目的:探討激活大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞α7尼古丁乙酰膽堿受體（nicotinic acetylcholine receptor,nAChRs）后通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控HSF1、HSP70對(duì)Aβ寡聚體聚集的影響。方法:分離剛出生SD大鼠乳鼠大腦皮質(zhì)的星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、純化并傳代,應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光的方法鑒定細(xì)胞的純度;體外制備Aβ_1-42寡聚體;當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至21-29天時(shí),此時(shí)經(jīng)過(guò)傳化培養(yǎng)后的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞基本成熟,將細(xì)胞分為空白對(duì)照組、α7 nAChRs激動(dòng)劑（Nicotine、S24795、PNU282987）組、單獨(dú)α7 nAChRs阻斷劑（MLA）組、α7 nAChRs激動(dòng)劑聯(lián)合MLA處理組、單獨(dú)PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002組、α7 nAChRs激動(dòng)劑聯(lián)合LY294002處理組以及單獨(dú)的Aβ組、激動(dòng)劑（Nicotine、S24795、PNU282987）+Aβ組、阻斷劑LY294002+Aβ組。空白對(duì)照組不經(jīng)過(guò)任何處理;α7 nAChRs激動(dòng)劑組分別加入5μM/L三種不同的激動(dòng)劑處理細(xì)胞6、12、18及24 h;單獨(dú)α7 ... 

【文章來(lái)源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)研究假設(shè)圖

星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體變大，分支增多，增值生長(zhǎng)迅速。此圖為培養(yǎng) 26 天時(shí)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)。見(jiàn)圖2-1。圖 2-1 光鏡下星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)圖（x200）Fig. 2-1 Primary cultured astrocytes obsered under light microscope2.1.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞的免疫熒光鑒定待星形膠質(zhì)細(xì)胞成熟（21 天）后，采用膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行特異性蛋白抗體（GFAP）對(duì)其進(jìn)行熒光染色。在尼康倒置顯微鏡下觀察可見(jiàn)：星形膠質(zhì)細(xì)胞（GDAP）被標(biāo)記呈紅色，細(xì)胞核被 DAPI 染成藍(lán)色，而陰性對(duì)照組未檢測(cè)到熒光。見(jiàn)圖 2-2（A、B）。細(xì)胞計(jì)數(shù)當(dāng)星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量占所有細(xì)胞數(shù)量的 98% 以上時(shí)，培養(yǎng)的細(xì)胞可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

質(zhì)細(xì)胞（呈紅色），DAPI 染細(xì)胞核（一抗 GFAP（陰性對(duì)照組）; Scale bar= 星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞免疫熒光染色圖(×2unofluorescence staining of primary g結(jié)果寡聚體的聚集情況，結(jié)果顯示各種子量的多聚體較多。見(jiàn)圖 2-3。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]阿爾茨海默癥的研究進(jìn)展[J]. 葛潤(rùn).  中外醫(yī)學(xué)研究. 2014(09)
[10]熱休克蛋白70在阿爾茨海默病中作用的研究進(jìn)展[J]. 鮑娟,楊期東.  國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志. 2008(03)

碩士論文
[1]激活原代星形膠質(zhì)細(xì)胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控內(nèi)源性Cryab抑制β-淀粉樣蛋白聚集的機(jī)制研究[D]. 任真奎.貴州醫(yī)科大學(xué) 2017
[2]體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控β-淀粉樣蛋白聚集的作用[D]. 孔欣.貴州醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3520261