目的觀察快速眼動期（REM）睡眠剝奪誘導(dǎo)大鼠焦慮相關(guān)自我修飾行為指標(biāo)以及與血清5-羥色胺（5-HT）濃度的相關(guān)性。方法將24只大鼠隨機分為睡眠剝奪組和對照組,每組12只。對照組大鼠常規(guī)飼養(yǎng),不予干擾睡眠;睡眠剝奪組采用改良的多平臺水環(huán)境法,通過72 h REM睡眠剝奪誘導(dǎo)大鼠焦慮樣行為。造模前后兩組均進(jìn)行曠場（OF）試驗,造模后兩組通過高架O迷宮（EOM）試驗和自我修飾行為分析進(jìn)行焦慮的量化評定,并檢測血清5-HT濃度。結(jié)果造模前,睡眠剝奪組水平和垂直分?jǐn)?shù)與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）;造模后睡眠剝奪組水平和垂直分?jǐn)?shù)均明顯低于對照組（均P<0.01）;睡眠剝奪組進(jìn)入閉合臂次數(shù)多于對照組,進(jìn)入開放臂次數(shù)的百分比低于對照組（均P<0.05）;睡眠剝奪組錯誤的轉(zhuǎn)換次數(shù)（IT）、中斷修飾的次數(shù)、錯誤的轉(zhuǎn)換百分比（IT%）和中斷梳理的百分比均較對照組為高（均P<0.01）;對照組血清5-HT濃度高于睡眠剝奪組,睡眠剝奪組IT%與5-HT濃度之間存在負(fù)向相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論 REM睡眠剝奪誘導(dǎo)了焦慮樣行為,且其中自我修飾行為參數(shù)與血清5-HT... 

【文章來源】：浙江醫(yī)學(xué). 2020,42(14)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

曠場（OF）試驗分析示意圖

EOM試驗是一種廣泛使用的行為學(xué)測試，與高架十字迷宮原理相似[8]，具體方法（見圖2）：試驗前大鼠先于空曠環(huán)境自由活動5 min，試驗開始時，大鼠頭朝開放臂方向放入開放臂與閉合臂的交界處，在5 min內(nèi)觀察行為指標(biāo)：（1）進(jìn)入開放臂次數(shù)（open area entry,OE）：在交界處進(jìn)入開放臂算1次，退出算1次探索結(jié)束；（2）進(jìn)入開放臂的時間（open area time,OT）：在開放臂內(nèi)停留時間；（3）進(jìn)入閉合臂次數(shù)（close area entry,CE）：大鼠交界處進(jìn)入閉合臂算一次，退出算一次探索結(jié)束；（4）進(jìn)入閉合臂的時間（close area time,CT）：閉合臂內(nèi)的停留時間。計算開放臂的進(jìn)入次數(shù)比OE%=OE/（OE+CE）×100%，開放臂停留時間比OT%=OT/（OT+CT）×100%。OE%和OT%與動物的焦慮情緒呈負(fù)相關(guān)。每只大鼠在72 h REM睡眠剝奪后立即接受EOM試驗。將大鼠放在EOM開臂與閉臂的交界處，單擊計算機上的“開始”按鈕，安裝在屋頂上的視頻跟蹤攝像機自動監(jiān)測，每次每只大鼠所花費的時間為5 min。在實驗的各個階段，白噪音始終保持在70 dB。每次實驗后用70%的乙醇溶液擦拭實驗場地[9]，以避免前次大鼠殘留氣味對當(dāng)前實驗的影響。1.4.3 自我修飾微觀結(jié)構(gòu)分析

失眠是一種復(fù)雜的異質(zhì)性疾病，往往伴有焦慮、抑郁、疲勞、消極觀念等。焦慮和失眠具有相當(dāng)大的重疊和共現(xiàn)，并且存在高共病性，且兩者癥狀可能對同樣的治療有反應(yīng)，有共同神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)可能[12]。但目前對失眠引發(fā)的焦慮缺乏穩(wěn)定、統(tǒng)一的研究模型和評估手段，在研究結(jié)果一致性上也存在差異，故本研究通過建立REM睡眠剝奪模型來尋找有效穩(wěn)定的行為學(xué)評估手段，并觀察其神經(jīng)生物學(xué)的變化。睡眠剝奪是指機體因環(huán)境需要而部分或全部喪失正常睡眠量的狀態(tài)[13]，其中REM是睡眠的重要階段，既往有研究發(fā)現(xiàn)，REM睡眠剝奪后，機體不但學(xué)習(xí)能力、記憶力下降，一些焦慮、易激惹等負(fù)面情緒也容易增加[14]。REM睡眠剝奪可能通過改變機體腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的水平，進(jìn)而影響動物的行為[15]。雖然過去已有很多研究顯示了睡眠不足對情緒的影響[16-17]，但對于REM睡眠剝奪是否誘導(dǎo)焦慮行為的研究尚少。要獨立地驗證睡眠剝奪對焦慮樣行為的影響，關(guān)鍵是采用一種嚙齒動物內(nèi)在和先天的自我修飾行為進(jìn)行評估，且該行為與嚙齒類動物的壓力表現(xiàn)高度相關(guān)。修飾是嚙齒動物對高和低壓力的第一行為反應(yīng)[10-11],5-HT參與焦慮和自我修飾、OF、EOM行為的調(diào)節(jié)[18-19]。本研究通過改良多平臺水環(huán)境72 h REM睡眠剝奪方法誘導(dǎo)大鼠焦慮樣行為，并使用梳理的微觀結(jié)構(gòu)、EOM和OF行為參數(shù)作為焦慮標(biāo)志物。結(jié)果表明，OF試驗中，造模后睡眠剝奪組水平和垂直分?jǐn)?shù)均明顯低于對照組；EOM試驗中，睡眠剝奪組的CE多于對照組，OE%低于對照組；自我梳理分析中，IT、NIB、IT%和IB%均較對照組為高，表示睡眠剝奪組存在焦慮樣的行為。可以說自我梳理分析的算法中，IT、NIB、IT%、IB%是作為研究抗焦慮藥物改善焦慮樣行為可靠的標(biāo)記，這同Kalueff等[20]的研究一致，表明修飾微結(jié)構(gòu)的詳細(xì)行為學(xué)分析可以作為焦慮行為藥理學(xué)的有用工具。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]針刺與艾灸對慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激抑郁大鼠前額皮質(zhì)5-羥色胺系統(tǒng)的影響[J]. 丁寧,李瑞,田環(huán)環(huán).  針刺研究. 2016(01)



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