本文關(guān)鍵詞：Repetin與精神分裂癥關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Repetin(RPTN)屬于S100鈣結(jié)合蛋白家族,N端有兩個(gè)能與Ca2+可逆結(jié)合的EF手型(E helix-calcium-binding loop-F)結(jié)構(gòu)域和內(nèi)部含有富含谷氨酰胺殘基的串聯(lián)重復(fù)序列,是一種與皮膚角質(zhì)細(xì)胞被膜形成有關(guān)的前體蛋白。RPTN在正常的上皮組織表達(dá),尤其在頂端汗管、頭發(fā)根髓鞘、舌頭纖維狀乳頭處高表達(dá)。S100蛋白,如S100B,在星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤和少突神經(jīng)膠質(zhì)高表達(dá),是神經(jīng)膠質(zhì)的標(biāo)志蛋白,因而被認(rèn)為是精神分裂癥、雙向情感障礙、認(rèn)知功能障礙的敏感標(biāo)志物。S100蛋白在精神分裂癥和雙向情感障礙等精神疾病發(fā)生發(fā)展中的作用可能與Ca2+信號的失調(diào)有關(guān)。神經(jīng)系統(tǒng)中豐富的Ca2+信號主要調(diào)節(jié)腦神經(jīng)節(jié)律、信息加工、學(xué)習(xí)和記憶中突觸可塑性的改變。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究證實(shí)RPTN在小鼠和人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達(dá),尤其在海馬、前額葉和藍(lán)斑核等區(qū)域高表達(dá),這些高表達(dá)的區(qū)域與精神分裂癥、抑郁癥的關(guān)系密切,而抑郁癥和精神分裂癥常累積在大腦的相同區(qū)域。RPTN在小鼠慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激抑郁模型(chronic unp redi-ctable mild stress, CUMS)的海馬以及前額葉中的表達(dá)隨著抑郁的發(fā)展而逐漸降低。RPTN在小鼠CUMS海馬和前額葉中的表達(dá)變化提示其在抑郁等精神類疾病中發(fā)揮了一定的作用。但是,RPTN在神經(jīng)系統(tǒng)的功能及作用機(jī)制還不清楚。本論文就RPTN在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用機(jī)制展開進(jìn)一步的研究。研究內(nèi)容1)正常人血清RPTN水平與年齡、性別之間的相關(guān)性研究2)精神分裂癥病人及慢性吸毒者血清RPTN水平3)非典型的抗精神分裂癥藥物對血清RPTN的影響4)血小板RPTN的檢測5) RPTN啟動子轉(zhuǎn)錄活性的研究6) RPTN結(jié)構(gòu)及生物信息學(xué)預(yù)測7) RPTN在神經(jīng)系統(tǒng)功能的研究研究方法1)研究正常人、精神分裂癥患者、雙向情感障礙患者和吸毒者血清RPTN水平分別收集正常人和這幾種病人的血清,用ELISA方法檢測血清RPTN水平。用單因素方差分析不同年齡(30-80歲)和不同性別正常人血清RPTN的水平。2)研究正常小鼠、注射抗精神病藥小鼠和CUMS小鼠血清RPTN的水平將36只正常小鼠分四組,其中11只為對照,其余分三組腹腔分別注射奧氮平、喹硫平、阿立哌唑這三種常見的抗精神病藥物,共24天。將另外的27只正常小鼠單籠飼養(yǎng)建立CUMS模型,分別收集正常小鼠、給藥小鼠和CUMS小鼠血清,用ELISA方法檢測血清RPTN的水平,并用單因素方差分析。3)研究正常人和精神分裂癥患者血小板RPTN水平收集正常人和精神分裂癥患者血液,分離血小板,用ELISA方法檢測血小板RPTN的水平,并用t檢驗(yàn)分析。4)研究奧氮平、DOI和Ca2+對RPTN啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響首先構(gòu)建pGL2-RPTN promoter報(bào)告基因載體,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,于6小時(shí)后分別加入奧氮平,DOI, CaCl2,于48小時(shí)后檢測報(bào)告基因熒光素酶活性,并用單因素方差分析。5) RPTN生物信息學(xué)結(jié)構(gòu)預(yù)測對比分析RPTN的蛋白序列,預(yù)測了RPTN的LIR結(jié)構(gòu)域。用COTH方法,預(yù)測了RPTN與突觸核蛋白、老年癡呆癥標(biāo)志蛋白、腦組織微管蛋白和精神分裂癥斷裂基因-1之間二聚體的形成并計(jì)算了顯著性參數(shù)。6) RPTN在神經(jīng)系統(tǒng)功能的研究分離并培養(yǎng)小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞,用免疫組織化學(xué)的方法檢測RPTN在小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞的表達(dá)方式。將HEK293T細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pCDNA-3.1 control載體和pcDNA-3.1-RPTN ORF載體,用雷帕霉素誘導(dǎo)24小時(shí),用細(xì)胞自噬試劑盒檢測過表達(dá)RPTN對細(xì)胞自噬的影響。研究結(jié)果1)與正常人相比,精神分裂癥患者血清RPTN水平顯著降低(p0.0001),雙向情感障礙患者血清RPTN水平顯著降低(p0.005),精神分裂癥和雙向情感障礙患者之間血清RPTN水平差異不顯著。與正常人相比,吸毒者血清RPTN水平顯著降低(p0.0001)；精神分裂癥患者血清RPTN水平顯著低于吸毒者(p0.0001)。2)非典型的抗精神病藥奧氮平使小鼠血清RPTN水平顯著升高(p0.0001)；喹硫平使小鼠血清RPTN水平顯著升高(p0.05)；注射阿立哌唑的小鼠血清RPTN和對照小鼠相比差異不顯著。3)與正常人相比精神分裂癥患者血小板RPTN水平顯著降低(P0.05)。4)奧氮平使RPTN啟動子轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(qiáng)(p0.05),Ca2+使RPTN啟動子轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(qiáng)(p0.01),DOI對RPTN啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響差異不顯著。5)對比分析了RPTN的蛋白序列,發(fā)現(xiàn)RPTN的N-端44-47位及74-77位氨基酸存在F_LIR及Y_LIR結(jié)構(gòu)。RPTN與突觸核蛋白α-synuclein、老年癡呆癥標(biāo)志蛋白β-amyoid、腦組織微管蛋白tau和精神分裂癥斷裂基因-1DISCI之間能夠形成二聚體且顯著性參數(shù)都大于閾值2.5。6)免疫組織化學(xué)方法證明在小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞RPTN主要以點(diǎn)狀在胞漿表達(dá)。過表達(dá)人RPTN能夠增強(qiáng)雷帕霉素誘導(dǎo)的HEK 293T細(xì)胞的自噬作用。研究結(jié)論1)精神分裂癥患者、雙向情感障礙患者和吸毒者血清RPTN水平顯著降低,甚至缺失。2)非典型的抗精神分裂癥藥物奧氮平使小鼠血清RPTN水平顯著升高。3)精神分裂癥患者血小板RPTN水平顯著降低。4)Ca2+和奧氮平使RPTN的啟動子轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)。5) RPTN的N-端44-47位及74-77位氨基酸存在F_LIR及Y_LIR結(jié)構(gòu)。6) RPTN與突觸核蛋白α-synuclein、老年癡呆癥標(biāo)志蛋白β-amyoid、腦組織微管蛋白tau和精神分裂癥斷裂基因-1DISCI之間能夠形成二聚體且顯著性參數(shù)都大于閾值2.5。7) RPTN在小鼠的腦神經(jīng)干細(xì)胞主要以點(diǎn)狀在胞漿表達(dá)。8) RPTN能夠增強(qiáng)雷帕霉素誘導(dǎo)的HEK 293T細(xì)胞自噬作用。
【關(guān)鍵詞】：Repetin 精神分裂癥 S100蛋白 Ca~(2+)信號
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.3
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-14
• 縮略詞表14-15
• 第1章 引言15-21
• 1 Repetin(RPTN)概述15-18
• 1.1 RPTN基因15
• 1.2 人RPTN蛋白氨基酸序列和特征15
• 1.3 RPTN蛋白表達(dá)的研究15-16
• 1.4 RPTN是S100蛋白家族新成員16-17
• 1.5 RPTN在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用17-18
• 2 精神分裂癥和雙向情感障礙18-19
• 2.1 精神分裂癥和雙向情感障礙研究進(jìn)展18
• 2.2 非典型的抗精神疾病藥奧氮平在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用18-19
• 3 研究目的和意義19-21
• 第2章 精神類疾病患者血清RPTN水平21-27
• 1 材料和試劑21-22
• 1.1 主要材料21
• 1.2 主要試劑21
• 1.3 主要試劑的配制21-22
• 1.4 主要儀器22
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法22-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)流程22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析23-24
• 3.1 精神分裂癥和雙向情感障礙患者血清RPTN的比較23
• 3.2 不同年齡和不同性別正常人血清RPTN的比較23-24
• 3.3 吸毒者與其年齡相近正常人血清RPTN的比較24
• 4 結(jié)論24-25
• 5. 討論25-27
• 第3章 正常人、精神分裂癥患者血小板RPTN水平27-31
• 1 材料和試劑27-28
• 1.1 主要材料27
• 1.2 主要試劑27
• 1.3 主要試劑的配制27-28
• 1.4 主要儀器28
• 2 實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 2.1 血小板的分離28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)流程28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理28-29
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析29
• 4 結(jié)論29
• 5 討論29-31
• 第4章 非典型抗精神分裂癥藥對小鼠血清RPTN的影響31-35
• 1 材料和試劑31
• 1.1 主要材料31
• 1.2 主要試劑31
• 1.3 主要試劑的配制31
• 1.4 主要儀器31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-32
• 2.1 小鼠腹腔注射抗精神病藥物31-32
• 2.2 小鼠CUMS模型32
• 2.3 實(shí)驗(yàn)流程32
• 2.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析32-33
• 3.1 抗精神病藥物對小鼠血清RPTN的影響33
• 3.2 CUMS小鼠和正常小鼠血清RPTN的比較33
• 4 結(jié)論33
• 5 討論33-35
• 第5章 奧氮平、DOI和Ca~(2+)對TN啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響35-43
• 1 材料和試劑35-36
• 1.1 主要材料35
• 1.2 主要試劑35
• 1.3 主要試劑的配制35-36
• 2 主要儀器36
• 3 實(shí)驗(yàn)流程36-40
• 3.1 pGL2-RPTN promoter報(bào)告基因載體的構(gòu)建36-38
• 3.2 熒光素酶報(bào)告基因活性的檢測38-40
• 3.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與準(zhǔn)備38-39
• 3.2.2 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pGL2-RPTN promoter表達(dá)載體39
• 3.2.3 熒光素酶報(bào)告基因測定39-40
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析40
• 5 結(jié)論40-41
• 6 討論41-43
• 第6章 RPTN在神經(jīng)系統(tǒng)作用的研究43-51
• 1 材料和試劑43-44
• 1.1 主要材料43
• 1.2 主要試劑43
• 1.3 主要儀器43
• 1.4 主要試劑配制43-44
• 2 實(shí)驗(yàn)方法44-46
• 2.1 小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞RPTN的表達(dá)44-45
• 2.1.1 小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞的分離及培養(yǎng)44
• 2.1.2 小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞爬片的制備44-45
• 2.1.3 免疫組織化學(xué)法檢測RPTN在小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞的表達(dá)45
• 2.2 細(xì)胞自噬45-46
• 2.2.1 細(xì)胞爬片及處理45-46
• 2.2.2 細(xì)胞自噬的檢測46
• 2.3 RPTN的生物信息學(xué)分析46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析46-49
• 3.1 RPTN與神經(jīng)精神疾病基因之間的聯(lián)系46-47
• 3.2 RPTN在小鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞的表達(dá)47
• 3.3 RPTN對細(xì)胞自噬的影響47-49
• 4 結(jié)論49
• 5 討論49-51
• 第7章 討論51-55
• 第8章 總結(jié)與展望55-59
• 參考文獻(xiàn)59-69
• 致謝69-71
• 攻讀碩士期間研究成果71

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐捷;Repetin與精神分裂癥關(guān)系的研究[D];陜西師范大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：Repetin與精神分裂癥關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：407216