本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)期飲酒對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶的影響及突觸損傷機(jī)制探討

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【摘要】：目的：當(dāng)今社會(huì)越來(lái)越多的青少年過(guò)早的接觸酒精類(lèi)飲料，然而大量飲酒引起的抑制控制障礙會(huì)促使年輕人過(guò)度飲酒。過(guò)度飲酒不僅造成嚴(yán)重的社會(huì)危害如酒駕導(dǎo)致的交通事故、酒后尋恤滋事等，還會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生多種危害如對(duì)神經(jīng)、循環(huán)、消化系統(tǒng)有著嚴(yán)重的損害。乙醇是各種酒精類(lèi)飲料的主要成分，具有脂溶性和水溶性的雙向特征，可以迅速通過(guò)血腦屏障，對(duì)大腦的結(jié)構(gòu)和功能造成影響。海馬區(qū)神經(jīng)元主要在與環(huán)境相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶中發(fā)揮作用。因此當(dāng)乙醇對(duì)海馬區(qū)神經(jīng)元造成損傷時(shí)勢(shì)必引起認(rèn)知和學(xué)習(xí)記憶的損害。 學(xué)習(xí)記憶功能的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)是突觸可塑性。突觸素（Syn）是與突觸結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)的鈣結(jié)合蛋白，在神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成后主要轉(zhuǎn)運(yùn)至軸突末梢，分布于突觸前囊泡膜上，調(diào)節(jié)鈣依賴(lài)型神經(jīng)遞質(zhì)釋放。Syn是突觸前膜特異性蛋白，是被廣泛用于觀察空間學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43（GAP43）是一種突觸前膜蛋白，參與神經(jīng)細(xì)胞外生長(zhǎng)及突觸發(fā)育形成，能調(diào)解軸突延伸作用改變細(xì)胞形態(tài)。正常情況下GAP43呈低水平表達(dá)，在神經(jīng)元發(fā)育和損傷等情況下表達(dá)升高。突觸后致密物質(zhì)95（PSD95）是突觸后膜骨架蛋白及突觸后致密物質(zhì)的主要的成分，有高度的穩(wěn)定性。PSD95的不同結(jié)構(gòu)域可以構(gòu)成穩(wěn)定的晶格，受刺激后使不同的蛋白進(jìn)入晶格，介導(dǎo)了蛋白之間的相互作用和蛋白的重新分布，從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)信號(hào)的應(yīng)答。這三種蛋白在突觸可塑性方面發(fā)揮著重要作用。Caspases3蛋白酶又稱(chēng)死亡蛋白酶，是細(xì)胞發(fā)生凋亡過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白酶，一旦被激活，細(xì)胞凋亡則不可避免的發(fā)生。過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite, ONOO-）可作為強(qiáng)氧化劑或蛋白質(zhì)硝化劑，造成許多重要的生物大分子結(jié)構(gòu)修飾或功能障礙。其中蛋白質(zhì)酪氨酸殘基可被ONOO-硝化，形成3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine,3-NT），因此，3-NT常被作為體內(nèi)ONOO-生成的生物標(biāo)志物。Caspases3和ONOO-參與神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡和壞死。目前，長(zhǎng)期飲酒是否通過(guò)調(diào)節(jié)上述蛋白的表達(dá)參與大鼠海馬的神經(jīng)元損傷和突觸可塑性的改變，進(jìn)而影響空間學(xué)習(xí)和記憶尚不完全明確。 因此本實(shí)驗(yàn)在建立長(zhǎng)期大量飲酒大鼠模型基礎(chǔ)上，觀察了動(dòng)物在水迷宮中的空間參考和學(xué)習(xí)行為，并且檢測(cè)了大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)以及相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，以期明確長(zhǎng)期酒精作用對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶的影響及其可能的突觸重塑機(jī)制。 方法： ①大鼠長(zhǎng)期大量飲酒模型的建立：健康雄性Sprague Dawley（SD）大鼠，鼠齡6周。隨機(jī)分為正常組10只與長(zhǎng)期飲酒組25只，每籠2-3只，分籠飼養(yǎng)。用市售北京紅星二鍋頭（56%v/v）制備模型。適用喂養(yǎng)一周后開(kāi)始造模。長(zhǎng)期飲酒組初次給予含5%乙醇的水溶液，每?jī)芍軡舛忍荻仍黾右淮危来螢?0%、15%，至終濃度為20%，，之后繼續(xù)自由飲酒10個(gè)月；正常對(duì)照組每日給予等量的飲用水.②應(yīng)用Morris水迷宮檢測(cè)長(zhǎng)期飲酒對(duì)大鼠空間參考記憶和學(xué)習(xí)能力的影響。③硫堇染色法觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。④分別應(yīng)用免疫組化和Western blot技術(shù)檢測(cè)海馬區(qū)相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1大鼠基本情況及體重變化 慢性飲酒大鼠進(jìn)食量減少，倦怠少動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，毛色干枯。與對(duì)照組相比體重降低，有顯著性差異（P＜0.01）。 2行為學(xué)觀察 長(zhǎng)期飲酒大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)和定向航行實(shí)驗(yàn)中成績(jī)均降低，有顯著性差異（P＜0.01）。 3海馬CA1區(qū)硫堇染色觀察 對(duì)照組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則，形態(tài)正常。長(zhǎng)期飲酒后大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞排列不規(guī)則，數(shù)目減少，部分細(xì)胞核固縮變性。 4海馬區(qū)Syn、GAP43、PSD95、Caspases3、3-NT蛋白表達(dá) 免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)對(duì)照組和長(zhǎng)期飲酒大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元均可見(jiàn)Syn、PSD95蛋白棕黃色陽(yáng)性表達(dá)物，長(zhǎng)期飲酒大鼠海馬CA1區(qū)Syn蛋白呈強(qiáng)陽(yáng)性染色、PSD95呈弱陽(yáng)性染色。Western Blot檢測(cè)蛋白水平發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期飲酒大鼠海馬區(qū)Syn蛋白表達(dá)增加，GAP43蛋白表達(dá)增加，PSD95蛋白表達(dá)減少， Caspases3蛋白表達(dá)增加，3-NT蛋白表達(dá)增加，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P＜0.001）。 結(jié)論： ①長(zhǎng)期飲酒明顯損害大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶。②長(zhǎng)期飲酒可通過(guò)誘導(dǎo)ONOO-和Caspases3的表達(dá)增高，導(dǎo)致海馬神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生凋亡和壞死。③突觸前膜Syn、 GAP43表達(dá)增加，考慮為神經(jīng)元細(xì)胞損傷后突觸重塑的代償性機(jī)制。長(zhǎng)期飲酒下調(diào)了海馬區(qū)突觸后膜PSD95的表達(dá)，影響了突觸后可塑性。
【關(guān)鍵詞】：飲酒 海馬 水迷宮 Syn GAP43 PSD95 突觸可塑性
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R749.62
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫(xiě)10-11
• 前言11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-35
• 附表35-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述45-61
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 致謝61-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 黃海玲;李建民;趙亞寧;;參芎化瘀膠囊對(duì)大鼠全腦缺血再灌注損傷及其海馬CA1區(qū)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43表達(dá)的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2014年02期

2 劉丹,李昌琪,伍校瓊,盧大華,羅學(xué)港;慢性酒精刺激對(duì)大鼠海馬突觸素ⅠmRNA表達(dá)的影響(英文)[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2003年24期

3 徐鐵軍,樊紅彬,張鳳真,彭裕文;前腦缺血再灌流后大鼠海馬NMDA受體亞單位NR2A和NR2B蛋白質(zhì)表達(dá)的變化[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2002年02期

本文編號(hào)：548766