本文關鍵詞：抑制JNK信號通路調控APP代謝及Aβ生成的作用及其機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】已有的研究表明,c-Jun N-末端激酶(JNK)的激活可能參與了阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)多個主要病理損害過程。然而,在成年轉基因AD小鼠模型中特異性抑制JNK的活性,能否防止AD病變的進展仍未闡明。本實驗以成年APPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠為研究對象,使用JNK特異性小分子激酶抑制劑SP600125,探討其對AD轉基因小鼠認知功能障礙、腦內Aβ產生及沉積、Tau蛋白磷酸化的治療作用及其相關機制�！静牧戏椒ā恳源菩訟PPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠及與其相匹配的非轉基因野生型C57小鼠(WT)為研究對象,使用SP600125腹腔內注射12周后斷頭取腦。分別采用免疫組化染色和熒光染色方法檢測Aβ彌漫性淀粉樣斑塊和纖維性斑塊的沉積情況;采用ELISA方法檢測腦組織中可溶性和不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42及Aβ寡聚體的含量變化情況;采用Western blot方法檢測Tau蛋白磷酸化及影響Aβ和Tau蛋白產生的各種酶類的表達變化情況�！窘Y果】1、以WT小鼠為對照,APPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠大腦皮質和海馬中APP、過磷酸化APP(p-APP)及磷酸化JNK(p-JNK)的表達水平均顯著增加;以PBS溶媒治療的APPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠對照組相比,使用JNK特異性小分子激酶抑制劑SP600125治療后,可以顯著降低p-APP和p-JNK的含量。2、與PBS溶媒治療對照組相比,使用SP600125治療可以顯著改善APPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠的空間學習和記憶功能。3、在APP相關代謝研究中,與PBS溶媒治療對照組相比,使用SP600125治療可以明顯增加APPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠大腦皮層和海馬組織中ADAM10(α-分泌酶主要成分)的表達,顯著降低BACE1(β-分泌酶主要成分)和PS1(γ-分泌酶主要成分)的表達;進而明顯增加α-分泌酶裂解產物——可溶性APPα(s APPα)的含量,同時顯著降低β-分泌酶裂解產物——可溶性APPβ(s APPβ)的含量;最終顯著降低轉基因AD小鼠大腦皮質和海馬中可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42和Aβ寡聚體的含量及其沉積;而對腦啡肽酶(NEP)和胰島素降解酶(IDE)等Aβ相關降解酶的表達均無顯著影響。4、在Tau蛋白的研究中,與PBS溶媒治療對照組相比,使用SP600125治療可以明顯降低APPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠大腦皮層和海馬組織中Thr205及Ser235位點過磷酸化Tau蛋白的含量;而對于可能促進Tau蛋白磷酸化的CDK5和GSK3β的表達并無顯著影響�！窘Y論】使用JNK特異性小分子激酶抑制劑SP600125治療APPswe/PS1d E9轉基因AD小鼠,可以通過抑制JNK活性顯著降低磷酸化Tau蛋白含量,并通過減少APP過磷酸化、促進α-分泌酶裂解并抑制β-分泌酶裂解APP過程,進而顯著降低Aβ的含量及其沉積,改善轉基因AD小鼠的空間學習和記憶功能。表明使用SP600125治療AD可以顯著減少Aβ產生及Tau蛋白磷酸化等病理損害過程,改善AD相關認知功能損害。提示JNK的活化在AD病理損害中發(fā)揮著重要作用,而其特異性抑制劑SP600125可能是一種潛在的具有治療AD作用的新型藥物。
【關鍵詞】：阿爾茨海默病 c-Jun氨基末端激酶 β-淀粉樣蛋白 認知功能障礙 AD轉基因小鼠
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-25
• 1 材料25-27
• 1.1 實驗動物25
• 1.2 主要實驗試劑25-27
• 1.3 主要實驗儀器27
• 2 實驗方法27-39
• 2.1 實驗分組27-28
• 2.2 Morris水迷宮實驗28-29
• 2.3 小鼠腦組織準備29-30
• 2.4 免疫組織化學和熒光染色實驗30
• 2.5 腦內Aβ淀粉樣斑塊沉積的量化分析30-31
• 2.6 生化檢測樣本的制備31-32
• 2.7 使用 ELISA 方法檢測可溶性、不可溶 Aβ和 Aβ Oligomer 含量32-37
• 2.8 使用 Western 方法檢測 Aβ代謝及 Tau 蛋白磷酸化相關蛋白的表達37-39
• 3 實驗結果39-53
• 3.1 SP600125 可顯著改善APP/PS1 小鼠空間學習和記憶功能損害39-41
• 3.2 SP600125 可顯著降低APP/PS1 小鼠腦內磷酸化JNK（p-JNK）水平41-43
• 3.3 SP600125 可顯著降低APP/PS1 小鼠腦內Aβ含量及斑塊沉積43-47
• 3.4 SP600125 可調控APP/PS1 小鼠腦內APP的代謝47-49
• 3.5 SP600125 可調控APP/PS1 小鼠腦內APP代謝相關酶的表達49-51
• 3.6 SP600125 可顯著降低APP/PS1 小鼠腦內Tau蛋白的磷酸化51-53
• 4 討論53-56
• 小結56-58
• 參考文獻58-75
• 個人簡歷和研究成果75-76
• 致謝76

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