目的:精神分裂癥是一種復(fù)雜的大腦功能紊亂疾病,總體發(fā)病率接近1%。大量研究表明中樞神經(jīng)細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)紊亂、遺傳基因突變所致神經(jīng)發(fā)育異常、神經(jīng)細(xì)胞能量代謝障礙等因素與精神分裂癥發(fā)生密切相關(guān)。線粒體作為調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞能量代謝重要細(xì)胞器,在神經(jīng)遞質(zhì)合成釋放、神經(jīng)干細(xì)胞分化發(fā)育等重要環(huán)節(jié)都具有重要作用。本課題組離體試驗研究首次發(fā)現(xiàn)第二代非典型抗精神分裂癥藥物奧氮平在神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1（NRG1）介導(dǎo)下對精神分裂癥樣線粒體功能障礙具有顯著治療作用。為從整體動物水平驗證奧氮平以上線粒體保護作用與NRG1的關(guān)系,并進(jìn)一步探索下游調(diào)控機制開展了本研究。方法:在第一部分研究中,本組采用CRISPR/Cas 9技術(shù)構(gòu)建了NRG1整體敲除（NRG1 KO）小鼠模型,分別采用qRT-PCR、Western Blot和免疫組化法驗證了腦內(nèi)NRG1表達(dá)水平;設(shè)立野生型組（WT）、MK801組、NRG1 KO組、NRG1 KO+Olanzapine組,分別采用曠場實驗檢測小鼠自發(fā)活動、前脈沖抑制（PPI）法檢測感覺門控功能、社交實驗檢測小鼠社交能力、Morris水迷宮檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶能力對小鼠行為學(xué)進(jìn)行評價;使用透射電... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞中英文注釋表
第一章 引言
    1.1 精神分裂癥概述
        1.1.1 精神分裂癥的發(fā)病機制研究進(jìn)展
        1.1.2 精神分裂癥的診斷與治療
    1.2 精神分裂癥與線粒體研究進(jìn)展
        1.2.1 線粒體與精神分裂癥的發(fā)病機制研究
            1.2.1.1 線粒體超微結(jié)構(gòu)改變與精神分裂癥的風(fēng)險
            1.2.1.2 線粒體氧化磷酸化與精神分裂癥
            1.2.1.3 mtDNA變異與精神分裂癥風(fēng)險
            1.2.1.4 線粒體與精神分裂癥易感基因之間的功能相互作用
        1.2.2 線粒體參與精神分裂癥藥效學(xué)研究
    1.3 NRG1 突變與精神分裂癥的發(fā)生與發(fā)展
        1.3.1 NRG1 蛋白的結(jié)構(gòu)和下游信號通路
        1.3.2 精神分裂癥患者NRG1-ErbB4 信號的病理改變
        1.3.3 NRG1-ErbB4 的轉(zhuǎn)基因精神分裂癥模型的研究
        1.3.4 抗精神病治療對NRG1-ErbB4 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響
    1.4 miRNA在精神分裂癥中的研究進(jìn)展
    1.5 本課題組前期研究基礎(chǔ)
    1.6 本課題研究思路
第二章 奧氮平對NRG1敲除小鼠精神分裂癥樣行為異常與線粒體功能紊亂無效
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 藥品與試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 動物分組與給藥
        2.2.2 qRT-PCR檢測小鼠腦組織mRNA水平
        2.2.3 Western blot檢測小鼠腦蛋白表達(dá)水平
        2.2.4 免疫組化檢測小鼠腦內(nèi)蛋白水平
        2.2.5 曠場實驗檢測小鼠自發(fā)活動
        2.2.6 前脈沖抑制(PPI)法檢測感覺門控功能
        2.2.7 社交實驗檢測小鼠社交能力
        2.2.8 Morris水迷宮檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶能力
        2.2.10 透射電鏡觀察小鼠大腦線粒體超微結(jié)構(gòu)
        2.2.11 Ca~(2+)誘導(dǎo)法檢測小鼠腦線粒體腫脹
        2.2.12 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 基因工程小鼠模型NRG1 mRNA與蛋白表達(dá)明顯降低
        2.3.2 NRG1 KO會導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)精神分裂癥樣行為異常
        2.3.3 NRG1 KO不會導(dǎo)致小鼠學(xué)習(xí)記憶能力受損
        2.3.4 奧氮平無法有效逆轉(zhuǎn)NRG1KO導(dǎo)致的小鼠精神分裂癥樣行為異常
        2.3.5 NRG1 KO會導(dǎo)致小鼠腦內(nèi)線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變
        2.3.6 奧氮平無法有效逆轉(zhuǎn)NRG1KO導(dǎo)致的小鼠腦內(nèi)線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變
        2.3.7 NRG1 KO會導(dǎo)致小鼠腦線粒體腫脹
        2.3.8 奧氮平無法有效逆轉(zhuǎn)NRG1 KO導(dǎo)致的小鼠腦線粒體腫脹
    2.4 本章小結(jié)
第三章 miR-143-3p是 NRG1 通路下游參與奧氮發(fā)揮抗精分樣線粒體損傷的靶點之一
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 藥品與試劑
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 miRNA-seq技術(shù)篩選NRG1 KO小鼠腦組織中表達(dá)敏感miRNA分子群
        3.2.2 SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.3 大鼠皮層原代神經(jīng)元細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.4 qRT-PCR檢測NRG1和miR-143-3p表達(dá)水平
        3.2.5 MTT法檢測細(xì)胞活性
        3.2.6 建立miR-143-3p mimic和 miR-143-3p inhibitor細(xì)胞模型
        3.2.7 MitoSOX Red探針法檢測線粒體ROS水平
        3.2.8 JC-1 染色檢測線粒體膜電位
        3.2.9 Western blot檢測細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)水平
        3.2.10 統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 WT& NRG1 KO小鼠腦組織miRNA測序
        3.3.2 NRG1 KO小鼠腦組織miR-143-3p表達(dá)量降低
        3.3.3 NRG1 KD細(xì)胞中miR-143-3p表達(dá)量降低
        3.3.4 奧氮平細(xì)胞水平藥物安全濃度探索
        3.3.5 奧氮平誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞miR-143-3p水平升高
        3.3.6 miR-143-3p低表達(dá)會導(dǎo)致的細(xì)胞線粒體ROS水平升高
        3.3.7 奧氮平可以抑制miR-143-3p低表達(dá)導(dǎo)致的細(xì)胞線粒體ROS水平升高
        3.3.8 miR-143-3p低表達(dá)會導(dǎo)致的細(xì)胞線粒體膜電位水平降低
        3.3.9 奧氮平可以抑制miR-143-3p低表達(dá)導(dǎo)致的細(xì)胞線粒體膜電位水平降低
    3.4 本章小結(jié)
第四章 miR-143-3p靶向CKMT調(diào)控奧氮平對精分樣線粒體功能異常的藥效
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細(xì)胞株
        4.1.2 藥品與試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與分組
        4.2.2 轉(zhuǎn)錄組測序檢測miR-143-3p過表達(dá)細(xì)胞敏感mRNA分子群
        4.2.3 qRT-PCR檢測細(xì)胞CKMT和 miR-143-3p表達(dá)水平
        4.2.4 Western blot檢測細(xì)胞CKMT水平
        4.2.5 免疫染色檢測細(xì)胞CKMT表達(dá)水平
        4.2.6 雙熒光素酶報告探針檢測miR-143-3p靶基因
        4.2.7 統(tǒng)計分析
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 miR-143-3p過表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞敏感mRNA分子群
        4.3.2 miR-143-3p與 CKMT1B在細(xì)胞中mRNA水平負(fù)相關(guān)
        4.3.3 miR-143-3p與 PAPPA在細(xì)胞中mRNA水平無明顯相關(guān)性
        4.3.4 雙熒光素酶報告探針驗證CKMT1B為 miR-143-3p靶基因
        4.3.5 奧氮平可以降低miR-143-3p inhibitor所導(dǎo)致的CKMT1B細(xì)胞蛋白水平升高
    4.4 本章小結(jié)
第五章 討論
    5.1 NRG1 是參與奧氮平改善精神分裂癥樣線粒體損傷作用的重要基因
    5.2 miR-143-3p是 NRG1 下游評價奧氮平對精分樣線粒體功能異常的藥效的重要靶點之一
    5.3 CKMT1B可能是miR-143-3p下游參與奧氮平抗精神分裂癥樣線粒體損傷作用的靶基因
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    展望
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文及參與課題情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重性精神疾病管理治療項目在精神分裂癥防治中的價值研究[J]. 艾春啟,陳生梅.  中國民康醫(yī)學(xué). 2013(22)



本文編號：3632482