本文關鍵詞：CMKLR1是β淀粉樣蛋白的功能性受體

  更多相關文章： 阿爾茨海默病 趨化因子樣受體（CMKLR1） 小膠質(zhì)細胞 星型膠質(zhì)細胞 趨化遷移 內(nèi)吞

【摘要】：β-淀粉樣蛋白(Aβ)通過神經(jīng)毒性作用，激活小膠質(zhì)細胞或星型膠質(zhì)細胞內(nèi)吞及釋放各種炎癥調(diào)節(jié)因子，在阿爾茨海默病(Alzheimer’sDisease, AD)的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，AD病人及外周注射LPS的小鼠腦內(nèi)，CMKLR1受體表達明顯上調(diào)；APP/PS1AD模型小鼠腦內(nèi), Aβ與CMKLR1受體共表達；Aβ能與CMKLR1發(fā)生特異性結(jié)合；Aβ能誘導原代小膠質(zhì)細胞,N9細胞及CMKLR1-RBL穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株遷移；應用ERK及Akt信號通路抑制劑PD98059，LY294002后,Aβ誘導的細胞遷移作用被顯著抑制（*p=0.0015,0.0036），但Ca2+信號通路阻斷劑U73122卻不影響Aβ誘導的遷移（*p=0.506）。此外，，Aβ能引起原代膠質(zhì)細胞及CMKLR-RBL穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株CMKLR1受體發(fā)生內(nèi)吞。 上述研究結(jié)果表明CMKLR1是Aβ的功能性受體，通過介導非依賴鈣流的MAPK和PKA等信號通路，調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞的運動，而且這種調(diào)控作用可能與Aβ誘導的CMKLR1受體內(nèi)吞有關。本論文首次發(fā)現(xiàn)CMKLR1是Aβ的功能性受體，為今后阿爾茨海默病的發(fā)病機制研究提供了一定的理論依據(jù)，為疾病的治療提供了新靶點。
【關鍵詞】：阿爾茨海默病 趨化因子樣受體（CMKLR1） 小膠質(zhì)細胞 星型膠質(zhì)細胞 趨化遷移 內(nèi)吞
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 目錄5-8
• 符號說明8-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 第一章 緒論13-19
• 1 阿爾茨海默病（AD）13-16
• 1.1 阿爾茨海默病(AD)研究現(xiàn)狀13
• 1.2 阿爾茨海默病(AD)病理特征及發(fā)病機制13-14
• 1.3 β淀粉樣蛋白14-15
• 1.4 β淀粉樣蛋白的受體15-16
• 2 趨化因子樣受體 1(CHEMOKINE-LIKE RECEPTOR1)16-17
• 2.1 Chemokine-like receptor 1 (CMKLR1)結(jié)構(gòu)與分布16
• 2.2 Chemokine-like receptor 1 (CMKLR1)功能16-17
• 2.3 Chemokine-like receptor 1 (CMKLR1)腦內(nèi)研究現(xiàn)狀17
• 3 選題意義和研究內(nèi)容17-19
• 3.1 選題意義17-18
• 3.2 研究內(nèi)容18-19
• 第二章 CMKLR1 受體表達與 AD 相關19-28
• 1 材料和儀器19-20
• 1.1 原料與試劑19-20
• 1.2 儀器和設備20
• 1.3 溶液配制20
• 2 實驗方法20-24
• 2.1 原代小膠質(zhì)細胞，N9 細胞系內(nèi) mRNA 的提取擴增與反轉(zhuǎn)錄21-22
• 2.2 小鼠腦內(nèi)炎癥模型的構(gòu)建及皮層與海馬 RNA 的提取，擴增22-23
• 2.3 APP/PS1 小鼠海馬，皮層大腦切片制備23
• 2.4 小鼠腦切片免疫熒光染色23-24
• 2.5 基因芯片數(shù)據(jù)分析24
• 3 實驗結(jié)果24-27
• 3.1 原代小膠質(zhì)細胞，N9 細胞株內(nèi) CMKLR1 受體有表達24
• 3.2 系統(tǒng)性注射 LPS 后，小鼠腦內(nèi) CMKLR1 表達量上調(diào)24-26
• 3.3 阿爾茨海默病人腦內(nèi)，CMKLR1 受體表達量上調(diào)26
• 3.4 APP/PS1 小鼠中，CMKLR1 與 Aβ老年斑塊共表達26-27
• 4 討論27
• 5 小結(jié)27-28
• 第三章 CMKLR1 是 Aβ的一種功能性受體28-43
• 1 材料和儀器29-30
• 1.1 儀器和設備29
• 1.2 材料和試劑29
• 1.3 緩沖液，培養(yǎng)基，染液配置配制29-30
• 1.4 細胞30
• 2 實驗方法30-35
• 2.1 CMKLR1 與 Aβ的結(jié)合實驗30-32
• 2.2 Aβ誘導的趨化遷移實驗32-34
• 2.3 鈣流實驗34-35
• 3.實驗結(jié)果35-41
• 3.1 Aβ能夠特異性地與 CMKLR1 受體相結(jié)合35-37
• 3.2 Aβ通過CMKLR1 受體誘導原代小膠質(zhì)細胞，N9細胞，CMKLR1/RBL細胞遷移37-40
• 3.3 Aβ通過 CMKLR1 受體對鈣流的影響40-41
• 4 討論41
• 5 小結(jié)41-43
• 第四章 Aβ通過 CMKLR1 受體引起小膠質(zhì)細胞遷移的信號通路43-61
• 1 材料和儀器44-46
• 1.1 儀器和設備44
• 1.2 材料和試劑44-45
• 1.3 溶液配制45-46
• 1.4 細胞46
• 2 實驗方法46-53
• 2.1 不同的信號通路抑制劑對 Aβ誘導的趨化遷移作用的影響46-49
• 2.2 Aβ作用 CMKLR1 受體后，信號通路中各種激酶磷酸化變化的水平49-53
• 3 實驗結(jié)果53-59
• 3.1 鈣流信號通路阻斷劑 PLC 抑制劑 U73122 與 PKC 抑制劑 SC-24003 不能抑制 Aβ誘導的遷移53-56
• 3.2 Aβ通過 CMKLR1 受體誘導趨化遷移，激活的信號通路56-59
• 4 討論59-60
• 4.1 Aβ作用于 CMKLR1 受體后，誘導細胞遷移，激活的下游的信號通路獨立于鈣流信號通路59
• 4.2 Aβ作用 CMKLR1 受體誘導遷移，激活的下游的信號通路59-60
• 5 小結(jié)60-61
• 第五章 Aβ引起 CMKLR1 受體內(nèi)吞61-72
• 1.實驗材料62-63
• 1.1 儀器和設備62
• 1.2 材料和試劑62
• 1.3 實驗動物與細胞62-63
• 1.4 溶液配制63
• 2 實驗方法63-66
• 2.1 細胞的制備63-64
• 2.2 免疫熒光共沉淀64-65
• 2.3 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)65-66
• 3 實驗結(jié)果66-71
• 3.1 Aβ誘導 CMKLR/RBL 細胞 CMKLR1 內(nèi)吞66
• 3.2 原代小膠質(zhì)細胞中 Aβ通過 CMKLR1 受體內(nèi)吞66-68
• 3.3 原代星型膠質(zhì)細胞中 Aβ通過 CMKLR1 受體內(nèi)吞68-70
• 3.4 Aβ作用于 CMKLR1 受體，能夠引起β-arrestin2 上膜70-71
• 4 討論71
• 4.1 Aβ能夠引起 CMKLR1 受體內(nèi)吞71
• 4.2 Aβ通過作用于原代小膠質(zhì)細胞和星型膠質(zhì)細胞上的 CMKLR1 受體，能夠被吞噬進入細胞71
• 4.3 Aβ作用 CMKLR1 受體，誘導β-arrestin 上膜，激活下游信號通路，引起趨化遷移，受體內(nèi)吞等生物學功能71
• 5 小結(jié)71-72
• 第六章 總結(jié)與展望72-74
• 1 總結(jié)72-73
• 1.1 CMKLR1 受體與阿爾茨海默疾病及腦內(nèi)炎癥有關72
• 1.2 CMKLR1 受體是 Aβ的受體，Aβ能夠通過 CMKLR1 受體誘導原代小膠質(zhì)細胞，N9 細胞發(fā)生趨化72
• 1.3 Aβ通過 CMKLR1 受體誘導趨化遷移的信號通路72
• 1.4 Aβ通過 CMKLR1 受體被吞噬進入細胞72-73
• 2 展望73-74
• 參考文獻74-79
• 致謝79-80
• 攻讀碩士期間主要研究成果80-81
• 基金資助項目81-82
• 附件82

【共引文獻】

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本文編號：571391