阿爾茨海默�。ˋD）是一種以記憶和認(rèn)知功能障礙為主要癥狀的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，是老年癡呆的常見類型。由于AD病因還不是很清楚，目前國內(nèi)外還沒有療效好而無副作用的特效藥物問世。但是有很多遺傳學(xué)和生物化學(xué)證據(jù)表明，在大腦中相互聚集的Aβ是發(fā)病過程中的關(guān)鍵物質(zhì)。動物試驗揭示，無論是主動免疫還是被動免疫均能有效減少轉(zhuǎn)基因鼠腦內(nèi)主要由Aβ相互聚集形成的纖維構(gòu)成的淀粉樣變的量，并且逆轉(zhuǎn)記憶損傷。因此，針對Aβ的免疫治療將是一種非常有前景的治療AD的方法。 本課題方案是根據(jù)Aβ分子的結(jié)構(gòu)特點，設(shè)計兩種可識別Aβ纖維的多肽序列，與人IgG抗體的Fc段重組，構(gòu)成人源化的融合抗體，并應(yīng)用酵母表達體系表達制備。該抗體具有類似天然抗Aβ抗體誘導(dǎo)巨噬細胞清除斑塊的功能，并且由于其Fc段為人源，不會引起人體的炎癥反應(yīng)，對AD的研究和治療具有潛在的理論和應(yīng)用價值。為了鑒定這種融合抗體是否能夠在體內(nèi)發(fā)揮作用，我們需要表達制備含有小鼠Fc段的融合抗體，并將抗體注射入轉(zhuǎn)基因小鼠（APP695）體內(nèi)，觀察該融合抗體在體內(nèi)的作用效果。 前期工作中，我們已經(jīng)構(gòu)建了含有目的基因的單拷貝表達載體PAO815AFc。經(jīng)... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PUC19質(zhì)粒圖譜

一、鼠源融合抗體表達載體的鑒定1.1含有目的基因的PUC19質(zhì)粒酶切鑒定圖鑒定連接入PUC19載體中的目的基因的正確性(圖1一)l。由于目的基因兩端具有EocRI酶切位點，所以可以根據(jù)酶切下來的片段大小來判斷載體中的目的基因是否正確。PUC19空載體約為269kb，連入目的基因(約Ikb)后，其分子量變?yōu)?.69kb。故用EocRI酶切后可以得到.27kb和Ikb兩條帶。1AIFe一PUC19質(zhì)粒(3.69kb)2AIFe一PUC19質(zhì)粒EeoRI3分子量標(biāo)準(zhǔn)DL150004AZFe一PUC19質(zhì)粒(3.69kb)5AZFe一PUC19質(zhì)粒EeoRI酶切(2.7kb，Ikb)酶切(2.7kb，Ikb)﹄Pb()﹄﹄粼25001000250圖1一1EcoRI酶切鑒定質(zhì)粒載體PUC19中的日的基因1.2PUC19質(zhì)粒載體測序結(jié)果:對克隆入融合基因的PUC19一A:Fc和PUC19一AZFc進行測序，結(jié)果正確。姍姍砒森至}磕笙扮、扮蔗、八巍妞\、_、八撲嵌窟瓜八、{袱眾…淤癡心孩、，與僅蘇天了冤二誣韶

圖l一2一ZPUC19一ZFeDNA測序結(jié)果圖1.3含有目的基因的PAOS巧質(zhì)粒酶切鑒定鑒定連接入PAOS巧載體中的目的基因的正確性(圖1一3)。PAOS巧空載體約為7.7kb，由于a因子前導(dǎo)膚序列第23個bp和pAos15載體第6858bp處各有一個pstl位點，所以帶有AapFc基因的EocRI酶切片段，正向連入PAOS巧后應(yīng)能切出一1.SKb的Pstl片斷;若為反向連接，Pstl片斷的長度為.2SKb，所以可以根據(jù)酶切下來的片段大小來判斷載體中的目的基因是否正確。結(jié)果顯示從PA0815載體中切出的片段為1.SKb，證明目的基因插入正確。12345Marker仁bP)1AIF。一PAO815質(zhì)粒(9.skb)ZA:Fe一PAOS15質(zhì)粒(9.skb)3分子量標(biāo)準(zhǔn)DL150004A，F(xiàn)。一PA0815質(zhì)粒Pstl酶切(7.7kb


本文編號：3509206