原代星形膠質(zhì)細胞α7 nAChRs激活PI3K/Akt信號通路調(diào)控HSP70抑制Aβ寡聚體聚集的機制研究
發(fā)布時間：2021-11-26 13:40
目的:探討激活大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞α7尼古丁乙酰膽堿受體（nicotinic acetylcholine receptor,nAChRs）后通過激活PI3K/Akt信號通路調(diào)控HSF1、HSP70對Aβ寡聚體聚集的影響。方法:分離剛出生SD大鼠乳鼠大腦皮質(zhì)的星形膠質(zhì)細胞進行培養(yǎng)、純化并傳代,應用細胞免疫熒光的方法鑒定細胞的純度;體外制備Aβ1-42寡聚體;當細胞培養(yǎng)至21-29天時,此時經(jīng)過傳化培養(yǎng)后的原代星形膠質(zhì)細胞基本成熟,將細胞分為空白對照組、α7 nAChRs激動劑（Nicotine、S24795、PNU282987）組、單獨α7 nAChRs阻斷劑（MLA）組、α7 nAChRs激動劑聯(lián)合MLA處理組、單獨PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002組、α7 nAChRs激動劑聯(lián)合LY294002處理組以及單獨的Aβ組、激動劑（Nicotine、S24795、PNU282987）+Aβ組、阻斷劑LY294002+Aβ組�？瞻讓φ战M不經(jīng)過任何處理;α7 nAChRs激動劑組分別加入5μM/L三種不同的激動劑處理細胞6、12、18及24 h;單獨α7 ...
【文章來源】：貴州醫(yī)科大學貴州省
【文章頁數(shù)】：74 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
實驗研究假設圖
星形膠質(zhì)細胞胞體變大，分支增多，增值生長迅速。此圖為培養(yǎng) 26 天時星形膠質(zhì)細胞形態(tài)。見圖2-1。圖 2-1 光鏡下星形膠質(zhì)細胞的形態(tài)圖（x200）Fig. 2-1 Primary cultured astrocytes obsered under light microscope2.1.2 星形膠質(zhì)細胞的免疫熒光鑒定待星形膠質(zhì)細胞成熟（21 天）后，采用膠質(zhì)細胞進行特異性蛋白抗體（GFAP）對其進行熒光染色。在尼康倒置顯微鏡下觀察可見：星形膠質(zhì)細胞（GDAP）被標記呈紅色，細胞核被 DAPI 染成藍色，而陰性對照組未檢測到熒光。見圖 2-2（A、B）。細胞計數(shù)當星形膠質(zhì)細胞數(shù)量占所有細胞數(shù)量的 98% 以上時，培養(yǎng)的細胞可用于后續(xù)實驗。
質(zhì)細胞（呈紅色），DAPI 染細胞核（一抗 GFAP（陰性對照組）; Scale bar= 星形膠質(zhì)細胞細胞免疫熒光染色圖(×2unofluorescence staining of primary g結(jié)果寡聚體的聚集情況，結(jié)果顯示各種子量的多聚體較多。見圖 2-3。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]β-淀粉樣蛋白1-42寡聚體的制備、鑒定及其對星形膠質(zhì)細胞的作用[J]. 黃小玉,楊燦洪,黃曉敏,麥漢滔,呂田明. 中華神經(jīng)醫(yī)學雜志. 2017 (02)
[2]PNU上調(diào)大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞內(nèi)源性Cryab抑制Aβ聚集[J]. 任真奎,楊梅,官志忠,禹文峰. 中國老年學雜志. 2016(22)
[3]激活星形膠質(zhì)細胞α7乙酰膽堿能受體抑制β-淀粉樣蛋白的聚集[J]. 孔欣,禹文峰,官志忠. 中國老年學雜志. 2016(13)
[4]大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞尼古丁型乙酰膽堿受體的表達[J]. 孔欣,禹文峰,官志忠. 中國細胞生物學學報. 2016(04)
[5]星形膠質(zhì)細胞在阿爾茨海默病發(fā)病機制中的作用[J]. 劉艷秋,盛樹力,張新卿. 中華老年多器官疾病雜志. 2016 (02)
[6]熱休克蛋白70對神經(jīng)炎癥的調(diào)節(jié)作用[J]. 余文雯,鮑秀琦,孫華,張丹. 藥學學報. 2015(08)
[7]星形膠質(zhì)細胞與阿爾茨海默病[J]. 呂田明,史翠麗,梁彥珊,黃小玉. 中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2014(09)
[8]SD大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞的體外原代培養(yǎng)[J]. 湯婷婷,官志忠,禹文峰. 貴陽醫(yī)學院學報. 2014(02)
[9]阿爾茨海默癥的研究進展[J]. 葛潤. 中外醫(yī)學研究. 2014(09)
[10]熱休克蛋白70在阿爾茨海默病中作用的研究進展[J]. 鮑娟,楊期東. 國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志. 2008(03)
碩士論文
[1]激活原代星形膠質(zhì)細胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控內(nèi)源性Cryab抑制β-淀粉樣蛋白聚集的機制研究[D]. 任真奎.貴州醫(yī)科大學 2017
[2]體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控β-淀粉樣蛋白聚集的作用[D]. 孔欣.貴州醫(yī)科大學 2016
本文編號：3520261
【文章來源】：貴州醫(yī)科大學貴州省
【文章頁數(shù)】：74 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
實驗研究假設圖
星形膠質(zhì)細胞胞體變大，分支增多，增值生長迅速。此圖為培養(yǎng) 26 天時星形膠質(zhì)細胞形態(tài)。見圖2-1。圖 2-1 光鏡下星形膠質(zhì)細胞的形態(tài)圖（x200）Fig. 2-1 Primary cultured astrocytes obsered under light microscope2.1.2 星形膠質(zhì)細胞的免疫熒光鑒定待星形膠質(zhì)細胞成熟（21 天）后，采用膠質(zhì)細胞進行特異性蛋白抗體（GFAP）對其進行熒光染色。在尼康倒置顯微鏡下觀察可見：星形膠質(zhì)細胞（GDAP）被標記呈紅色，細胞核被 DAPI 染成藍色，而陰性對照組未檢測到熒光。見圖 2-2（A、B）。細胞計數(shù)當星形膠質(zhì)細胞數(shù)量占所有細胞數(shù)量的 98% 以上時，培養(yǎng)的細胞可用于后續(xù)實驗。
質(zhì)細胞（呈紅色），DAPI 染細胞核（一抗 GFAP（陰性對照組）; Scale bar= 星形膠質(zhì)細胞細胞免疫熒光染色圖(×2unofluorescence staining of primary g結(jié)果寡聚體的聚集情況，結(jié)果顯示各種子量的多聚體較多。見圖 2-3。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]β-淀粉樣蛋白1-42寡聚體的制備、鑒定及其對星形膠質(zhì)細胞的作用[J]. 黃小玉,楊燦洪,黃曉敏,麥漢滔,呂田明. 中華神經(jīng)醫(yī)學雜志. 2017 (02)
[2]PNU上調(diào)大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞內(nèi)源性Cryab抑制Aβ聚集[J]. 任真奎,楊梅,官志忠,禹文峰. 中國老年學雜志. 2016(22)
[3]激活星形膠質(zhì)細胞α7乙酰膽堿能受體抑制β-淀粉樣蛋白的聚集[J]. 孔欣,禹文峰,官志忠. 中國老年學雜志. 2016(13)
[4]大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞尼古丁型乙酰膽堿受體的表達[J]. 孔欣,禹文峰,官志忠. 中國細胞生物學學報. 2016(04)
[5]星形膠質(zhì)細胞在阿爾茨海默病發(fā)病機制中的作用[J]. 劉艷秋,盛樹力,張新卿. 中華老年多器官疾病雜志. 2016 (02)
[6]熱休克蛋白70對神經(jīng)炎癥的調(diào)節(jié)作用[J]. 余文雯,鮑秀琦,孫華,張丹. 藥學學報. 2015(08)
[7]星形膠質(zhì)細胞與阿爾茨海默病[J]. 呂田明,史翠麗,梁彥珊,黃小玉. 中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2014(09)
[8]SD大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞的體外原代培養(yǎng)[J]. 湯婷婷,官志忠,禹文峰. 貴陽醫(yī)學院學報. 2014(02)
[9]阿爾茨海默癥的研究進展[J]. 葛潤. 中外醫(yī)學研究. 2014(09)
[10]熱休克蛋白70在阿爾茨海默病中作用的研究進展[J]. 鮑娟,楊期東. 國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志. 2008(03)
碩士論文
[1]激活原代星形膠質(zhì)細胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控內(nèi)源性Cryab抑制β-淀粉樣蛋白聚集的機制研究[D]. 任真奎.貴州醫(yī)科大學 2017
[2]體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控β-淀粉樣蛋白聚集的作用[D]. 孔欣.貴州醫(yī)科大學 2016
本文編號：3520261
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