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：649668