本課題的目的在于建立表達(dá)α7的分子生物學(xué)方法，通過研究α7和Aβ1-42在體內(nèi)和體外的關(guān)系，初步探討α7在Alzheimer病發(fā)病機(jī)制中的作用；尋找反映AD患者α7變化的指標(biāo)，為AD的實驗室檢查提供一種新的手段。第一部分應(yīng)用PCR方法，以胎腦cDNA為模板，擴(kuò)增出編碼α7的全長cDNA序列，經(jīng)克隆、測序鑒定后，構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pNASS-CMV-α7-Neo和體外合成質(zhì)粒5’-UTR-α7-pSP64polyA，在H4細(xì)胞中表達(dá)α7并在體外合成有活性的α7，在此基礎(chǔ)上，在細(xì)胞水平和蛋白質(zhì)水平觀察α7和Aβ1-42的結(jié)合。結(jié)果顯示：體外合成的活性α7在一定條件下能與Aβ1-42進(jìn)行牢固的結(jié)合；α7在H4細(xì)胞中有高效、穩(wěn)定的表達(dá)，但表達(dá)部位主要在細(xì)胞內(nèi)，不適合進(jìn)一步的功能研究；在克隆過程中還發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)除α7外，尚存在α7的兩種可變剪接（外顯子4缺失和外顯子4、5缺失兩種）。第二部分應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，觀察α7在3例臨床和病理證實的AD患者腦中的表達(dá)及與Aβ1-42的關(guān)系�？功�7和抗Aβ1-42分別染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)：AD腦中有α7的異常沉積，其沉積部位與Aβ1-42形成的老年斑的沉積部位一致，主...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 α7nAChR的克隆、表達(dá)及與Aβ的結(jié)合
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
第二部分 α7nAChR在AD腦中的表達(dá)及與Aβ的關(guān)系
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
第三部分 AD患者周圍血α7及duplicate α7 mRNA水平的檢測
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
全文結(jié)語
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表論文



本文編號：3903064