本研究采用MTT及熒光染色法檢測Aβ（25-35）對PC12細胞的毒性;首次采用差異凝膠電泳（DIGE）和質譜（MS）技術分析Aβ（25-35）引起的蛋白質組學改變。本研究,成功地建立了Aβ誘發(fā)PC12細胞損傷的符合國際標準的AD細胞模型,首次發(fā)現(xiàn)并鑒定了Aβ（25-35）誘導的PC12細胞中的早期蛋白質組學改變。質譜鑒定出7個蛋白。所鑒定的差異表達蛋白可分為3類:①具有分子伴侶活性的蛋白:葡萄糖調節(jié)蛋白75（glucose-regulated protein75,GRP75）、熱休克同源蛋白71（heat shock cognate 71 kDa protein,HSC71）、calreticulin,這些蛋白的表達量均上調。②細胞骨架蛋白:β-微管蛋白（tubulin beta chain 15,TBETA-15）和低分子量神經細絲（neurofilament light polypeptide,NF-L）,它們的表達量亦上調。③與能量代謝有關的酶:肌酸激酶B （creatine kinase-B, CKB）和醛縮酶A（aldolase A）,這兩種蛋白的表達量均下調。這7個蛋白可... 

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

β(25-35)對大鼠PC12細胞的毒性

存活率％ 66.54±3.29 72.44±4.56 84.73±4.27* 87.12±3.44*注：與未加雷沙吉蘭的20μM Aβ(25-35)處理的對照組比較，*P<0.01。圖2. 雷沙吉蘭對20μM Aβ處理的PC12細胞活性的影響。雷沙吉蘭各種終濃度（0, 0.1, 1, 10μM）預處理PC12細胞1小時后，加入20μM Aβ（25-35）共孵育48小時， MTT法檢測細胞活性。每組為四復孔，重復四次實驗。結果以均值±標準差表示，采用t檢驗，與未加雷沙吉蘭的Aβ（25-35）處理的對照組比較， * p< 0.01。

10 3. 丫啶橙和溴化乙啶染色顯示Aβ(25-35)誘導的PC12細胞凋亡及雷沙吉蘭的防用。（A）對照組正常 PC12 細胞（箭頭示），細胞膜完整，核染色質著綠色并呈正構。凋亡百分率為 2％。（B）20μMAβ(25-35)作用 24 小時的 PC12 細胞，早期凋胞（如箭頭所示）核染色質著明亮綠色并呈固縮狀或圓珠狀。凋亡百分率為 6％C）20μM Aβ(25-35)作用 48 小時的 PC12 細胞，顯示早期和晚期凋亡，晚期凋亡核染色質為橘紅色并呈固縮狀或圓珠狀。凋亡百分率為 13％。（D）1μM 雷沙吉處理 PC12 細胞 1 小時后，再給予 20μM Aβ(25-35)共孵育 48 小時，凋亡細胞明顯，箭頭指示早期凋亡細胞。凋亡百分率為 5％。本實驗中，于多個隨機選擇的視共計數(shù) 300 個細胞，每組實驗重復 3 次，每次實驗中相同條件設 4 個復孔。D 與比，差異顯著(P<0.05)。×400。標尺：25 微米。


本文編號：3551894