研究背景β淀粉樣蛋白（amyloid-β,Aβ）存在單體、寡聚物、原纖維、纖維等多種聚集形式,Aβ斑塊沉積作為AD發(fā)病的重要病理學(xué)標(biāo)志,主要以纖維形式聚集而成。已有大量文獻(xiàn)證實(shí)Aβ寡聚物對(duì)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞有明確毒性作用,而Aβ纖維對(duì)于星形膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥誘導(dǎo)作用尚不明確。在AD模型鼠腦中,星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)和基因表達(dá)發(fā)生的顯著變化導(dǎo)致突觸連接中斷,神經(jīng)遞質(zhì)穩(wěn)態(tài)失衡;Aβ斑塊附近的星形膠質(zhì)細(xì)胞變得活躍,發(fā)生反應(yīng)性增生,反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞由此產(chǎn)生更多聚胺降解的有毒分子。異常折疊聚集的Aβ可以與星形膠質(zhì)細(xì)胞上的模式識(shí)別受體結(jié)合,觸發(fā)以炎癥介質(zhì)釋放為特征的固有免疫反應(yīng)。Aβ誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可通過(guò)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞分泌的各種細(xì)胞因子和趨化因子激活細(xì)胞的各種信號(hào)通路導(dǎo)致神經(jīng)退行性病變。因此Aβ纖維誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)及對(duì)神經(jīng)元的影響是AD發(fā)病機(jī)制研究的重要方向。研究目的本研究旨在探討Aβ纖維誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化和增殖所產(chǎn)生的炎癥反應(yīng),包括iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β炎癥介質(zhì)的表達(dá)和MAPKs/NF-κB相關(guān)炎癥通路蛋白的變化,及其對(duì)神經(jīng)元的影響。旨在探討Aβ纖維誘導(dǎo)的星形... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１－２免疫熒光檢測(cè)不同濃度Ａｐ纖維對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響（１００Ｘ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１－２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?Ａ（３?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｎ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?（１００Ｘ）??

?項(xiàng)士學(xué)位論文???１６０－１?…??〇?１４０－?ｎｒ??Ｉ?１２０－??〇Ａｐ〇Ｈｉ?ｍ?１??０?１５?３０?＾?、＜ｄ?＾??圖３－１－３?ＷＢ檢測(cè)不同濃度ＡＰ纖維對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞ＧＦＡＰ表達(dá)的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ａｐ?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｎ?ＧＦＡＰ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?ｂｙ?ＷＢ??本節(jié)研究通過(guò)ＣＣＩＣ－８法檢測(cè)不同濃度下Ａ（３纖維對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率，篩??選出合適的Ａｐ纖維作用濃度（１５ｐｍｏｌ／Ｌ、３０ｐｍ〇ｌ／Ｌ）作為后續(xù)研宄的依據(jù)，結(jié)??果提示直接法和間接法均對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞具有活化作用，且Ａ（３纖維刺激的星形??膠質(zhì)細(xì)胞上清（間接法）在１０－３（Ｖｍ〇ｌ／Ｌ的濃度范圍內(nèi)以濃度依賴(lài)方式間接參與??了星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化并在１５－３０ｐｍ）ｌ／Ｌ明顯增強(qiáng)了?ＡＰ纖維對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的??活化。通過(guò)免疫熒光法檢測(cè)不同濃度ＡＰ纖維對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)，觀(guān)察到ＡＰ纖??維作用后的星形膠質(zhì)細(xì)胞在形態(tài)上呈現(xiàn)活化增殖的改變。ＷＢ檢測(cè)不同濃度ＡＰ??纖維對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞ＧＦＡＰ表達(dá)提示了?Ａ（３纖維濃度與星形膠質(zhì)細(xì)胞的ＧＦＡＰ蛋白??表達(dá)成正比。綜合以上結(jié)果說(shuō)明，ＡＰ纖維在一定濃度下促進(jìn)了星形膠質(zhì)細(xì)胞的??活化和增殖。??３．２?Ａ（ｉ纖維促進(jìn)了星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥介質(zhì)ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－６和??ｉＮＯＳ的表達(dá)??將種于６孔板的第ＩＶ代星形膠質(zhì)細(xì)胞予無(wú)血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)基預(yù)處理??１２ｈ，隨后分別以直接法及間接法作用于預(yù)處理后的星形膠質(zhì)細(xì)胞。直接法：含??有不同濃度的Ａ（３纖維（Ｏ（ｉｍｏｌ／Ｌ、１５｜ｉｍｏｌ／Ｌ、３０｜ｉ

下降且具有統(tǒng)計(jì)??學(xué)意乂（／？星膠－神經(jīng)元１５＾１１１。丨／１＜０．０１），神經(jīng)兀的存活率在由３０（１１１１〇１／１＾八［３纖維濃度刺激??下的星形膠質(zhì)細(xì)胞上清處理后明顯下降，較星膠４申經(jīng)元１５＾ｉｍｏｌ／Ｌ組的存活率更??為低下（／？雖？神經(jīng)元３Ｇｆｉｍｏｌ／Ｌ＜０．０１）。以星股－神經(jīng)兀０｜ＪｉＴｌ〇ｌ／Ｌ為對(duì)照組，＃＾？７＜０．０５，??＜０．０１，?—ｐ＜０．００１〇??１００ｎ??；■芊??�。矗埃�?Ｉ??２０－?■??〇??ｚ?〇Ｊ￣＾??，???Ｉ￣—??圖３－４－１?ＣＣＫ－８檢測(cè)Ａｐ纖維誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元存活率的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ａｐ?ｆｉｂｅｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｂｙ?ＣＣＫ－８??由于動(dòng)物腦內(nèi)組織成分復(fù)雜，其組成細(xì)胞絕大部分為星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)??元，但由于二者相互交織在一起，目前的研宂手段很難將其分離開(kāi)。為將研宄??對(duì)象準(zhǔn)確定位于星形膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元，進(jìn)一步證明上述實(shí)驗(yàn)方法的科學(xué)性、??實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，建立１種利用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ板形成的星形膠質(zhì)細(xì)胞－神經(jīng)元的細(xì)胞??共培養(yǎng)體系，并在此體系基礎(chǔ)上對(duì)原代神經(jīng)元進(jìn)行ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ細(xì)胞凋亡雙??染法檢測(cè)原代神經(jīng)元的凋亡情況，與普通培養(yǎng)基加／換藥方法產(chǎn)生的ＣＣＫ－８細(xì)胞??活性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行一致性比較。??將第ＩＶ代星形膠質(zhì)細(xì)胞以１０％血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)基接種于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上??室中，待培養(yǎng)至細(xì)胞鋪滿(mǎn)上室的８０％－９０％?（此時(shí)下室中同為無(wú)細(xì)胞接種的１０％血??清ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)基），后以


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