目的構(gòu)建Complexin-1/2（CPLX-1/2）基因的重組腺相關(guān)病毒過(guò)表達(dá)載體p AAV-CPLX-1/2并研究其在阿爾茨海默病記憶損傷中的作用。方法將用Oligo 7軟件對(duì)Genbank上小鼠CPLX-1/2m RNA的CDS兩端序列進(jìn)行分析,合成CPLX-1/2基因,構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Top10;選取正確的克隆進(jìn)行PCR和測(cè)序鑒定。重組腺相關(guān)病毒載體測(cè)序正確后,轉(zhuǎn)染AAV293細(xì)胞,包裝腺相關(guān)病毒。將重組腺相關(guān)病毒經(jīng)腦立體定位注射到三轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病（3XTg-AD）小鼠海馬CA3區(qū),經(jīng)免疫組化和Western-Blot檢測(cè)CPLX-1/2蛋白表達(dá)情況,水迷宮檢測(cè)CPLX-1/2過(guò)表達(dá)對(duì)3XTg-AD小鼠記憶的影響。結(jié)果 PCR及測(cè)序結(jié)果表明成功構(gòu)建了含小鼠CPLX-1/2基因的重組腺相關(guān)病毒表達(dá)載體。CPLX-1/2在海馬CA3表達(dá)顯著增加。CPLX-1/2過(guò)表達(dá)顯著改善3XTg-AD小鼠的記憶損傷。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了CPLX-1/2重組腺相關(guān)病毒過(guò)表達(dá)載體并在整體動(dòng)物水平成功高效表達(dá);CPLX-1/2過(guò)表達(dá)可顯著改善3XTg-AD小鼠空間記憶的損傷。為在整... 

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
    1.2 主要材料與儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 PCR擴(kuò)增CPLX-1、CPLX-2基因
        1.3.2目的基因同源重組入表達(dá)載體
        1.3.3轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞及陽(yáng)性克隆鑒定
        1.3.4腺相關(guān)病毒AAV9包裝
        1.3.5腺相關(guān)病毒滴度檢測(cè)
        1.3.6腦立體定位注射
        1.3.7腦組織冰凍切片
        1.3.8 Western blot
        1.3.9行為學(xué)檢測(cè)
    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2結(jié)果
    2.1 PCR擴(kuò)增目的基因片段
    2.2菌落PCR鑒定結(jié)果
    2.3 陽(yáng)性克隆測(cè)序結(jié)果
    2.4 腺相關(guān)病毒滴度的測(cè)定
    2.5 3XTg-AD小鼠腦組織免疫組化染色
    2.6 3XTg-AD小鼠海馬區(qū)CPLX-1/2蛋白變化
    2.7CPLX-1/2 過(guò)表達(dá)對(duì)3XTg-AD小鼠學(xué)習(xí)能力的影響
    2.8CPLX-1/2 過(guò)表達(dá)對(duì)3XTg-AD小鼠記憶能力的影響
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]電針對(duì)SAMP8小鼠行為學(xué)及APP mRNA和BACE-1 mRNA影響[J]. 郎尉雅,張海燕,劉忠錦.  中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志. 2015(05)



本文編號(hào)：3696731