本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)期酒精暴露戒斷后大鼠不同腦區(qū)突觸形態(tài)結(jié)構(gòu)及突觸蛋白表達(dá)的變化

  更多相關(guān)文章： 酒精依賴 突觸 樹突棘 細(xì)胞骨架蛋白 CDK5

【摘要】：背景 越來越多的證據(jù)表明,突觸可塑性機(jī)制廣泛參與了酒精依賴的發(fā)生發(fā)展。長(zhǎng)期酒精使用導(dǎo)致了突觸的形態(tài)結(jié)構(gòu)可塑性變化,這種結(jié)構(gòu)的改變可能代表了神經(jīng)元回路的長(zhǎng)時(shí)程適應(yīng)性變化。然而直接對(duì)酒精引起的突觸結(jié)構(gòu)可塑性變化及其分子機(jī)制的研究仍然不多。本研究擬觀察長(zhǎng)期酒精暴露和戒斷不同時(shí)段大鼠不同腦區(qū)突觸超微結(jié)構(gòu)和樹突棘長(zhǎng)度、密度的變化,以及相關(guān)突觸調(diào)節(jié)蛋白如肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白cofilin、磷酸化cofilin(p-cofilin)、CDK5的表達(dá)變化,探討酒精依賴相關(guān)的突觸形態(tài)結(jié)構(gòu)可塑性改變及其可能的分子生物學(xué)機(jī)制。 目的 1.建立慢性酒精暴露的大鼠模型,觀察長(zhǎng)期酒精暴露和戒斷過程中大鼠的行為學(xué)變化。 2.觀察慢性酒精暴露和戒斷不同時(shí)段大鼠成癮相關(guān)腦區(qū)(前額皮質(zhì)和海馬)神經(jīng)元突觸和樹突棘的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。 3.研究慢性酒精暴露和戒斷不同時(shí)段大鼠相關(guān)腦區(qū)突觸調(diào)節(jié)蛋白cofilin、 p-cofilin、CDK5的表達(dá)變化。 4.分析這些關(guān)鍵分子的特異性變化與形態(tài)結(jié)構(gòu)改變的聯(lián)系,探討慢性酒精暴露導(dǎo)致大鼠行為學(xué)變化的神經(jīng)可塑性機(jī)制。 方法 1.雄性SD大鼠80只,隨機(jī)等分為一個(gè)1個(gè)對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組。給實(shí)驗(yàn)組大鼠自由飲含低濃度乙醇(體積分?jǐn)?shù)為6%)的水溶液2月,對(duì)照組大鼠正常飲自來水2月。 2.撤除酒精并進(jìn)行戒斷癥狀評(píng)分,根據(jù)評(píng)分結(jié)果分別在酒精戒斷0h、戒斷6h和戒斷2d處死大鼠取腦組織制備樣品。 3.采用透射電子顯微鏡觀察各組大鼠相關(guān)腦區(qū)神經(jīng)元突觸的界面結(jié)構(gòu)參數(shù)。 4.采用Golgi染色法觀察各組大鼠不同腦區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度和長(zhǎng)度的變化。 5.采用免疫組織化學(xué)和western blot方法分別檢測(cè)各組大鼠不同腦區(qū)突觸蛋白cofilin、p-cofilin (ser3)以及CDK5的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果 1.行為學(xué)結(jié)果。 本實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)大鼠平均每天飲用6%酒精水溶液149.3ml/kg體重,相當(dāng)于攝入純酒精7.2gPkg體重,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中每天的飲酒量變化不大。實(shí)驗(yàn)前對(duì)照組大鼠體重(184.5±17.99)g與飲酒組大鼠體重(185.7±16.76)g比較無顯著差異(P=0.87)。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),飲酒組大鼠體重(452.5±39.26)g與對(duì)照組大鼠體重(447.9±36.85)g相比較無顯著差異(P=0.77)。 大鼠在飲酒期間較為溫順,不易激惹,攻擊性行為較少；酒精撤除后,大鼠出現(xiàn)理毛、打噴嚏、易激惹、尾巴強(qiáng)直、低頭拱背、聽源性癲癇發(fā)作強(qiáng)度增加。其酒精戒斷癥狀評(píng)分在戒斷后2-48h時(shí)均顯著高于對(duì)照組大鼠,其中在6h達(dá)到最高(13.60±1.51)。 2.突觸界面結(jié)構(gòu)參數(shù)。 在大鼠前額皮質(zhì),戒斷0h組、戒斷6h組、戒斷2d組突觸活性區(qū)長(zhǎng)度分別為(223.70±18.43) nm、(217.87±17.57) nm和(229.08±14.97)nm,與對(duì)照組突觸活性區(qū)長(zhǎng)度(331.66±13.15)nm相比均減小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。戒斷Oh組、戒斷2d組突觸致密物厚度分別為(46.44±6.93)nm和(46.08±6.05)nm,與對(duì)照組突觸致密物厚度(57.24±6.06)nm相比均顯著減小(P0.05)；戒斷6h組突觸致密物厚度(44.68±6.34)nm與對(duì)照組相比顯著減小(P0.01)。突觸間隙寬度和突觸界面曲率在各組之間均無顯著差異(P0.05)。 在大鼠海馬,戒斷0h組、戒斷2d組突觸活性區(qū)長(zhǎng)度分別為(269.16±28.25)nm和(270.42±28.77)nm,與對(duì)照組突觸活性區(qū)長(zhǎng)度(313.90±32.53)nm相比均減小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；戒斷6h組突觸活性區(qū)長(zhǎng)度為(257.76±27.46)nm,與對(duì)照組突觸活性區(qū)長(zhǎng)度相比顯著減小(P0.01)。戒斷0h組、戒斷6h組突觸致密物厚度分別為(56.20±10.88)nm和(54.38±10.70)nm,與對(duì)照組突觸致密物厚度(72.92±12.89)nm相比均顯著減小(P0.05)；戒斷2d組突觸致密物厚度(58.04±10.63)nm與對(duì)照組相比無顯著差異(PO.05)。突觸間隙寬度和突觸界面曲率在各組之間均無顯著差異(P0.05)。 3.樹突棘的密度和長(zhǎng)度。 在大鼠前額皮質(zhì),戒斷Oh組樹突棘密度(0.974±0.084)/μm較對(duì)照組樹突棘密度(0.933±0.089)/μm顯著增加(P0.05)；戒斷6h組樹突棘密度(0.987±0.082)/μm較對(duì)照組樹突棘密度顯著增加(P0.01)；戒斷2d組樹突棘密度(0.956±0.081)/μm較對(duì)照組樹突棘密度無顯著差異(P0.05)。戒斷0h、戒斷6h、戒斷2d組樹突棘平均長(zhǎng)度分別為(1.427±0.142)μm、(1.482±0.150)μm和(1.471±0.152)μm,較對(duì)照組樹突棘平均長(zhǎng)度(1.276±0.113)μm相比均顯著增加(P(0.01)。 在大鼠海馬,戒斷Oh、戒斷6h、戒斷2d組樹突棘密度分別為(0.919±0.098)/μm、(0.922±0.082)/μm和(0.914±0.093)/μm,較對(duì)照組樹突棘密度(0.906±0.101)/μm相比均無顯著差異(P0.05)。戒斷Oh、戒斷6h、戒斷2d組樹突棘平均長(zhǎng)度分別為(1.362±0.149)μm、(1.398±0.147)μm和(1.387±0.142)μm,較對(duì)照組樹突棘平均長(zhǎng)度(1.273±0.130)μm相比均顯著增加(P0.01)。 4.蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果。 在大鼠前額皮質(zhì),戒斷Oh組cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低(P0.01),戒斷6h組cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高(P0.01),戒斷2d組cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組無顯著變化。戒斷0h、戒斷2d組p-cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組無顯著變化,戒斷6h組p-cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高(P0.01)。戒斷Oh組cdk5表達(dá)水平較對(duì)照組無顯著變化,戒斷6h、戒斷2d組cdk5表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高(P0.01)。 在大鼠海馬,戒斷0h組cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低(P0.01),戒斷6h、戒斷2d組cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組無顯著變化。戒斷0h組p-cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高(P0.05),戒斷6h組p-cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組無顯著變化,戒斷2d組p-cofilin表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低(P0.01)。戒斷Oh、戒斷6h、戒斷2d組cdk5表達(dá)水平較對(duì)照組均顯著升高(P0.01)。 結(jié)論 1.長(zhǎng)期酒精暴露和戒斷導(dǎo)致大鼠前額皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元突觸活性區(qū)長(zhǎng)度與突觸致密物厚度的下降,而在戒斷各個(gè)時(shí)間點(diǎn)無相應(yīng)變化。 2.長(zhǎng)期酒精暴露和戒斷導(dǎo)致大鼠前額皮質(zhì)樹突棘密度和樹突棘長(zhǎng)度增加,導(dǎo)致大鼠海馬區(qū)樹突棘長(zhǎng)度增加。 3.長(zhǎng)期酒精暴露和戒斷改變了大鼠前額皮質(zhì)和海馬區(qū)相關(guān)突觸蛋白如肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白cofilin、p-cofilin以及CDK5的表達(dá)。 4.長(zhǎng)期酒精作用可能通過改變相關(guān)突觸蛋白的表達(dá)引起突觸和樹突棘的形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,進(jìn)而影響了相關(guān)行為學(xué)反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：酒精依賴 突觸 樹突棘 細(xì)胞骨架蛋白 CDK5
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.62
【目錄】：

• 摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-19
• 材料和方法19-24
• 結(jié)果24-46
• 討論46-50
• 小結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 綜述57-69
• 參考文獻(xiàn)65-69
• 中英文詞匯對(duì)照表69-70
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況70-71
• 致謝71-72
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭家松,尹保國(guó),李振林,沈宏友,歐洋;電鏡定量分析酒精對(duì)小鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)的影響[J];第一軍醫(yī)大學(xué)分校學(xué)報(bào);2000年02期

2 郝偉,張瑞嶺,諶紅獻(xiàn),向小軍,岳偉華,姜美俊;嗎啡依賴的神經(jīng)可塑性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).精神病學(xué)分冊(cè);2003年02期

3 蔣利和;劉景根;;藥物成癮中的神經(jīng)細(xì)胞骨架[J];生命的化學(xué);2011年05期

4 李燕斐;陳勤;;藥物濫用與神經(jīng)元結(jié)構(gòu)可塑性改變的關(guān)系[J];生命的化學(xué);2007年05期

5 麻耀穎;崔彩蓮;;藥物成癮與中樞結(jié)構(gòu)重塑[J];中國(guó)藥物依賴性雜志;2006年06期

6 李菁;袁孝如;李躍華;崔勝忠;周蓉;;酒精依賴大鼠模型建立[J];中國(guó)藥物依賴性雜志;2006年06期

7 宋美;翟海峰;王學(xué)義;陸林;;酒精條件性位置偏愛效應(yīng)及其影響因素[J];中國(guó)藥物依賴性雜志;2007年05期

8 高家林;田艷;羅素元;;突觸可塑性與藥物成癮[J];中國(guó)藥物依賴性雜志;2008年01期

9 崔占軍;趙凱冰;文曙光;張俊士;于東明;鄧錦波;;孕期酒精暴露對(duì)小鼠視皮質(zhì)神經(jīng)元樹突棘和突觸的影響[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2010年07期

10 李培培;張麗麗;李敏;;Cdk5在突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶中的作用[J];中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志;2009年03期

，

本文編號(hào)：570675