本文關(guān)鍵詞：腦部微環(huán)境與MicroRNA-107的關(guān)系及化合物HX24促突起生長(zhǎng)作用研究

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【摘要】：第一部分腦部微環(huán)境與Micro RNA-107的關(guān)系阿爾茲海默病(Alzheimer′s Disease,AD)是一種神經(jīng)退行性疾病,是老年人中最常見(jiàn)的癡呆病癥。阿爾茲海默病已經(jīng)成為繼心臟病、腫瘤、中風(fēng)之后,老年人的第四大死亡病因。雖然到目前為止AD的發(fā)病機(jī)理還不是很清楚,但β淀粉樣蛋白Aβ聚集沉積在AD病理過(guò)程中起關(guān)鍵作用已較為明確。Aβ是由淀粉樣前體蛋白(APP)經(jīng)β分泌酶(BACE1)和γ分泌酶催化衍生而來(lái),其中BACE1是這一生物過(guò)程的限速酶,提示BACE1的調(diào)控機(jī)制可能與AD的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)。微小RNA(mi RNA)是一類非編碼小分子,由約22個(gè)內(nèi)源性單鏈核苷酸組成,是在動(dòng)物和植物的保守進(jìn)化過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的一類基因調(diào)節(jié)分子。已有研究提示,mi R-107是能調(diào)控BACE1表達(dá)水平的mi RNA,本課題的前期臨床樣本研究中,發(fā)現(xiàn)mi R-107在輕度認(rèn)知功能障礙(MCI)和AD患者中明顯低于非癡呆型患者,提示mi R-107與AD患者早期腦內(nèi)BACE1增加及Aβ生成增加密切相關(guān)。值得關(guān)注的是,年齡是阿爾茲海默病最直接的一個(gè)患病標(biāo)準(zhǔn),而老年人的重要腦部特征體現(xiàn)為對(duì)腦部微環(huán)境改變的調(diào)節(jié)能力下降,具體表現(xiàn)為輕度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、輕度氧化應(yīng)激、炎癥、缺氧和葡萄糖缺乏。本課題擬研究腦部微環(huán)境變化是否會(huì)通過(guò)影響mi R-107的表達(dá)來(lái)增加BACE1的表達(dá),旨在揭示影響mi R-107的病理?xiàng)l件,加深對(duì)AD發(fā)生發(fā)展的認(rèn)識(shí)。我們?cè)诩?xì)胞水平上模擬腦部微環(huán)境的病理狀態(tài),采用蛋白免疫印跡方法發(fā)現(xiàn),輕度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥條件能明顯增加BACE1蛋白的表達(dá),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,從m RNA水平上得到與蛋白水平一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。我們想知道m(xù)i R-107是否會(huì)在這一過(guò)程中起到作用,所以首先采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)mi R-107的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),輕度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥條件下mi R-107均沒(méi)變化。在輕度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激條件下,進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染mi R-107類似物和抑制劑,進(jìn)一步證實(shí)mi R-107在BACE1的上調(diào)過(guò)程中沒(méi)起到調(diào)節(jié)作用。上述結(jié)果提示腦部微環(huán)境的改變可以影響B(tài)ACE1的表達(dá),但作用機(jī)制可能與mi R-107的表達(dá)變化無(wú)關(guān)。第二部分化合物HX24促突起生長(zhǎng)作用研究神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)是一種對(duì)神經(jīng)細(xì)胞起營(yíng)養(yǎng)作用的多肽分子,對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、遞質(zhì)的合成及細(xì)胞的凋亡、軸突的生長(zhǎng)等生命活動(dòng)起著重要作用。它與包括阿爾茲海默病在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),且無(wú)論是它本身水平的改變或者是它的受體水平或功能的改變都對(duì)這類疾病的病理生理學(xué)功能具有重要影響。已有多項(xiàng)研究表明,NGF對(duì)阿爾茲海默病具有潛在治療作用。但是作為藥物制劑,NGF的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)差,分子量較大,半衰期短,不穩(wěn)定,不易跨越血腦屏障,較高的價(jià)格等弱點(diǎn),使NGF很難大規(guī)模應(yīng)用于臨床治療。因此,人們需要尋找具有類似NGF生物活性的,藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)高,副作用少的小分子化合物作為解決這一難題的有效途徑。為了尋找具有促神經(jīng)分化活性的小分子,本課題以大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC12(rat pheochromocytoma cells)作為研究模型,在細(xì)胞形態(tài)觀察的基礎(chǔ)上,對(duì)12個(gè)小分子化合物進(jìn)行了活性篩選,選擇效果較好的化合物HX24作為研究對(duì)象,采用Western blot等實(shí)驗(yàn)方法對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了研究。初步確定化合物HX24是通過(guò)MEK-ERK1/2-CREB這條信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)PC12細(xì)胞突起生長(zhǎng),為HX24作為類神經(jīng)生長(zhǎng)因子作用的候選藥物提供了部分依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茲海默病 miR-107 BACE1 腦部微環(huán)境HX24 阿爾茲海默病 PC12 突起
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第一部分 腦部微環(huán)境與Micro RNA-107的關(guān)系11-45
• 第1章 引言11-15
• 1.1 研究背景11-14
• 1.2 本課題的研究?jī)?nèi)容及意義14-15
• 第2章 前期臨床結(jié)果15-21
• 2.1 前言15
• 2.2 材料與方法15-19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-21
• 第3章 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與Micro RNA107的關(guān)系21-32
• 3.1 前言21
• 3.2 材料與方法21-29
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-32
• 第4章 氧化應(yīng)激與Micro RNA107的關(guān)系32-35
• 4.1 前言32
• 4.2 材料與方法32-33
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-35
• 第5章 炎癥、缺氧和缺糖與Micro RNA107的關(guān)系35-39
• 5.1 前言35
• 5.2 材料與方法35
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-39
• 第6章 Mi RNA芯片結(jié)果確認(rèn)39-41
• 6.1 前言39
• 6.2 材料與方法39
• 6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-41
• 第7章 結(jié)論與展望41-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 第二部分 化合物HX24促突起生長(zhǎng)作用研究45-67
• 第8章 引言45-47
• 8.1 研究背景45-46
• 8.2 本課題的研究?jī)?nèi)容與意義46-47
• 第9章 類神經(jīng)生長(zhǎng)因子作用的化合物篩選47-57
• 9.1 前言47
• 9.2 材料與方法47-50
• 9.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-57
• 第10章 化合物HX24促突起生長(zhǎng)作用機(jī)制研究57-64
• 10.1 前言57-58
• 10.2 材料與方法58-59
• 10.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-64
• 第11章 結(jié)論與展望64-65
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 致謝67-69
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果69-70
• 綜述70-78
• 參考文獻(xiàn)75-78

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3 孫一_，

本文編號(hào)：556574